2.3. Проведение и параметры ПЦР

Амплификация STR-участок ДНК проводится с использованием технологии ПЦР. В настоящее время компаниями Applied Biosysteros и Finnzymes Diagnostics производятся коммерческие 17-п.тексные наборы для i енотипирования лошадей -StockMarks® for horses и Equine Genotypes tм. оптимизированные для использования на автоматизированном лабораторном оборудовании. При работе с этими наборами 17 локусов STR амплифицирутотся в одной реакции. В панель включены 9 локусов, рекомендованных Международным обществом генетики животных ISAG и 8 дополнительных информативных локусов (табл. 2).

Таблица 2 - Характеристика локусов микросателлитов входящих в рекомендованную панель для генотипирования лошадей

4

5

Для автоматизации дальнейшего процесса детекции продукте амплификации праймеры в коммерческих генотипирующих наборах метятся флуоресцентной краской.

Базовый режим ПЦР для локусов микросателлитов был следующим: предварительная денатурация 10 минут при 95° С (1 цикл), денатурация 30 секунд при 95° С, отжиг праймеров 30 секунд при 60° С, синтез 1 минута при 72° С (всего 30 циклов), окончание реакции на стадии синтеза - 1 час, захолаживание при 4°С.

 

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2020