ХАРАКТЕР КОНТАМИНАЦИИ СПЕРМЫ ХРЯКОВ, ПОЛОВЫХ ПУТЕЙ БОЛЬНЫХ ЭНДОМЕТРИТОМ СВИНОМАТОК И АБОРТИРОВАННЫХ ПЛОДОВ

Ефанова Л.И., Давыдова В.В., Рубцова Ю.А., Пасько Н.В., Адодина М.И., Крутских Ю.Ю.

ГНУ Всероссийский НИВИ патологии, фармакологии и терапии

В свиноводческих хозяйствах промышленного типа у свиноматок доминирующей является патология репродуктивных органов, проявля-ющаяся в виде эндометритов, абортов, рождения маложизнеспособного приплода, бесплодия, что нарушает технологию воспроизводства и вы-ращивания поросят, снижает эффективность и экономические показатели свиноводческой отрасли [1,2,3].

Среди многочисленных причин, способных влиять на репродук-тивную способность свиноматок, важную роль играют инфекционные агенты (вирусы, патогенные, условно-патогенные микроорганизмы, микроскопические грибы), вызывающие развитие инфекционного про-цесса у животных, особенно на фоне снижения у них естественной рези-стентности. Последнее часто является следствием несбалансированного не только по питательным веществам, но и микро-, макроэлементам, ви-таминам, незаменимым аминокислотам кормления, использования опас-ных для здоровья животных кормов (наличие повышенных концентра-ций различных токсических веществ, либо присутствие в кормах одно-временно нескольких токсикантов, даже в допустимых концентрациях), повышенного микробного загрязнения помещений, воздуха и др. фак-торов.

Эндометриты нередко принимают массовый характер не только у свиноматок после опороса, но и спустя несколько дней после осеменения ремонтных свинок. Микроорганизмы, загрязняющие используемую сперму для осеменения свиноматок, отрицательно влияют, как на выжи-ваемость спермиев, так и могут стать одной из причин развития воспа-ления слизистых оболочек половых путей.

Целью исследования являлось сравнительное изучение видового состава микрофлоры, наличия других патогенов в сперме хряков, абор-тированных плодах и влагалищных смывах больных эндометритом сви-номаток.

Материал и методы В 2007-2008 г.г. исследовано 86 проб спер-мы хряков, 61 проба влагалищных смывов больных эндометритом сви-номаток, 44 абортированных плода разного возраста (от 30 до 112 дней) из 12 крупных свиноводческих хозяйств, в которых регистриро-вались нарушения воспроизводительной функции у свиноматок (прохо-лосты, эндометриты, аборты, мёртворождаемость, мумификация, маце-рация плодов, рождение маложизнеспособных поросят).

Бактериологические исследования проводили по общепринятым методам; микологические – согласно «Методике микологического иссле-дования спермы сельскохозяйственных животных» от 2.01.78г. с изме-нениями от 12.02.86г. (№13-5/7); молекулярно-генетические – в соответ-ствии с наставлениями к использованным в работе тест-системам произ-водства ФГУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, г. Москва, НПО НАРВАК, г. Москва; серологические (РТГА) исследования транс-судата грудной и брюшной полостей плодов старше 60-дневного воз-раста согласно «Наставлениям по диагностике ПВИС» от 23.12.03.

Результаты исследований. I. Сперма хряков. Уровень контами-нации не разбавленной спермы в 67,3% из 61 исследованной пробы ко-лебался от 6900 КОЕ/см3 до 210 тыс. КОЕ/см3 и составил в среднем 52,1 тыс. КОЕ/см3, т.е. более чем в 10 раз превышал допустимый уровень микробного обсеменения не разбавленной спермы (не более 5 тыс. КОЕ/см3). К I классу (отсутствие микроорганизмов) отнесено лишь 1,6%, ко II (до 100 КОЕ/см3) – 4,9%, к III (до 1000 КОЕ/см3) – 1,6%, к IV (до 5000 КОЕ/см3) – 24,6% исследованных проб нативной спермы хряков.

Из 25 проб разбавленной спермы хряков лишь в 6 (24%) микроб-ное обсеменение было менее 500 КОЕ/см3, в т.ч. в 4 (16%) микроорга-низмы не были выделены; в 76% проб этот показатель значительно (бо-лее чем в 8 раз) превышал допустимую концентрацию микроорганизмов и составил в среднем 4,2 тыс. КОЕ/см3.

По уровню микробной контаминации не отвечали ветеринарным требованиям 67,3% не разбавленной и 76% разбавленной спермы хря-ков от числа исследованных проб. В разрезе хозяйств, из которых ис-следована сперма, этот показатель колебался от 33% до 100% по не раз-бавленной и от 40% до 100%- по разбавленной. Из 8 хозяйств не было ни одного, где ветеринарным требованиям соответствовало более 33,3% не разбавленной и более 75% разбавленной спермы; в 4-х хозяйствах 100% исследованной разбавленной спермы и в 2-х хозяйствах не раз-бавленной спермы не отвечали ветеринарным требованиям по уровню микробного загрязнения.

Из 86 исследованных проб спермы в 34 (39,5%) выделены моно-культуры микробов, в т.ч. в 18 (29,5%) не разбавленной и в 16 (64%) разбавленной спермы от числа исследованной. В 4-х пробах разбавлен-ной спермы микрофлора не обнаружена (табл. 1).

Таблица 1

Характер контаминации спермы хряков и влагалищных смывов боль-ных свиноматок микроорганизмами

№ п/п

Исследованный материал

Кол-во проб

Результат бактериологического исследования

монокультуры

ассоциации

м/о не выделены

число

%

число

%

число

%

1

Не разбавленная сперма

61

18

29,5

43

70,5

-

-

2

Разбавленная сперма

25

16

64

5

20

4

16

 

Всего

86

34

39,5

48

55,8

4

4,7

3

Влагалищные смывы

51

13

25,5

38

74,5

-

-

Видовой состав микрофлоры, выделенной из спермы, представлен 10 микроорганизмами (таблица 2), среди которых доминирующими яв-ляются Enterococcus faecalis (38,3%), Pr. vulgaris (24,2%), Staph. epider-midis (11,7%), E. coli (10,9%). Доля остальных 6 видов в целом состави-ла 14,9%, в т.ч. C. diversus – 6,2%, Ps. aeruginosa - 5,5%; Staph. haemo-lyticus, C. freundi, Ent. faecium, E. cloacae – по 0,8%.

Из разбавленной спермы хряков выделено 5 видов микроорганиз-мов, среди которых доминировали  Enterococcus faecalis (54,2%), E. coli (25%), C. diversus (12,5%), доля Pr. vulgaris, C. freundi составила 8,4% (по 4,2% на каждый вид).

Из 128 выделенных культур микроорганизмов при исследовании 61 пробы не разбавленной и 25 проб разбавленной спермы хряков 28,9% представлены монокультурами, 71,1% - ассоциациями из 2-3 ви-дов микроорганизмов. Из разбавленной спермы ассоциации микробов выделялись в 4 раза меньше, чем из не разбавленной (20,8% против 82,7%).

Микологическими исследованиями 65 проб спермы хряков в 44 (67,7%) выделены микроскопические грибы родов Penicillium (47,8%) и Candida (18,5%). Наиболее контаминированной грибами оказалась не разбавленная сперма, в сравнении с разбавленной (80,8% против 15,4%, т.е. разница более чем в 5 раз). Из разбавленной спермы изолированы лишь грибы рода Candida, из не разбавленной, наряду с монокультура-ми Penicillium, Candida, выделены и их ассоциации.

II. Влагалищные смывы свиноматок. Из 51 пробы влагалищных смывов свиноматок, больных эндометритом, выделено и изучено 93 культуры микроорганизмов, представленных 9 видами (табл. 2).

Таблица 2

Виды микроорганизмов, выделенные из влагалищных смывов свинома-ток

п/п

Вид микроба

Количество культур

всего

моно-

ассоциации

число

% от выдел.

число

%

число

%

1

Enterococcusfaecalis

28

30,1

7

29,2

17

70,8

2

E. coli

24

25,8

-

-

28

100

3

Pr. vulgaris

10

10,7

-

-

10

100

4

Ent. faecium

10

10,7

1

10

9

90

5

C. diversus

9

9,7

2

22,2

7

77,8

6

C. freundi

6

6,5

1

16,7

5

83,3

7

Staph. epidermidis

4

4,3

1

25

3

75

8

Staph. haemolyticus

1

1,1

-

-

1

100

9

Citrob. amalonaticus

1

1,1

1

100

-

-

Всего культур

93

100

13

14

80

86

Кол-во исслед. проб

51

100

13

25,5

38

74,5

В 25,5% от числа исследованных проб выделенные микроорга-низмы представлены монокультурами, в остальных – 74,5% - ассоциа-циями из 2-3 видов (табл. 3).

Доминирующими видами были Ent. faecalis (30,1%), E.coli (25,8%), Proteus vulgaris и Enterococcus faecium (по 10,7%); доля других 5-ти  (C. diversus, C. freundi, Staph. epidermidis, Staph. haemolyticus, Citrob. ama-lonaticus) в целом составила 22,7% (от 1,1% до 9,7% на вид).

Ent. faecalis, Proteus vulgaris, Staph. haemolyticus были изолирова-ны только в ассоциации с другими микроорганизмами, либо друг с дру-гом; остальные, как в виде монокультур (от 10% до 29,2%), так и в ассо-циации (от 70,8% до 90,0%).

В целом видовой состав микрофлоры половых путей больных эн-дометритом свиноматок мало отличался от состава микрофлоры спермы хряков, используемой в хозяйствах для осеменения.

Из 9 видов микроорганизмов половых путей свиноматок 8 были изолированы и из спермы хряков, с некоторыми отличиями в частоте выделения таких санитарно-значимых микроорганизмов, как E. coli (в 2,4 раза чаще, чем из спермы) и Proteus vulgaris (в 2,3 раза реже, чем из спермы).

Таблица 3

Виды микроорганизмов, изолированные из спермы хряков

№ п/п

Вид

микроорганизма

Сперма

Нативная

Разбав-ленная

Всего

Монокуль-туры,

%

Ассоциации культур, %

число

%

число

%

число

%

натив-ная

разбавленная

всего

натив-ная

разбавленная

всего

1

Enterococcus faecalis

36

36,4

13

54,2

49

38,3

2,8

76,9

22,5

97,2

23,1

77,5

2

Pr. vulgaris

30

28,8

1

4,2

31

24,2

16,7

-

16,1

83,3

100

83,9

3

St. epidermidis

15

14,4

-

-

15

11,7

33,3

33,3

33,3

66,7

-

66,7

4

E. coli

8

7,7

6

25

14

10,9

-

83,3

35,7

100

16,7

64,3

5

C. diversus

5

4,8

3

12,5

8

6,2

-

100

25

100

-

75

6

Ps. aeruginosa

7

6,7

-

-

7

5,5

100

-

100

-

-

-

7

C. freundi

-

-

1

4,2

1

0,8

-

100

100

-

-

100

8

Staph. haemolyticus

1

0,99

-

-

1

0,8

-

-

-

100

-

100

9

Enterob. cloacae

1

0,99

-

-

1

0,8

-

-

-

100

-

100

10

Enterococ. faecium

1

0,99

-

-

1

0,8

-

-

-

100

-

100

Число культур

104

 

24

 

128

 

18

19

37

86

5

91

%

 

100

 

100

 

100

17,3

79,2

28,9

82,7

20,8

71,1

Количество

иссл. проб

62

100

24

100

86

100

29

79,2

43

 

 

 

Несколько реже из влагалищных смывов изолирован Ent. faecalis (30,1% против 36,4%), но в том и другом случаях этот микроорганизм по частоте выделения занимал первое место среди всех изолированных.

Микологическими исследованиями 5 проб влагалищных смывов больных свиноматок в 4 (80%) выделены микроскопические грибы, в т.ч. в двух – рода Candida, в одном- Asp. fumigatus, в другом - Candida + Asp. fumigatus.

III. Абортированные плоды. Из 13 хозяйств, из которых была исследована сперма хряков и влагалищные смывы больных эндометри-том свиноматок, молекулярно-генетическому анализу подвергнут мате-риал от 44 абортированных плодов, а от 21 плода, кроме того, в РТГА исследован транссудат из грудной и брюшной полостей на наличие спе-цифических антител к парвовирусу свиней. Параллельно с материалом от плодов в ПЦР исследованы сперма хряков и влагалищные смывы свиноматок (табл. 4).

Таблица 4

Результаты молекулярно-генетических исследований спермы хряков, влагалищных смывов больных свиноматок и абортированных плодов

№ п/п

Геном возбудителя

Сперма

Влаг. смывы

Аборт. плоды

исследовано проб

положит. проб

% положит.

исследовано проб

положит. проб

% положит.

исследовано проб

положит. проб

% положит.

1

РРСС

51

0

0

54

3

5,6

44

13

29,5

2

ЦВС-2

46

16

34,8

45

0

0

39

19

48,7

3

Лептоспир

20

0

0

49

0

0

44

0

0

4

Хламидий

35

0

0

49

9

18,4

44

3

6,8

5

Микоплазм

21

1

4,8

27

12

44,4

40

4

10

6

Кампилобактерий

12

0

0

23

0

0

35

1

2,9

7

КЧС

5

0

0

-

-

-

8

0

0

8

Листерий

-

-

-

-

-

-

9

0

0

9

ТГС (ИФА)*

21

0

0

-

-

-

-

-

-

10

ПВИС (ИФА)**

-

-

-

-

-

-

21

0

0

Примечание: *-антиген вируса ТГС; **-специфические антитела к парвовирусу свиней

Из исследованной методом ПЦР спермы хряков из 8 хозяйств в 34,8% проб выделен геном цирковируса свиней (2 хозяйства), в 4,8% - геном патогенных микоплазм (1 хозяйство). Во влагалищных смывах больных эндометритом свиноматок из 9 хозяйств в 5,6% проб обнару-жен геном вируса РРСС (2 хозяйства), 18,4%- хламидий (2 хозяйства), 44,4%- патогенных микоплазм (2 хозяйства). Геномы патогенных мико-плазм и хламидий в этих 2-х хозяйствах обнаружены одновременно во влагалищных смывах больных свиноматок, но у разных животных.

Более широкий набор патогенов по результатам молекулярно-генетических исследований выявлен в абортированных плодах, из 13 хозяйств, включая хозяйства, из которых исследованы влагалищные смывы (9) и сперма хряков (8).

В патматериале от 26 (59%) из 44 абортированных плодов 9-ти хозяйств выделен геном одного или нескольких патогенов одновремен-но. Так, геном вируса РРСС обнаружен в 7 (27%), ЦВС-2 – 8 (30,8%), ЦВС + РРСС – 6 (23,1%), ЦВС + микоплазмы – 1 (3,8%), ЦВС + хлами-дии - 2 (7,7%), ЦВС + микоплазмы + хламидии – 1 (3,8%), ЦВС + мико-плазмы + кампилобактерии – 1 (3,8%) от числа положительных проб.

Положительные результаты ПЦР на РРСС получены в 29,5% от числа 44 исследованных абортплодов (4 хозяйства), в т.ч. в 16% - само-стоятельно, а в 13,7%- совместно с ЦВС-2; на ЦВС-2 – в 48,7% (6 хо-зяйств) из 39 исследованных абортплодов, в т.ч. в 20,5% - самостоятель-но, а в 28,2% - в сочетании с РРСС, хламидиями, микоплазмами, кампи-лобактериями. При этом от разных абортированных плодов одного хо-зяйства одновременно выделяли геномы 2-х (РРСС, ЦВС), реже 3-4 па-тогенов. Ни в одном из 44 абортплодов не обнаружен геном патогенных лептоспир, листерий, вируса КЧС; не выявлены специфические антитела к парвовирусу у плодов последнего триместра супоросности свинома-ток.

В целом, из 13-ти хозяйств наличие того или иного патогена уста-новлено в абортированных плодах 6-ти (46,1%) хозяйств. По результа-там серологического исследования (ИФА) сывороток крови хряков, сви-номаток из этих хозяйств выявлена разная степень циркуляции вирусов ЦВС-2, РРСС - основных патогенов, геномы которых выделены из пло-дов, во всех 13-ти хозяйствах (уровень серопозитивности от нескольких до 100% исследованных проб).

Увеличение случаев абортов среди свиноматок в хозяйствах, где циркулируют указанные выше патогены, проходило на фоне поступле-ния в организм с кормами фузариозных микотоксинов, в т.ч. зеаралено-на (от 0,02мг/кг корма), Т-2 токсина (0,1мг/кг и выше), либо одновре-менного присутствия, в меньших концентрациях, этих и других мико-токсинов.

Заключение. Проведенными исследованиями установлен высокий уровень бактериальной и грибковой контаминации, как не разбавлен-ной, так и разбавленной спермы хряков. Выявлена прямая связь между контаминацией спермы хряков микроорганизмами и заболеванием сви-номаток после осеменения эндометритами. Не отвечающими ветеринар-ным требованиям было 67,3% не разбавленной и 82,6% разбавленной спермы, использованной для осеменения свиноматок.

От больных эндометритом свиноматок, ремонтных свинок, спермы хряков изолировано 11 видов микробов, 3 вида микроскопических гри-бов, при этом 8 видов бактерий, кокков и грибы рода Candida выделены как из спермы хряков, так и влагалищных смывов.

Среди микроорганизмов доминировали потенциальные возбуди-тели «факторных инфекций», такие как: Enterococcus faecalis, доля кото-рого в разбавленной сперме составила 54,2%, не разбавленной – 36,4%, во влагалищных смывах – 30,1%; E.coli – соответственно 25%; 7,7% и 25,8%; Proteus vulgaris – 28,8%; 4,2% и 10,7%; цитробактерии (C. diver-sus, C. freundi, C. amalonaticus) – 4,8%, 16,7% и 17,3%. Ps. aeruginosa  изолирована из не разбавленной спермы в 6,7% от всех выделенных микроорганизмов.

Достаточно высокий уровень контаминации разбавленной спермы микроорганизмами косвенно указывает на устойчивость их к антибакте-риальным препаратам, используемым для санации спермы и значение комплекса ветеринарно-санитарных мероприятий при получения спер-мы от хряков, искусственном осеменении свиноматок; изыскание новых антибактериальных композиций для разбавления спермы, ротации име-ющихся.

Наличие в сперме генома вируса ЦВС-2 (34,8%), микоплазм (4,8%) не исключает роль спермы, как фактора передачи этих патогенов свино-маткам и развития у них патологии в период супоросности.

Обнаружение во влагалищных смывах больных свиноматок гено-ма вируса РРСС (5,6%), хламидий (18,4%), микоплазм (44,4%) свиде-тельствует об участии их в патологии репродуктивных органов, переда-че возбудителей от одного животного другому при совместном содер-жании.

Установлено участие в 59% случаев в развитии абортов у свино-маток таких патогенов, как: вирус РРСС (29,5%), ЦВС-2 (48,7%), мико-плазмы (10%), хламидии (6,8%), кампилобактерии (2,9%). Вирус РРСС стал причиной аборта в 16% самостоятельно, а в 13,7% - совместно с вирусом ЦВС-2; вирус ЦВС-2 в 18% и 43% случаев соответственно в сочетании с другими патогенами (РРСС, микоплазмы, хламидии, кампи-лобактерии).

В условиях циркуляции среди свиней, различных патогенов обострение эпизоотической ситуации с клиническим проявлением ин-фекционной патологии, в т.ч. абортов на разных стадиях супоросности у свиноматок, происходит под влиянием на организм неблагоприятных факторов, среди которых ведущую роль занимают фузариозные мико-токсины используемых кормов.

Литература. 1. Кукушкин С.А., Рахманов А.М. «Болезни свиней, протекающие с нарушением воспроизводства и их профилактика» 2. Мисайлов В.Д., Коцарев В.Н., Шахов А.Г., Сулейманов С.М. «Состоя-ние и пути решения проблемы борьбы с болезнями органов размноже-ния и молочной железы у свиней». 3. Филатов А.В., Аккузин Г.Д. «Рас-пространение неспецифических воспалительных заболеваний матки и молочной железы у свиноматок и влияние на воспроизводительную спо-собность»//«Актуальные проблемы болезней органов размножения и молочной железы у животных» Междунар. научно-практическая конф. Воронеж, 5-7 октября 2005 г. Матер. конф.- Воронеж: Европолиграфия 2005.- 432 с.

CHARACTER KONTAMINACII OF SPERM OF MALE PIGS, SEXUAL WAYS SICK ЭНДОМЕТРИТОМ SOWS AND ABORTIROVANNY FRUITS

Efanova L.I., Davydova V.V., Rubtsova J.A., Pasko N.V.,

Adodina M.I., Krutskih J.J.

Russian Research Veterinary Institute of Pathology, Pharmacology and

Therapy, Voronezh, Russia

This article present the comparative characteristic of species composi-tion of microflora, the presence of other pathogens in the sperm of boars, the aborted fetus and sheathed washings of sick with endometritis sows.

№ п/п

Вид

микроорганизма

Сперма

Нативная

Разбав-ленная

Всего

Монокуль-туры,

%

Ассоциации культур, %

число

%

число

%

число

%

натив-ная

разбавленная

всего

натив-ная

разбавленная

всего

1

Enterococcus faecalis

36

36,4

13

54,2

49

38,3

2,8

76,9

22,5

97,2

23,1

77,5

2

Pr. vulgaris

30

28,8

1

4,2

31

24,2

16,7

-

16,1

83,3

100

83,9

3

St. epidermidis

15

14,4

-

-

15

11,7

33,3

33,3

33,3

66,7

-

66,7

4

E. coli

8

7,7

6

25

14

10,9

-

83,3

35,7

100

16,7

64,3

5

C. diversus

5

4,8

3

12,5

8

6,2

-

100

25

100

-

75

6

Ps. aeruginosa

7

6,7

-

-

7

5,5

100

-

100

-

-

-

7

C. freundi

-

-

1

4,2

1

0,8

-

100

100

-

-

100

8

Staph. haemolyticus

1

0,99

-

-

1

0,8

-

-

-

100

-

100

9

Enterob. cloacae

1

0,99

-

-

1

0,8

-

-

-

100

-

100

10

Enterococ. faecium

1

0,99

-

-

1

0,8

-

-

-

100

-

100

Число культур

104

 

24

 

128

 

18

19

37

86

5

91

%

 

100

 

100

 

100

17,3

79,2

28,9

82,7

20,8

71,1

Количество

иссл. проб

62

100

24

100

86

100

29

79,2

43

 

 

 

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2021