б) Заражение куриных эмбрионов

4. Для заражения используют эмбрионы 9—10-дневного срока инкубации. Для исследования одной пробы материала заражают не менее 6 эмбрионов.

5. Перед заражением эмбрионы предварительно овоско-пируют, карандашом на скорлупе отмечают границу воздушного пространства (нуги). Сбоку яйца между кровеносными сосудами отмечают участок для прокола скорлупы и инокуляции испытуемого материала Отобранные для заражения эмбрионы переносят в бокс. Скорлупу со стороны нуги и участок, где намечено производить прокол и введение материала, тщательно протирают спиртом и обжигают. В центре воздушного пространства и в месте введения материала сбоку, про-бойником делают отверстия, затем через боковое отверстие на глубину 2—3 мм вводят испытуемый материал в объеме 0,2 мл.

6. После заражения эмбрионов отверстия в скорлупе заливают парафином и переносят их в термостат, где инкубируют в течение 72 часов при температуре 37,5°. В процессе инкубации их овоскоируют один раз в сутки, погибшие эмбрионы до вскрытия сохраняют в холодильнике при 4° С. На третий день инкубации все погибшие и выжившие эмбрионы вскрывают после предварительного их охлаждения при +4" в течение 8 часов.

7. Перед вскрытием скорлупу над воздушным пространством дезинфицируют. Затем на границе с дугой стерильными ножницами срезают скорлупу, осторожно пинцетом снимают гюдскорлупную оболочку, разрывают хориоаллантоис, отгибая в стороны на края скорлупы разорванные участки мембраны. Из одного куриного эмбриона можно собрать 6—9 мл эмбриональной жидкости.

8. Контроль на стерильность взятых образцов эмбриональной жидкости производят путем посева 0,2 мл ее на МП А и МПБ. Посевы выдерживают в термостате в течение 5 дней. Помимо того, взятые из каждого эмбриона образцы эмбриональной жидкости проверяют на гемагглютинирующую активность. При наличии гемагглютинации и отсутствии бактериального загрязнения образец взятой жидкости титруют в реакции гемагглютинации. Если титры ГА выделяемого ви-руса низки, проводят еще 2—3 дополнительно слепых пабсажа его на куриных эмбрионах. При отсутствии ГА активности выделяемого вируса после 2—3 пассажей дальнейшее выделение, вируса из данного образца исследуемого материала прекращают.

Идентификацию выделенного вируса проводят в реакции торможения гемагглютинации с заведомо известными типоспецифическими сыворотками вируса гриппа лошадей.

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2020