РИНОПНЕВМОНИЯ

Ринопневмония лошадей (вирусный аборт кобыл, Rhinopneumonitis equorum — лат.; Equine rhmopneumonitis, Equine herpesvirus1, Equine virusabortion — англ.; Rhinopneumonitisvirus der Pferde, Virus abortes der • Stuten — нем.; La rhinopneumonite equine — франц.)—острая контагиозная вирусная болезнь лошадей, характеризующаяся лихорадкой, катаральным воспалением слизистых оболочек верхних дыхательных путей и конъюнктивы, а у жеребых кобыл — внезапными абортами, которые наступают в последней стадии жеребости.

Историческая справка. В 1933 г. Димок и Эдварде (Dimock and Edwards) сообщили о возникновении в штате Кентукки (США) эпизоотического аборта кобыл. Болезнь протекала легко, без осложнений, сопровождаясь массовыми абортами кобыл. Другие клинические признаки отчетливо не проявлялись. При исследовании материалов, взятых из органов абортированных плодов, патогенных микробов обнаружено не было, и авторы предположили, что причиной возникновения этой болезни являлся вирус. В 1936 г. эти же авторы показали, что болезнь, описанная ранее под названием «эпизоотический аборт жеребых кобыл», вызывается вирусом, который образует внутриядерные тельцавключения. С установлением вирусной этиологии эту болезнь стали называть вирусным абортом кобыл.

Маннингер и Чонтош (Manninqer und Csontos, 1941) ввели жеребым кобылам инфекционный материал, полученный от абортированного плода, и вызвали у них появление признаков поражения органов дыхания и аборты. Авторы _считали, что причиной бо лезни служит вирус инфлюэнцы лошадей.

Заболевание, характеризующееся подобными признаками, воспроизвели Долл и Кинтнер (Doll and Kintner, 1954). На основании этих данных авторы разделяли точку зрения, высказанную Маннингером и Чонтошом. Однако в 1957 г. Долл, Брайнс, МакКоллум и Гроу (Doll, Bryans, McCollum and Growe) описали вспышку абортов в большой группе кобыл на племенной ферме в штате Огайо (США). Выделенный при этом вирус отличался от возбудителя инфлюэнцы и был назван вирусом ринопневмонии, который вызывает респираторное заболевание с последующими абортами. Это название правильно отражает сущность болезни и позволяет отличать его от гриппа (инфлюэнцы) лошадей и вирусного артериита:

Петзольдт (Petzoldt, 1970) установил, что так называемая пузырьковая сыпь, или генитальная экзантема кобыл, вызывается вирусом ринопневмонии и, следовательно, эту болезнь нужно рассматривать как генитальную форму ринопневмонии. При заражении культур клеток почек лошади материалами из выделений влагалища и скарифицированных клеток наружных половых органов кобыл с признаками пузырьковой сыпи автор выделил вирус, который по культуральным, физикохимическим свойствам и результатам электронной микроскопии был отнесен к группе герпесвирусов. В опытах перекрестной реакции нейтрализации вирус обнаруживал антигенное родство с вирусом ринопневмонии, но отличался от вируса инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.

При экспериментальном заражении выделенным вирусом жеребят, кобыл и коров установлена патогенность его для жеребят и кобыл. У кобыл, зараженных внутривлагалищно, на 5—7й день на слизистой преддверия появилась мелкая сыпь, которая через 3—4 дня исчезла или перешла в типичные белые пятна, характерные для пузырьковой сыпи в период выздоровления. У одной кобылы был реизолирован вирус; другая кобыла, зараженная интраназально, абортировала.

Возбудитель ринопневмонии лошадей принадлежит к обширной группе герпесвирусов, широко распространенных в природе. Одни из них (вирус ринопневмонии — вирус герпеса лошадей 1го типа, подтипы 1 и 2) патогенны для лошадей; роль других герпесвирусов лошадей (2 и 3 типы) в инфекционной патологии еще не изучена.

Физикохимические свойства. Вирус ринопневмонии, как и все герпесвирусы, является ДНКсодержащим. Антиметаболпт 5йод2дезоксиуридин угнетает репродукцию вируса в культурах клеток) что является косвенным доказательством наличия в составе вириона ДНК В отличие от других представителей ДНКсодержащих вирусов (аденовирусы, паповавирусы) вирус ринопневмонии легко разрушается хлороформом и эфиром, так как его внешняя оболочка, которая формируется на поздних стадиях развития, содержит липиды. Высокая чувствительность вируса к жирорастворителям, а также лабильность при низких показателях водородных ионов и при нагревании в присутствии катионов магния и кальция являются вспомогательными признаками для предварительной идентификации вируса.

По данным Долла и сотр. (1959), Барта (Bartha, 1970), вирус чувствителен к положительным температурам. При комнатной температуре он инактивируется через 8 дней, при 376 — через 24—48 часов, а при 56° — в течение 10 минут. Хранение при 4° приводит к утрате инфекционное™ через 3—6 месяцев При температуре минус 20° вируссодержащие ткани остаются инфекционными в течение 568 дней. В затемненном помещении при температуре 20—27°, нанесенный на стекло и железо, вирус сохраняется 7 дней, на деревянные предметы—. 14 дней, на волосы лошади—42 дня. Вирус, адаптированный к хомячкам и разведенный на изотонических растворах глюкозы, лимоннокислого натрия, поваренной соли, глицерина, а также в 20%ном водном и 50%ном зйбуференном растворах глицерина, сохраняется при 4° в течение 56—150 дней; в дистиллированной воде —до 27 дней. В забуференном солевом или изотоническом цитратном растворе с добавлением 20% сыворотки, а также 2%ного раствора триптозы вирус сохраняет инфекционность до 210 дней. Присутствие в растворах сыворотки или триптозы оказывает на вирус стабилизирующее действие, так как в процессе хранения титры его снижаются медленнее.

Вирус лабилен к действию трипсина. Барта (1970) сообщает, что некоторые штаммы вируса проявляют устойчивость к температуре 50° и действию трипсина. Эти штаммы более устойчивы в процессе хранения при 4°, они также менее варулентны для хомяков. Автор считает, что степень чувствительности вируса к нагреванию и действию трипсина является признаком аттенуации.

Киргоф (Kirchoff, 1970), изучая инактивирующее действие различных химических веществ, установил, что 0,2—1 %ный раствор бромидцетилтриметиламмония, 0,2—3%ный раствор Хевисола, 1—5%ный раствор инсидина убивают вирус за 10 минут. Менее эффективен 3—5%ный раствор ТЕГО51. Вирус, находящийся на деревянных предметах, обезвреживается легче, чем находящийся на поверхностях предметов с содержанием мела. Вирус инактивируется 0,35%ным раствором формальдегида (Эндрюс, 1967).

Морфология. Средний диаметр вириона с суперкапсидными оболочками равен 1500 А. Капсид вируса состоит из 162 капсомеров (Барта, 1970). Вирусные частицы, находящиеся в ядрах клеток, окружены одной оболочкой, а частицы, локализованные в цитоплазме, имеют двойную оболочку.

По данным Дарлингтона и Джеймса (Darlington and James, 1966), вирус формируется во внутренней мембране ядра. При электронной микроскопии инфицированных вирусом ринопневмонии культур клеток L, HeLa и ВНК21/13 авторы не обнаружили различий в динамике формирования вируса и в морфологии его. Вирусные •частицы можно обнаруживать через 9 часов в ядрах клеток, при этом преобладают частицы, состоящие из двух концентрических колец. В дальнейшем из внутреннего кольца (контура) формировались частицы, состоящие из нуклеоида, окруженного мембраной. Вирус синтезировался не в какойто одной зоне ядра, а по всей его массе. Формирующиеся частицы имели диаметр

850—900 А. Через. 12 часов после заражения обнаруживаются частицы, отпочковывающиеся от внутренней мембраны ядра Нуклеоид покрывается оболочкой, которая, повидимому, формируется из мембраны ядра. В это же время вирусные частицы обнаруживаются в вакуолях цитоплазмы и связаны с перинуклеариой зоной, а также располагаются на поверхности клеток и внеклеточно. Диаметр этих частиц равен 1350—1460 А. Процесс отпочковывания вирусных частиц от ядерной мембраны и появление внеклеточного вируса происходил одновременно и совпадал с увеличением титра вируса в культуральиой среде.

Результаты количественного определения вируса, культивируемого в клеточных линиях L, HeLa и ВНК21/13 методом бляшек, показали, что репродукция связанного с клетками вируса начиналась между 6—9 часами после заражения независимо от используемой клеточной культуры. Через 15—20 часов количество внеклеточного вируса приравнивалось или превосходило количество внутриклеточного вируса при использовании культур клеток L и ВНК21/13 В клетках HeLa наибольшее количество связанного с клеткой вируса наблюдалось до 48 часов.

Антигенные свойства, По данным Барроуса (Burrows, 1968, 1970), при помощи реакции нейтрализации у различных штаммов вируса ринопневмонии 1го типа можно различать два подтипа, которые вызывают респираторное заболевание у лошадей, поражение наружных половых органов, а у жеребых кобыл аборты. Подтип 1 представлен штаммом КуД, выделенным в США, штат Кентукки, Долом и Уоллесом в 1954 г. Подтип 2 представлен штаммом Армия183, выделенным Джонсом и соавт. (Jones et al., 1943, 1948). К этому же подтипу принадлежит большинство других штаммов возбудителя, выделенных на европейском и азиатском континентах.

Матумото, Ишизаки, Шимицу (Maturnot, Ishizaki, Schimizu, 1965) провели серологические исследования проб сыворотки от лошадей, полученных из 17 стран. Эти исследования показали, что в период с 1958 по 1960 г. штаммы подтипа 2 пребладали в СССР, Нидерландах, Швейцарии, Италии, ЮжноАфриканской Республике, Малайе. Они также встречались на Тайване, в Японии, Канаде, Новой Зеландии. Первый и второй подтипы встречались в некоторых европейских странах, Индии и Аргентине.

Шимицу и Кавашима (Schimizu et Kawashima, 1968) выделили в культуре клеток почек лошади штамм вируса НН1, который имел отдаленное родство с японским штаммом ТН20, выделенным от жеребенка с синдромом респираторного заболевания, отличался также от другого японского штамма Н45 (подтип 2), но оказался близкородственным американскому штамму КуД (подтип 1).

Пламмер и Уотерсон (Plummer and Waterson, 1963) выделили из носовых истечений больной лошади штамм LK вируса и дали характеристику его основных свойств. Этот штамм отличался от классических штаммов вируса ринопневмонии, и они обозначили его вирусом герпеса лошадей 2го типа.

Карпас (Karpas, 1966) выделил новый вирус, который отличался в антигенном отношении от других представителей вирусов герпеса лошадей 1го и 2го типов и был отнесен к вирусу герпеса лошадей 3го типа.

Коно и Кобаяши (Kono and Kobayashi, 1964) выделили цитопатогенный сиротский вирус от клинически здоровых лошадей, который по биологическим свойствам обнаруживал сходство с герпесвирусами лошадей 2го и 3го типов Ратюль и Вернер (Ratuld et Wernr, 1968) из 8суточной культуры лейкоцитов, выращенной из клеток крови венгерского рысака с катаральным воспалением верхних дыхательных путей, при дальнейшем пассировании в культуре клеток почек лошади выделили вирус, который по отсутствию патогенности для хомяков, а также нечувствительности к нему культур «леток почки свиньи и ВНК21 отличался от вируса ринопневмонии 1го типа. На основании этих признаков авторы предварительно отнесли его к герпесвирусу лошадей 2го или 3го типов.

В 1958 г. Брилл и сотр. (Brill et al.) описали штамм вируса RACH, который вызывал у беременных морских свинок аборты через 11—20 дней после заражения. Этот вирус, по данным Войцеховской и Чем ант (1963), не вызывал цитопатических изменений и не пассировался на мышатахсосунах и взрослых грызунах, чем отличался от американских штаммов, которые были адаптированы к новорожденным мышатам путем интрацеребрального заражения (цитировано по Бенндорф, 1968).

В 1969 г. из материалов абортированных плодов Н. Н. Крюковым и К П. Юровым (1969, 1970) были выделены два штамма вируса ринопневмонии, которые по биологическим и физикохимическим свойствам отнесены к герпесвирусу лошадей 1го типа. Оба штамма оказались сходными по антигенным, культуральным и физикохимическим свойствам.

Несмотря на то что классификация полевых штаммов вируса ринопневмонии 1го типа на два подтипа признана многими авторами, Барроус обращает внимание на ее условность. Дело в том, что Эта классификация основывается на результатах реакции нейтрализации с использованием антисывороток, полученных против эталонных штаммов. При этом одни штаммы вируса более легко нейтрализуются сывороткой, чем другие. Часто сыворотки от гипериммунного или выздоровевшего животного лучше нейтрализуют гетерологичный вирус, чем гомологичный.

Приведенные данные свидетельствуют о том, что различные штаммы вируса ринопневмонии отличаются между собой как в антигенном отношении, так и по ряду других биологических свойств.

В сыворотке крови переболевших или гипериммунизированных животных обнаруживаются антитела, которые можно определить при помощи реакции нейтрализации в культурах клеток, связывания комплемента, диффузионной преципитации в агаровом геле.

В качестве антигенов используют культуральную вируссодержащую жидкость, обработанную соответствующим образом в зависимости от метода применения, а для реакции связывания комплемента, кроме того, экстрагированную жидкость из легких абортированных плодов кобыл или печени хомяковсосунов, зараженных адаптированным к ним вирусом.

По данным Шимицу и сотр. (1962), Петзольдта (1967), комплементфиксирующий антиген состоит из двух фракций: одна фракция связана с инфекционным компонентом —Vантигеном, представляющим поверхностный белок вирусной частицы, осаждаемый при ультрацентрифугировании. Другая фракция является растворимым Sантигеном, связанным с белком, покрывающим нуклеоид. При помощи фракционированных артигенов на восприимчивых животных можно получить моноспецифические антиS и апти Vсыворотки, тогда как на невосприимчивых животных удается получить только антиУсыворотку. Барта (1970) сообщает, что при введении лошадям экстрагированного эфиром растворимого антигена у них образуются антитела, которые не обладают способностью нейтрализовать вирус.

В реакции нейтрализации вирус ринопневмонии лошадей отличается от других представителей герпесвирусов животных, однако при помощи реакции связывания комплемента и диффузионной преципитации в агаровом геле можно обнаружить общий антиген с вирусом инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.

Мак Коллум и соавт. (1956) сообщают, что адаптированный к хомякам вирус содержит гемагглютинин, вызывающий агглютинацию эритроцитов лошади. Гемагглютинация подавляется только антисывороткой лошади, полученной гипериммунизацией вируссодержащей тканью печени хомячков. Сыворотки, полученные от естественно переболевших животных, не задерживали гемагглютинацию. Семерджиев (1962) получил положи тельные результаты агглютинации формалииизированных эритроцитов лошади при использовании антигенов из легких и печени зараженных морских свинок и легких абортированного плода кобылы.

Кубин и Колбл (Rubin und Kolbl, 1966) обнаружили гемадсорбирующие свойства вируса, пассируемого в культурах клеток с эритроцитами лошади. Выделенные Н. Н. Крюковым и К. П. Юровым (1969, 1970) два штамма вируса К69 и С69 обладали гемадсорбирующими свойствами в культурах клеток почек эмбрионов коровы и свиньи с эритроцитами лошади. Гемадсорбция имела очаговый тип, однако этот феномен проявлялся неотчетливо и, по видимому, не может служить надежным диагностическим признаком. Штамм С69 в разведении 1:4—1:8 вызывал агглютинацию эритроцитов лошади, п не агглютинировал эритроциты петуха.

К у л ь т и в и р о в а н и е вирус а. Сведения о возможности культивирования вируса в организме лабораторных животных и куриных эмбрионах противоречивы. Одним авторам удалось пассировать вирус на хомячках сосунах и взрослых хомяках (Долл с сотр., 1953, 1956; Войцеховская, 1960); на морских свинках, обработанных кортизоном, и куриных эмбрионах (Ссмерджиев, 1958, 1960; К. П. Юров, Н. Н. Крюков, 1969). В большинстве случаев пассажи вируса на этих объектах были возможны при использовании вируссодержащих материалов, полученных от абортированных плодов. Адаптированный к лабораторным животным или куриным эмбрионам вирус вызывал в клетках печени погибших животных и эмбрионов образование внутриядерных телецвключений.

Герпесвирусы лошадей 2го и 3го типа непатогенны для лабораторных животных. В экспериментальных условиях не удается заразить лошадей (Карпас, 1966; Коно и Кобаяши 1964).

Джонс и сотр. (1948) не смогли пассировать вирус в организме грызунов различных видов, телят, свиней и кошек. Целлеру и Тейфелю (Zeller, Teufel, 1970) не удалось адаптировать вирус, полученный с культур клеток, к организму хомяков и мышей при проведении четырех пассажей.

Различные штаммы вируса ринопневмонии размножаются в первичных культурах и субкультурах почек лошади, пони, свиньи, теленка, овцы; тестикуллов, легких и селезенки лошади, а также в перевиваемых линиях клеток ВНК21, AND, HeLa, РК15, РК13 (Майр и Петте, 1968; Мак Коллум, 1962; Брилл и сотр., 1961; РанДелл и сотр., 1953; Н, Н. Крюков, К. П. Юров, 1970). Высокого титра вирус достигает, когда в поддерживающую среду добавляют амниотическую жидкость крупного рогатого скота.

Для выделения вируса в культурах клеток используют смывы из носовой полости или соскобы со слизистой оболочки носа при респираторном синдроме, а при абортах — суспензии легких, печени, селезенки и содержимое желудка плода, так как в них содержится наибольшее количество вируса. По данным Брайнса (1969), вирус легко изолируется из лейкоцитов экспериментально зараженных лошадей в течение 20 дней, но не из плазмы, свободной от форменных элементов крови.

Барта (1970) отмечает, что не все штаммы вируса хорошо размножаются, в культурах клеток. Размножение вируса в чувствительных культурах клеток сопровождается развитием цитопатических изменений, характерных для вирусов группы герпес. Штаммы вируса, адаптированные к культурам клеток, оказывают более выраженный цитопэтический эффект и накапливаются в высоких титрах Цитопатогенное действие адаптированных штаммов наступает через 24—48 часов, а неадаптированных — через 3—5 суток (Мак Коллум и соавт., 1962).

Первым признаком цитопэтических изменений служит появление отдельных округленных светлых клеток через 24—36 часов после заражения. В менее чувствительной к вирусу перевиваемой линии клеток почки теленка цитопатические изменения в первые 2—3. суток имеют очаговый характер, затем они постепенно распространяются на весь клеточный слой (Н. Н. Крюков, К. П. Юров, ,1970). Пораженные клетки округляются и отделяются от стекла. В них образуются внутриядерные зозинофильные тельцавключения, обнаруживаемые после окрашивания гематоксилинэозином. Образование внутриядерных телецвключений совпадает с моментом выхода вируса из ядра в цитоплазму (Дерлингтои и Джеймс, 1966).

Процесс формирования вируса начинается в ядре клетки, лроматин ядра дезорганизуется, образуя большие глыбки неправильной формы, которые в окрашенных препаратах можно принять за тельцавключения. В дальнейшем они распадаются, образуя скопления мелких глыбок на внутренней поверхности ядерной мембраны. На этой стадии формирования под электронным микроскопом обнаруживают незрелые вирусные частицы, заключенные в оДну оболочку. В цитоплазме, при выходе вируса из клетки, вирион приобретает вторую оболочку, которая образуется из элементов цитоплазмы клетки. При некоторых, еще не изученных обстоятельствах, вирус приводит к образованию в культурах клеток единичных крупных клеток (цитомегалия), содержащих одно или несколько внутриядерных включений, или к слиянию цитоплазмы соседних клеток и к скоплению в одном месте большого количества ядер, в результате чего образуются гигантские миогоядерные клетки (Барроуз, 1970). ,,„„„,

По данным Мак Коллума с соавт. (1962), штаммы вируса ринопневмонии образуют негативные колонии (бляшки) в культурах клеток почек лошадей, овец и свиней под агаровым покрытием. Величина бляшек была различна в зависимости от штамма вируса и соответствовала 3—5 мм на 4—5е сутки.

Бляшкообразующая способность вируса зависит от вида используемой культуры клеток. Например, в опытах Боргеиа (Вогgen, 1970) десять патогенных и один аттенуированный штамм вируса образовывали бляшки в культуре клеток почек свиней. В то же время польский штамм RACH и аттенуированный Prevaccional, полученный из штамма RACH, не образовывали бляшек в клетках L мышиных фибробластов. Отрицательный бляшкообразующий признак в клетках L свойствен также американскому штамму Army183 Другие штаммы вируса распространенные в Данин, ФРГ, а также штамм SAFV2 и КуД обладали положительным бляшкообразующим признаком в этой системе.

Эпизоотологические данные. К данной болезни восприимчивы однокопытные независимо от возраста и пола. Особенно чувствительны чистопородные лошади. Распространению ринопневмонии способствует недостаточно контролируемый обмен лошадьми между хозяйствами и странами.

Как показали серологические исследования, проведенные Матумото и соавт. (1965), этот вирус широко распространен во многих странах. Целлер и Тейфель (1970) сообщают, что лошади с респираторным синдромом могут быть основными носителями вируса и могут выделять его во внешнюю среду наравне с абортированными плодами, плодовыми оболочками и околоплодными водами. При респираторной форме болезни возбудитель передается воздушнокапельным путем при контакке больных и здоровых животных. Больные жеребцы могут передавать вирус кобылам при случке, однако заражение кобыл спермой инфицированных жеребцов считается сомнительным.

В благополучные хозяйства вирус заносится больными или переболевшими лошадьмивирусоносителями. При отсутствии иммунитета у животных инфекция распространяется быстро с охватом всех восприимчивых лошадей.

Патогенез. При естественном или экспериментальном заражении на слизистую оболочку носоглотки или подкожно вирус первоначально размножается в чувствительных клетках верхних дыхательных путей и носоглотки. Затем он попадает в кровь, проникает в лейкоциты и вместе с клетками крови проходит через плацентарный барьер, поражая плодовые оболочки и плод (Брайнс, 1969; Барроуз, 1970). В свободном состоянии в крови вирус находится очень непродолжительное время, однако обнаружение его в других органах и в плоде свидетельствует о генерализации инфекции.

Брайнс и Приккет (Bryans and Prickett, 1970) отмечают, что в настоящее время еще нет убедительных данных, объясняющих (возникновение абортов при ринопневмонии. Мало изучен и механизм проникновения вируса в плод, когда в крови жеребых кобыл содержатся антитела. Неизвестна также продолжительность инкубационного периода, который наблюдается после респираторного синдрома до времени наступления аборта. Аборт при ринопневмонии наступает в последний период жеребости без какихлибо предшествующих признаков родов.

Исследования, проведенные Брайнсом (1969), объясняют механизм проникновения вируса в плод и наступление аборта. Автор экспериментально показал наличие виремии в присутствии нейтрализующих антител в крови, при этом вирус можно выделить в течение 24 дней только из клеток белой крови. Таким образом, вирус не нейтрализуется антителами благодаря тому, что ом фагируется лейкоцитами и вместе с ними попадает в плод, поражая его. В результате действия вируса на клетки матки или иммунологических процессов в сенсибилизированных тканях, происходит образование токсических продуктов, которые приводят к накоплению отечной жидкости. Эта жидкость, проникая в межворсинчатые пространства трофобласта и эндометрия, механически отделяет оболочки плода от матки, вследствие чего наступает аборт.

Симптомы болезни. Клинически болезнь проявляется в двух формах. Первая характеризуется поражением верхних дыхательных путей, вторая — спонтанными абортами у кобыл. Такое деление ринопневмонии по клиническому проявлению следует считать условным, так как болезнь начинается с появления респираторного синдрома, а аборт у кобыл является следствием первоначальной инфекции верхних дыхательных путей, откуда вирус лейкоцитами заносится в ткани матки и плода.

При естественной инфекции респираторная форма чаще бывает у жеребят в возрасте до одного года, когда из крови исчезают антитела, приобретенные от матери. Взрослые лошади также могут заболевать, но болезнь у них протекает легче.

Инкубационный период при экспериментальном заражении продолжается 2—3 суток. На течение болезни влияют факторы внешней среды. При хороших условиях содержания клинические признаки выражены слабо. Кроме кратковременной температурной реакции, может быть катаральное воспаление слизистых оболочек верхних дыхательных путей (Приккет, 1970). Температура тела повышается на 2—3й день, иногда наблюдают двухфазный подъем температуры между 2—3м и 8—10м днями.

Целлер и Тейфель (1970) наблюдали респираторную форму ринопневмонии у скаковых лошадей Берлинского ипподрома, которая характеризовалась катаральным воспалением слизистой оболочки верхних дыхательных путей, отечностью фолликулов носоглотки, воздухоносных мешков и гортани. У больных в течение 1—2 дней была повышена температура тела. Часто катар слизистых оболочек верхних дыхательных путей принимал Хроническое Течение. Кроме этих признаков наблюдаю! появление незначительных серознослизистых истечений из носа, слабый кашель, понижение аппетита. Через 2 дня после появления первых признаков болезни на слизистой оболочке носоглотки обнаруживают герпетическую сыпь, она становится слегка бугристой. На медиальных стенках воздухоносных мешков (при исследовании ларингоскопом) и под языкам наблюдают небольшие утолщения, которые вскоре превращаются в узелки. Дорсальная стенка глотки набухает, становится шероховатой, что приводит к затрудненному дыханию и свистящим шумам. У больных животных наблюдают снижение общего количества лейкоцитов до 4200 в 1 мм) выраженный моноцитоз (7—10%), особенно в первые 5 дней болезни.

Респираторная форма болезни протекает легко. Через 8—10 дней лошади выздоравливают. Если на слизистой оболочке глотки и воздухоносных мешков появилась сыпь, животные выздоравливают в течение четырех недель.

При плохих условиях содержания болезнь часто осложняется секундарной микрофлорой. Вэтом случае выделения из носа становятся гнойными, иногда развивается пневмония и плевропневмония, а также поражения желудочнокишечного тракта и почек.

Жеребые кобылы, переболевшие респираторной формой ринопневмонии, абортируют через 18—120 дней после естественного заражения в зависимости от стадии жеребости (Долл и Брайнс, 1962; Шимицу и Кавашима, 1968). Абортировать может до 76% кобыл. Чаще абортируют кобылы на 8—11м, реже на 5—7м месяцах жеребости. Самые ранние аборты Приккет (1969) наблюдал на 4м месяце жеребости.

При экспериментальной инфекции, вызванной подкожным, внутримышечным, внутривенным и интраназальным способом введения вируса, инкубационный период продолжается 14—76 дней. При непосредственном заражении плода через матку аборт происходит на 3_5_й денЬ) реже через 9 дней. Эти данные получены при заражении 66 жеребых кобыл, из которых 55 абортировали. Аборты происходили в одни и те же сроки независимо от наличия или отсутствия в крови нейтрализующих антител.

Аборт наступает внезапно, без какихлибо предвестников родов, плод выходит с оболочками. Физиология матки восстанавливается быстро, через месяц после аборта может произойти оплодотворение. У абортированных плодов светлые участки кожи, копыта и слизистые оболочки имеют желтоватую окраску. Частым признаком является вздутый живот у плода вследствие скопления жидкости в брюшной и грудной полостях. Признаков аутолиза плода нет, если аборт вызван вирусом без осложнений секундарной микрофлорой. Иногда рождаются живые жеребята, но они почти всегда погибают в первые дни жизни.

Прогноз благоприятный, при осложнении секундарной микрофлорой могут быть случаи гибели животных.

П атол о го а н а то м и ч с с к и с изменения у жеребят и лошадей при первичном возникновении инфекции характеризуются катаральным воспалением слизистых оболочек верхних дыхательных путей и наличием серозного или серозногнойного экссудата в носовых ходах. На слизистых оболочках носоглотки, иногда и трахеи обнаруживают герпетическую сыпь и изъязвления, ана стенках воздухоносных мешков — узелки величиной с просяное зерно. Лимфатические фолликулы носоглотки гиперплазированы (Приккет, 1970; Целлер и Тейфель, 1970). При микроскопии гистопрепаратов наблюдают некротические поражения лимфатических фолликулов и наличие внутриядерных телецвключений в пораженных клетках.

При экспериментальном заражении аэрозолем вируса у жеребят, убитых в период подъема температуры тела, находят в легких многочисленные мелкие очаги темнокрасного цвета. При микроскопическом исследовании обнаруживают сильную инфильтрацию мелких бронхов нейтрофиллами, серознофибринозный экссудат в альвеолах, сильный некроз эпителиальных клеток бронхов, типичные тельцавключения в клетках бронхов и бронхиальных лимфатических узлах.

Если аборты у кобыл проходят без осложнения секундарной микрофлорой, патологоанатомических изменений в матке нет. Можно наблюдать лишь расширение регионарных лимфатических сосудов. Микроскопически заметна интенсивная периваскулярная инфильтрация лимфоцитами и плазматическими клетками, которая наиболее выражена в железистом слое эндометрия. В ворсинчатом слое находят очаги некроза, гиперплазию регионарных лимфатических узлов. В клетках тканей матки внутриядерных телецвключений нет.

Патологоанатомические изменения наиболее выражены в органах абортированных плодов (Н. К. Олейник и соавт., 1955; Приккет, 1970; Мак Джи, 1970; Шимицу и Кавашима, 1968). При абортах в ранней стадии жеребости (до 6 месяцев) в большинстве случаев наблюдают различную степень аутолиза плодов. В клетках печени и легких обнаруживают диффузные внутриядерные тельцавключения. Местная реация клеток при этом отсутствует. У плодов, абортированных на 6—7м месяце, наблюдают поражения, характерные для ранних и поздних абортов. Наиболее типичны изменения при абортах на 7—11м месяце жеребости. Они характеризуются желтушностыо непигментированных участков кожи, подкожной клетчатки и слизистых оболочек носа и глаз, отеками подкожной клетчатки, избыточным содержанием жидкости в грудной и брюшной полостях. Селезенка увеличена, на разрезе выступают набухшие лимфатические фолликулы, в печени видны некротические очаги белого цвета размером 2—3 мм, легкие отечны, на поверхности геморрагические участки. Гистологически обнаруживают воспалительные процессы в легких и бронхах, сильные некротические поражения пульпы селезенки, очаговый некроз печени; в клетках органов, особенно печени, легких и щитовидной железы, — внутриядерные тельцавключения типа А. Каудри.

Диагноз и особенно дифференциальная диагностика респираторной формы ринопневмонии по клиническим и патологоанатомическим признакам затруднительна, так как остро протекающая инфекция верхних дыхательных путей может быть вызвана вирусами гриппа, п ар агрипп а, р еспир атюрноеинтици а л ьным вирусом, аденовирусом, реовнрусом, риновирусом и герпесвирусом (Барроуз, 1968). Клинические признаки, вызванные этими вирусами, весьма сходны, поэтому диагностика основывается на данных лабораторых исследований.

При абортах предварительный диагноз можно поставить по характерным патологоанатомическим изменениям в органах плода и обнаружению внутриядерных телецвключений. Следует иметь в виду, что при абортах на 7_Цм месяце жеребости, вызванных вирусом ринопневмонии, признаков аутолиза плода не бывает. У плодов, абортированных до 6го месяца, а также при абортах, вызванных бактериальной инфекцией и вирусом артериита, всегда наблюдают аутолиз плодов.

Вейланд и Димитриадис (Weiland und Dirnitriadis, 1970), используя прямой метод иммунофлуоресценции, при исследовании препаратов от 70 лошадей неблагополучного хозяйства в 24 случаях получили положительные результаты, в 44— отрицательные. Только в двух случаях положительные результаты люминесценции не были подтверждены выделением вируса.

Надежная диагностика ринопневмонии основывается на выделении вируса в культурах клеток с последующей его идентификацией, а также путем обнаружения специфических антител в сыворотках переболевших животных. Ранее предложенные методы диагностики — реакция связывания комплемента с использованием антигенов, приготовленных из органов больных животных, а также реакция нейтрализации на хомяках для обнаружения антител у лошадей — представляют в настоящее время исторический интерес.

Идентификацию выделенного вируса проводят реакцией нейтрализации в чувствительных культурах клеток методом разведения вируса с интервалом0,5 lg и постоянной дозой гипериммунной кроличьей сыворотки, разведенной 1:8. Средний индекс нейтрализации при этом составляет 3,6 lg. Ретроспективную диагностику проводят исследованием сывороток переболевших лошадей с постоянной дозой вируса (50100 ТЦД50) и двукратными разведениями сывороток (Целлер и Тейфель, 1970).

По нашим данным (К. П. Юров, Н. Н. Крюков), для диагностики болезни и идентификации вируса хорошие результаты дает непрямой метод иммунофлуоресценции с использованием сыворотки лошадей, естественно переболевших ринопневмонией, и антисыворотки к глобулинам лошади, меченной изотиоцианатом флуоресцеина. Вирус культивируют в первичнотрипсинизированной культуре "клеток почки эмбриона коровы, выращенной в пробирках на покровных стеклах.

Специфическое зеленожелтое свечение наблюдают через 14—16 часов после заражения в отдельных группах клеток в виде узкого ободка вокруг ядра, затем ширина светящейся зоны увеличивается и распространяется на большую часть цитоплазмы. В период выраженного цитопатического действия пораженные клетки имеют вид светящихся округлых образований, в которых не различаются ядра. В некоторых клетках антиген выявляется только в ядре, в большинстве клеток вокруг ядерной мембраны и в цитоплазме. Различия в локализации вирусного антигена в клетках связаны с особенностями репродукции вируса и неодинаковой чувствительностью отдельных популяций клеток в культуре ткани.

Иммунитет. После естественного переболевания жеребят ринопневмонией вырабатывается слабый и непродолжительный иммунитет, поэтому они могут неоднократно заболевать в первый год жизни (Мейер и Петте, 1968). Уровень антител повышается через 3 недели после выздоровления и снижается в 2—3 раза через 7 месяцев. Комплементфиксирующие антитела не способны нейтрализовать вирус и присутствуют в крови более короткое время, чем нейтрализующие (Барта, 1970; Целлер и Тейфель, 1970). У абортировавших кобыл одновременно с нейтрализующими антителами в крови может присутствовать вирус (Брайнс, 1969). Колостральный иммунитет у жеребят до 3недельного возраста соответствует уровню материнского, затем титр антител снижается, но они еще обнаруживаются в течение 2—3 месяцев.

Профилактика. Инактивированные вакцины, приготовленные из тканей абортированного плода, были неэффективны и вызывали побочные реакции у привитых животных.

Успешные опыты по адаптации вируса к хомякам, проведенные Доллом и соавт. (1953), явились предпосылкой для получения живой вакцины. Однако эта вакцина, применяемая в США, обладает повышенной реактогенностью, вызывает аборты и может быть источником заноса вируса в благополучные хозяйства. Поэтому ее обычно применяют только в хозяйствах, где ранее были аборты и у животных имеется остаточный иммунитет, приобретенный в результате естественного переболевания. Вакцинация животных, которые раньше не болели ринопневмонией или переболели давно, может привести к вспышке болезни (Мак Джи, 1970; Брайнс и Приккет, 1970; Шимицу и Кавашима, 1968).

Мейер и Петте (1968) получили вакцину путем длительного пассирования адаптированного к хомякам штамма, вируса RACH в культурах клеток почек свиней и 1—2недельных поросят. По мере увеличения количества пассажей в культурах клеток вирус утрачивал патогенность для хомячков. Большинство золотистых хомяков, привитых вирусом 185—256 маосажей, выжили при заражении патогенным для них вирусом, тогда как непривитые погибали на пятые суши после заражения. Одновременно культуральный вирус утрачивал патогенность для лошадей.

У вакцинированных лошадей вырабатывались нейтрализующие антитела, которые можно обнаружить на 14й день после прививки. До 30—40го дня уровень их повышается, а затем через 6 месяцев незначительно снижается.

Повторная вакцинация способствовала повышению титра антител. Многократные прививки (4—5) через 6месячные интервалы не вызывали у животных аллергических реакций.

Жеребята, у которых не было колостральных антите4, реагировали выработкой антител, однако уровень их был очень низким, и они сохранялись не более 2—3 месяцев. После ревакцинации титр антител значительно повышается.

При испытании вакцины в производственных условиях на 78 жеребятах, 92 нежеребых кобылах и жеребцах и 15 жеребых кобылах осложнении не наблюдали, кобылы ожеребились нормально. Лошади, вакцинированные комбинированно (внутримышечно и в носовую полость), выделяют вирус с носовой слизью в течение 2—4 часов, по этот вирус не опасен для контактировавших животных.

Жеребят рекомендуется прививать после исчезновения у них колострального иммунитета, т. е. в возрасте 2—3 месяцев, и ревакцинировать через 3—4 месяца после первой прививки. Жеребцов и нежеребых кобыл прививают двукратно с интервалом 3—4 месяца, жеребых кобыл на 2—3м месяце беременности и повторно через 4 месяца. Ревакцинация более эффективна, так как аборты, вызванные полевым вирусом, возникают чаще на 9—11м месяце жеребости.

Для сохранения иммунитета в дальнейшем животных прививают один раз в год, а жеребых кобыл на 6—7м месяце жеребости. В случае возникновения абортов в хозяйстве прививают всех жеребых кобыл До 9го месяца. Кобыл до 5/месячной жеребости прививают повторно через 3 месяца. Вакцину вводят внутримышечно.

Меры борьбы. Ввиду высокой контагиозности ринопневмонии меры профилактики и борьбы основываются на строгом соблюдении ветеринарносанитарных правил.

Для предупреждения заноса инфекции в хозяйство не допускают ввода лошадей из неблагополучных хозяйств, а также хозяйств, в которых в последние 3 месяца наблюдались аборты неустановленной этиологии. Вновь поступающих лошадей в течение месяца содержат изолированно в отдельной конюшне, расположенной на расстоянии не менее 300 м от других конюшен. Переводить лошадей в основную группу можно в том случае, если за это время у них не наблюдалось повышения температуры тела и признаков поражения верхних дыхательных путей, а у жеребых кобыл — абортов. На импортируемых лошадей должно быть ветеринарное свидетельство, в котором указано, что лошади в течение трех месяцев, предшествовавших отгрузке, не имели клинических признаков болезни, а в хозяйстве за это время не было случаев заболевания ринопневмонией.

Хозяйство, в котором установлена ринопневмония, объявляют неблагополучным и накладывают ограничения. Запрещают перегруппировку и обмен лошадьми, вывоз фуража, вход люден, не связанных с обслуживанием лошадей, а также передачу спермы от жеребцовпроизводителей в другие хозяйства для осеменения кобыл. Больных и условно здоровых конематок изолируют и закрепляют по уходу за ними отдельный обслуживающий персонал. „

Конюшню, откуда выделена абортировавшая лошадь, дезинфицируют. Абортированные плоды, плодовые оболочки, навоз, остатки корма сжигают.

Кобыл, пришедших в охоту, осеменяют искусственно через месяц после аборта спермой здоровых жеребцов. Абортировавших конематок при наличии осложнений лечат симптоматически. При наличии вакцины всех лошадей прививают в соответствии с рекомендациями, изложенными в предыдущем разделе.

Хозяйство объявляют благополучным через 2 месяца после последнего случая аборта или рождения нежизнеспособного плода, если нет конематок во второй половине, жеребости. Проводят заключительную дезинфекцию конюшен и территории, где находились больные лошади, инвентаря и транспорта в соответствии с инструкцией по ветеринарной дезинфекции.

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2021