ЛЕЙКОЗ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА И МЕРЫ БОРЬБЫ С НИМ

Жансеркенова О.О., Касымбекова Ш.Н., Маманова С.Б.,. Тастаганова У.С

Казахский национальный аграрный университет г. Алматы, Казахстан

Введение. Лейкоз крупного рогатого скота (КРС) - медленно протекающая, хроническая, смертельная инфекционная болезнь, характеризуется бессимптомным течением или проявляющаяся лимфоцитозом и злокачественными образованиями кроветворных, лимфоидных, других органах и тканях организма. Развитие болезни обусловлено вирусом лейкоза КРС РНК-содержащего из семейства Retroviridae.

В последние годы число больных лейкозом и инфицированных вирусом лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС) животных возрастает и продолжает оставаться наиболее распространенной неизлечимой инфекционной болезнью КРС. Лейкоз особенно широко распространён в США, в ряде стран Центральной Европы, Дании, Швеции, Африке. В Казахстан впервые лейкоз КРС был зарегистрирован в 1966 году в Алматинской и Карагандинской областях.

По данным отчётности РГП «Республиканская ветеринарная лаборатория» в 2011 году из числа исследованных 2934288 голов КРС положительную реакцию показали 57998 голов, что составило 2%. При этом высокий уровень инфицированности регистрировалось в Северо-Казахстанской области - 6,51% [1-3].

По мнению некоторых исследователей, ВЛКРС представляет большую угрозу и серьёзную проблему животноводству, чем какой-либо другой инфекционный агент или болезнь [4-6]. Лейкоз приводит не только к гибели и преждевременной выбраковке животных, но и ставит под угрозу сохранение племенных стад, ведение селекционно-племенной работы, а также продажу и обмен животными. Болезнь причиняет значительный экономический ущерб животноводству, но главный ущерб наносится селекции и выращиванию ценных чистопородных высокопродуктивных животных, наиболее ценных молочных пород. Из-за ограничений по лейкозу племенные хозяйства не могут реализовать ценных в генетическом отношении бычков и телочек. Кроме этого установлено, что сокращаются сроки эксплуатации коров, инфицированных ВЛКРС, снижается резистентность как к инфекционным, так и незаразным болезням. У больных лейкозом животных удои уменьшаются на 5,5-10,2 %, а при бессимптомной инфекции - на 2,0-7,0 %. От инфицированных ВЛКРС коров недополучают 20-25 % валового производства молока. Так же установлено, что молоко и мясо больных лейкозом животных содержат метаболиты триптофана, лизина и других циклических аминокислот, обладающих выраженными канцерогенными свойствами и являются экологически опасными для человека [7]. В связи с этим, молоко больных лейкозом коров запрещено использовать в пищу людям.

В связи с установлением структурного и иммунологического родства ВЛКРС с вирусом Т-клеточного лейкоза человека, лейкоз необходимо рассматривать не только в ветеринарно-экономическом, но и социальном аспекте. Общность закономерностей возникновения и развития неопластического процесса в органах системы кроветворения позволяют считать лейкоз животных общебиологической и социальной проблемой.

Поэтому ликвидация лейкоза продолжает оставаться актуальной социальной проблемой, требующей научно обоснованного практического решения.

До настоящего времени основным и единственным методом борьбы с лейкозом КРС является выбраковка и изоляция инфицированных животных. Поэтому, эффективность оздоровления противолейкозных мероприятий (быстрое и радикальное устранение источника инфекции) зависит от ранней и достоверной диагностики. Инфицирование КРС вирусом лейкоза сопровождается выработкой специфических антител (в основном к антигенам gp5to p24) в сыворотке крови и молоке животных, поэтому рутинная диагностика этой инфекции представлена иммунологическими реакциями, в основе которых лежит взаимодействие антиген-антитело [8].

В нашей стране, согласно утверждённым методическим указаниям по диагностике лейкоза КРС, диагностические исследования на лейкоз проводят гематологическими, серологическими, молекулярно-генетическими, клиническими и патоморфологическими методами.

Диагностика лейкоза лабораторными методами РИД (реакция им-мунодиффузии), ИФА (иммуноферментный анализ) и ПЦР (полимеразная цепная реакция) в оздоравливаемых и оздоровленных стадах имеет различную эффективность. Неоднозначность данных методов при реальном течении эпизоотического процесса и генотипическом разнообразии возбудителя лейкоза при повторных выявлениях инфицированных животных указывает на то, что вирус лейкоза КРС может сохраняться в стаде, не вызывая симптоматических признаков и серо-конверсии (появление в сыворотке крови или исчезновение из неё специфических антител) [2,4,9,10]. Это показывает то, что тот или иной официально предписанный метод обнаружения антител не достаточен, для окончательной оценки оздоровления от вируса лейкоза стад. Для этого необходимы более углубленные исследования региональных генетических особенностей циркулирующих штаммов вируса лейкоза КРС. При такой постановке особый интерес вызывает изыскание более совершенных диагностических тестов позволяющих идентифицировать больных животных на ранней стадии.

Целью работы являлось проведение обследования поголовья КРС в неблагополучных по лейкозу животноводческих хозяйствах Алматинской области современными диагностическими тестами: РИД,

ИФА и ПЦР.

Материалы и методы. Исследования проведены в учебно-научно-диагностической лаборатории (УНДЛ) Казахского национального аграрного университета (КазНАУ) и в лаборатории вирусологии Казахского научно-исследовательского ветеринарного института (КазНИ-

ВИ).

Проведя клинический осмотр животных, в качестве объекта исследований использовали сыворотку крови КРС в количестве 92 проб. А также цельная кровь, взятая из яремной вены в одноразовые вакуумные пластиковые пробирки, содержащие в качестве концентрата ЭДТА (этилендиаминтетрауксусная кислота) для проведения исследований методом ПЦР в режиме реального времени (Real Time) StepOnePlus.

Для постановки РИД использовали набор тест-систем для серологической диагностики лейкоза КРС, производства КазНИВИ. Постановку реакции осуществляли согласно наставлению, а результаты учитывали через 48 часов инкубирования чашек Петри в термостате при 20-26°С.

Для проведения ИФА использовали тест-систему по выявлению антител к gp51 вируса лейкоза в сыворотке крови КРС (Франция), а для ПЦР использовали тест-систему по выявлению провируса лейкоза КРС TagMan Detection Kit (США). Постановку реакции осуществляли согласно наставлению по применению тест-систем.

Результаты исследований. В результате клинического обследования 92 голов КРС (в возрасте 5-8 лет) у 5-ти животных наблюдали опухолевую стадию лейкоза. Больные коровы угнетены, едят не охотно, много лежат, температура, пульс, дыхание в пределах нормы. Также у них отмечали увеличение лимфатических узлов разной степени нижнечелюстных, поверхностных паховых, надколенных и параанальных. Лимфатические узлы увеличены в несколько раз, при этом не наблюдали их воспалительных реакций. При пальпации лимфатические узлы плотной консистенции, холодные, безболезненные, подвижные. У одного животного выявили опухоли размером 4-6 см под кожей в различных участках тела.

Пробы сыворотки крови КРС были исследованы на наличие специфических антител в реакции иммуннодиффузии в агарозном геле. Положительным результатом в РИД являлось наличие четкой полосы преципитации между антигеном и исследуемой сывороткой.

В результате исследований установлено, что сыворотки крови 36 животных были положительными в РИД к антигенам ВЛКРС, 56 были РИД отрицательными, а в ИФА - двукратное превышение показателей оптической плотности буферного раствора по сравнению с отрицательным контролем.

Для постановки ПЦР на выявление провирусной ДНК вируса лейкоза КРС были получены пробы ДНК, выделенные из цельной крови коров. Всего в ПЦР было исследовано 92 пробы ДНК крови с праймерами, направленными на выявление вируса лейкоза КРС. Использовали диагностический набор по выявлению провируса лейкоза КРС TagMan Detection Kit (США). В качестве отрицательного контроля использовали дистиллированную воду. С помощью ПЦР подтверждено наличие провирусной ДНК вируса лейкоза у серологически положительных животных, а также серологически отрицательных животных. Также доказано, что с помощью ПЦР можно выявить положительно реагирующих животных на 10% больше, чем при серологическом методе - РИД.

Таким образом, в результате проведённых исследований установлено, что ПЦР и ИФА являются более чувствительными и специфичными при диагностике лейкоза КРС по сравнению с РИД. ПЦР-анализ позволяет с высокой достоверностью выявлять максимальное количество инфицированных лейкозом животных на самых ранних стадиях заболевания. Всё это позволит существенно сократить сроки оздоровительных противолейкозных мероприятий.

Выводы. Результаты исследований по диагностике лейкоза КРС подтвердили высокую чувствительность и специфичность полимеразной цепной реакции по сравнению с реакцией иммуннодиффузии. Однако, реакцию иммуннодиффузии, целесообразно использовать для мониторинговых исследований поголовья КРС на лейкоз.

ЛИТЕРАТУРА

1. Кабдулова С.С. Эпизоотологический мониторинг при лейкозе крупного рогатого скота в Республике Казахстан и Акмолинской области. Астана: 2009.

2. Ибрагимов Р.М. Эпизоотический процесс. Эпизоотологическое исследование. Астана: 2006.

3. Испуллаев А.И. Эпизоотический анализ ситуации по лейкозу крупного рогатого скота в Казахстане.// Вестник науки Казахского агротехнического университета им. С. Сейфуллина. Астана: 2007, № 4 (47). С. 197-203.

4. Маманова С.Б., Гизитдинов Н.Н., Бахтахунов Ю.Х. «Разработка ускоренного метода выявления больных лейкозом животных»// Вестник сельскохозяйственной науки Казахстана. 2004, № 12. С. 41-43.

5. Маманова С.Б. в соавт Методические рекомендации. Меры борьбы с хроническими инфекционными заболеваниями крупного рогатого скота (туберкулез, бруцеллез, лейкоз). Алматы, 2010.

6. Гринишин Д.П., Макаров В.В. «Противолейкозные мероприятия на основе полимеразной цепной реакции»// Ветеринарный консультант. 2004, № 19. С. 12-13.

7. Сюрин В.Н., Саймоленко А.Я., Соловьев Б.В., Фомина Н.В. Диагностика вирусных болезней животных. М.: Агропромиздат, 1991, С. 38-50.

8. Гулюкин М.И., Симонян Г.А., Иванова Л.А. и др. Система мониторинга лейкоза крупного рогатого скота в Российской Федерации. М.: 2007. С. 3-8.

9. Возможность и ограничения использования полимеразной цепной реакции (ПЦР) в диагностике вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС)// Чичинина С.В., Храмцов В.В., Смирнов П.Н. и др. //Материалы Сибирской международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарии».- Новосибирск.-2004.

10. Двоеглазов Н.Г., Туманов Ю.В. Сравнительный анализ разных коммерческих тест-систем и методов в диагностике ВЛКРС // Материалы научно-практической конференции факультета ветеринарной медицины НГАУ.-Новосибирск, 2004.

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2021