в) Постановка реакции гемагглютинации

19. Реакция гемагглютинации является подготовительным этапом в постановке реакции торможения гемагглютинации

20. Вначале готовят двукратные разведения вируссодержащего материала от 1 : 2 до 1 : 1024. Для этого в ряд лунок или пробирок (схема № 1) наливают физиологический раствор в объеме 0,2 мл. Затем в первую лунку вносят по 0,2 мл вируса, трехкратно пипетируют и переносят 0,2 смеси во вторую и т. д- до требуемого разведения. Из последней лунки 0,2 мл смеси удаляют в дезинфицирующий раствор.

21. В каждую лунку добавляют по 0,2 мл 1%,-ной суспензии эритроцитов. Необходимо ставить контроль па спонтанную агглютинацию эритроцитов (к 0,2 мл физиологического раствора добавляют 0,2 мл 1 %-ной суспензии эритроцитов).

22. Доски с лунками встряхивают и оставляют при комнатной температуре, учет реакции проводят через 30 минут.

23. Положительная реакция гемагглютинации оценивается по форме осадка эритроцитов, которые осаждаются не только на дне, по и на стенках, образуя «зонтик». В случае отрицательной реакции, так же как и в контроле, эритроциты оседают под действием тяжести, образуя на дне лунки диск с ровными краями.

24. Титром вируса считается то наибольшее разведение его, при котором наблюдается еще агглютинация эритроцитов, что и соответствует 1 АЕ.

25. После того как определен титр гемагглютинации вновь выделенного вируса, переходят к постановке реакции торможения гемагглютинации. Последняя основана на способности специфических антител нейтрализовать гемагглютинирующую активность вируса.

26. Для постановки реакции торможения гемагглютинации готовят рабочую дозу вновь выделенного вируса, в 0,2 мл которого содержится 4 АЕ вируса. С этой целью исходный вирус разводят физиологическим раствором во столько раз, сколько получают от деления на 4 цифры, указывающей гемагглютинирующий титр. Например, если титр гемагглютинации 1 : 128, рабочее разведение будет 128: 4 = 32, то есть в 0,2 мл разведенного 1 : 32 вируса будет содержаться 4 АЕ. Для его приготовления необходимо взять 31 мл физиологического раствора и добавить 1 мл исходного вируса. Перед постановкой основного опыта проверяют правильность выбора 4 АЕ. Для этого (схема № 2) берут 5 лунок, в первую " и вторую наливают 4 АЕ по 0,2 мл, то есть выбранное разведение вируса, после чего во вторую, третью, четвертую, пятую лунки наливают до 0,2 мл физиологического раствора. После пипетирования из второй лунки переносят 0,2 мл в третью, из третьей после смешивания — 0,2 мл переносят в четвертую, а затем в пятую, из пятой лунки удаляют 0,2 мл смеси в дезинфицирующий раствор. Таким образом, во 2-й лунке остается 2 АЕ вируса, в 3-й I АЕ, в 4-й—0,5 АЕ, в 5-й—0,25 АЕ. После этого в каждую лунку добавляют по 0,2 мл 1 %-ной суспензии эритроцитов, доски легко встряхивают и оставляют на 30 минут при комнатной температуре- При правильном выборе рабочей дозы (4 АЕ) в 1-й, 2-й, 3-й лунках должна быть полная агглютинация эритроцитов (зонтик); в 4-й лунке агглютинация может быть частичной или отсутствовать, а в 5-й лунке агглютинация не должна быть. Если в 4-й лунке оказывается полная агглютинация, а в 5-й частичная или отсутствует — это означает, что выбранная доза вируса содержит не 4 АЕ, а больше (8 АЕ). В этом случае и доза должна быть соответственно уменьшена вдвое, то есть следует взять 0,2 мл следующего разведения и повторно проверить рабочую дозу. Особенно важно, чтобы в 3-й лунке, где должна быть 1 АЕ вируса, была бы полная агглютинация. Если в ней агглютинация не полная, то выбранная рабочая доза вируса содержит меньше 4 АЕ в 0,2 мл и должна быть увеличена и повторно проверена-

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2020