ГОНАДОТРОПНЫЕ ГОРМОНЫ НИВЕЛИРУЮТ ИНГИБИРУЮЩИЙ ЭФФЕКТ АНГИОТЕНЗИНА II НА СОЗРЕВАНИЕ ООЦИТОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА IN VITRO

Сметанина И.Г., Татаринова Л.В.

Всероссийский научно-исследовательский институт физиологии, биохимии и питания сельскохозяйственных животных РАСХН Боровск Калужской обл., 249013, Россия Кривохарченко А.С. Max-Dellbruk Center for Molecular Medicine (MDC) D-13092 Berlin-Buch, Germany

Введение. Большинство факторов, действующих на процесс созревания ооцитов in vivo неизвестны, поэтому воспроизвести вне организма условия созревания невозможно. Как следствие, эффективность созревания и качество ооцитов, созревших in vitro ниже, чем in vivo. Поэтому очень важно идентифицировать эти факторы, с тем, чтобы можно было добавлять их в культуральную систему in vitro.

Ренин-ангиотензиновая система (RAS) включает ангиотензин II (AngII) и его различные рецепторы. AngII - активный октапептид, главный функциональный тип в RAS. Известно, что RAS играет много ролей в организме млекопитающих, включая регуляцию кровяного давления, метаболизацию солей и воды, поддержание баланса жидкости в организме, и стимуляцию пролиферации клеток гладкой мускулатуры. К тому же, имеются убедительные данные, что RAS представлена в яичниках млекопитающих и играет важную роль в синтезе и секреции простагландинов и эстрогенов, регуляции роста фолликулов, овуляции и атрезии.

Значительные межвидовые различия, касающиеся экспрессии и клеточной локализации AngII рецепторов в овариальных фолликулах, подтверждают различия среди видов в физиологической роли RAS. Роль AngII в созревании ооцитов крупного рогатого скота (КРС) изучена недостаточно по сравнению с другими видами.

Цель работы - оценить влияние различных концентраций AngII на ядерное и цитоплазматическое созревание ооцитов КРС in vitro в безбелковой среде MEM-альфа с гормонами либо без них.

Материал и методика исследований. Получение ооцитов, их созревание, оплодотворение и культивирование осуществляли так, как нами было описано ранее [2, 1, 3] с некоторыми модификациями. В первой серии экспериментов в среду созревания МЕМ-альфа с гормонами (1мкг/мл гипофизарного свиного фолликулостимулирующего гормона,"ФСГ-супер", ООО "Агробиомед ",ВНИИФБиП с/х животных, и 0.3 ед/мл хорионического гонадотропина человека, хГч, "Московский эндокринный завод") добавляли AngII ("Sigma",США) в концентрациях 10-11, 10-9, 10-7М; во второй серии экспериментов в среду МЕМ-альфа без гормонов добавляли AngII в концентрации 10-7М.

Результаты исследований и их обсуждение. Полученные нами результаты показывают, что AngII в концентрациях 10-11, 10-9, 10-7М не оказывает влияния на ядерное созревание ооцитов КРС in vitro в том случае, если в среду созревания добавлены гормоны (57,1 % в контроле vs 64,6 % в опыте; 60,8 % vs 58,6 %; 65,2 % vs 66,7 %, соответственно).

Однако, если в среду созревания гормоны не добавлялись, AngII в концентрации 10-7М достоверно ингибировал выделение первого полярного тельца (43,6 % в контроле vs 29,3 % в опыте, P<0,05). Это позволяет сделать предварительный вывод, что гонадотропные гормоны нивелируют ингибирующий эффект AngII на ядерное созревание ооцитов in vitro.

В отдельной серии экспериментов нами не было выявлено влияния AngII, добавленного в концентрации 10-7М в среду МЕМ-альфа с гормонами на цитоплазматическое созревание ооцитов КРС, критерием которого являлось развитие эмбрионов до премплантационных стадий - не было разницы между контрольной и опытной группой ни по проценту первоначального дробления (61,1 % vs/ 61.5 %), ни по проценту эмбрионов, достигших стадии морулы/бластоцисты (20 % vs 16,7 %).

Наши данные не согласуются c результатами Giometti et al. [6], которые показывают, что AngII в трех аналогичных концентрациях, в среде 199HEPES без гормонов не оказывал влияния на созревание ооцитов КРС in vitro. По данным этих авторов AngII не действует напрямую на ооциты КРС, а только через фолликулярные клетки (клетки теки), практически полностью аннулируя ингибирующий эффект последних на созревание ядра. Этот факт объясняется авторами тем, что AngII-рецепторы (АТ1 и АТ2) были найдены именно в клетках теки КРС, но не в гранулезных клетках [5, 4]. В то же время у свиней один подтип AngII-рецепторов (АТ1) был найден как в зоне пеллюцида, так и в гранулезных клетках [7] и AngII в концентрации 10-7М в среде с гормонами стимулировал ядерное и цитоплазматическое созревание ооцитов этого вида животных.

Заключение. Таким образом, складывающаяся на данный момент картина, представляется достаточно противоречивой. Механизм действия AngII на созревание ооцитов КРС до конца неясен. Вопрос о перспективах использования AngII в качестве составляющего компонента культуральных сред остается открытым, требуются дальнейшие расширенные исследования.

ЛИТЕРАТУРА

1. Кривохарченко А.С., Сметанина И.Г., Татаринова Л.В. Оплодотворение и последующее развитие ооцитов крупного рогатого скота после сокращенной инкубации со сперматозоидами //Онтогенез. 2001. Т. 32. № 4. С. 283-287.

2. Сметанина И.Г., Татаринова Л.В., Кривохарченко А.С. Влияние состава культу-ральных сред на созревание ооцитов и развитие эмбрионов крупного рогатого скота in vitro // Онтогенез. 2000. Т.31. № 2. С. 139-143.

3. Сметанина И.Г., Татаринова Л.В., Кривохарченко А.С. Оплодотворение ооцитов крупного рогатого скота in vitro в безбелковой культуральной системе//Онтогенез. 2006.Т.37.№6. С.438-443.

4. Acosta T.J., Bersha B., Ozawa T. et al. Evidence for a local endothelin-angiotensin-atrial natriuretic peptide system in bovine mature follicles in vitro: effects on steroid hormones and prostaglandin secretion// Biol. Reprod. 1999. V.61.P.1419-25.

5. Brunswig- Spickenheier B., Mukhopadhyay A.K. Characterization of angiotensin II receptor subtype on bovine thecal cells and its regulation by luteinizing hormone// Endocrinology. 1992.V.131.P.1445-52.

6. Giometti J.C., Bertagnolli A.C., Ornes R.C. et al. Angiotensin II reverses the inhibitory action produced by theca cells on bovine oocyte nuclear maturation// Theriogenology. 2005. V.63. P. 1014-25.

7. Li Y.H., Jiao L.H., Liu R.H. et al. Localization of angiotensin II in pig ovary and its effects on oocyte maturation in vitro// Theriogenology.2004. V.61. P. 447-59.

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2020