АЛЛЕРГЕННЫЕ СВОЙСТВА КОМПЛЕКСНОГО ПРЕПАРАТА СЕЛЕНА – СЕЛЕМАГА

Востроилова Г.А.1, Ческидова Л.В.1, Балым Ю.П.2

1ГНУ Всероссийский НИВИ патологии, фармакологии и терапии

2 Управление ветеринарии Харьковской област, Украина

Препараты селена находят широкое применение в ветеринарии [1-6]. Кроме высокотоксичного селенита натрия в практику рекомендованы менее токсичные лекарственные средства на основе селенита натрия: се-левит, селенобен, селемаг и другие [2,3]. Однако данных об их аллер-генных свойствах в литературе нет. Поэтому целью наших исследований была оценка аллергенных свойств комплексного препарата – селемага, содержащего селенит натрия и токоферола ацетат.

Материалы и методы исследований. В опытах при постановке реакций специфической агломерации лейкоцитов (РСАЛ), специфическо-го лизиса лейкоцитов (РСЛЛ) и дегрануляции тучных клеток по Шварцу (РДТК) использовали: две опытные группы морских свинок, третью – контрольную (по 3 особи в каждой группе, массой 250-300г, имеющих белые пятна на боках туловища), а также 3 крыс для получения тучных клеток.

Первичную оценку селемага проводили путем однократной внут-рикожной сенсибилизации. Для этого в кожу наружной поверхности уха морских свинок опытных групп с помощью туберкулинового шприца вводили 0,1мл селемага. Контрольным животным вводили 0,1мл физио-логического раствора. Выявление сенсибилизации проводили через 12 дней путем накожного нанесения разрешающей дозы селемага (кон-трольным животным наносили 0,9% раствор хлорида натрия).

Затем проводили комплексную оценку сенсибилизирующих свойств препарата. На 12-е сутки после однократного введения морским свинкам селемага в кожу уха, на выстриженные участки боков размером 3х3см дополнительно наносили в течение недели 7 эпикутанных аппли-каций препарата. Этот эксперимент одновременно позволял выявить опасность развития аллергического дерматита. Через 24 часа, после уче-та реакции кожи, брали кровь для выполнения лабораторных иммуно-логических тестов.

Реакция специфической агломерации лейкоцитов (РСАЛ). В гепа-ринизированную кровь от морских свинок опытных групп добавляли селемаг и основу препарата, а в кровь от контрольных животных – фи-зиологический раствор. Затем все пробы выдерживали в термостате при температуре +37°С в течение 2-х часов, по истечении которых делали толстые мазки и без фиксации окрашивали их 0,01%-ным раствором ме-тиленового синего. В каждом мазке подсчитывали по 500 лейкоцитов, отдельно учитывая число клеток, образующих агрегаты из 3-х и более лейкоцитов, а затем вычисляли процент агломерированных лейкоцитов.

Реакция специфического лизиса (РСЛЛ). В кровь от опытных групп морских свинок вводили исследуемый препарат и основу препа-рата, а в кровь от контрольных животных – физиологический раствор. Все пробы выдерживали в термостате при температуре +37°С в течение 2-х часов. Затем кровь в этих пробах была обработана 3%-ным раство-ром уксусной кислоты и произведен подсчет лейкоцитов. Показатель РСЛЛ рассчитывали по формуле:

5

Постановку РДТК осуществляется следующим образом: для полу-чения тучных клеток крыс забивали кровопусканием, вводили внутри-брюшинно 6-8мл подогретого до 37°С раствора Тироде без глюкозы, после легкого массажа брюшной стенки в течение 1-1,5 минут делали разрез по средней линии длиной 1,5-2см, и собирали экссудат, стекаю-щий с петель кишечника в смоченную гепарином пробирку.

Препараты готовили на обезжиренных предметных стеклах, окрашенных 0,3% спиртовым раствором нейтрального красного, и вы-сушенных при комнатной температуре. Опытная  проба включала в се-бя: взвесь тучных клеток, сыворотку крови морских свинок и селемаг; контрольная-1 – сыворотку крови и тучные клетки; контрольная-2 – тучные клетки и раствор аллергена. Все ингредиенты системы вносили в объеме 0,03мл. Далее препараты покрывали покровным стеклом, инку-бировали 15 минут в термостате при 37°С и микроскопировали. В каж-дой камере подсчитывали 100 клеток.

Тесты считали отрицательными, если процент реагирующих кле-ток (уменьшение окраски гранул, изменение формы клеток, вакуолиза-ция протоплазмы, гиперхромазия) не превышал 10. Однако если хими-ческий аллерген вызывал неспецифические изменения клеток и в контро-ле-2 процент измененных клеток приближался или превышал этот пре-дел, то реакцию оценивали путем вычитания процента измененных кле-ток в контроле из числа таковых в опытной группе.

Результаты исследований. Первичная оценка селемага показала, что через 10-15 минут после его внутрикожного введения в объеме 0,1мл (50мкг), не отмечается видимых изменений со стороны ушных ра-ковин.

При нанесении через 12 дней на выстриженные участки одного из боков морских свинок разрешающей дозы селемага, видимая реакция (гиперемия, зуд, отек) отсутствовала.

Селемаг не оказывал раздражающего действия и не вызывал у опытных животных при многократных аппликациях контактного дерма-тита: покраснения, зуд, отек, шелушения кожи отсутствовали, вновь от-растающая шерсть была гладкой и блестящей.

Через 24 часа после учета эпикутанных аппликаций были постав-лены иммунологические тесты на аллерген in vitro: реакция специфиче-ской агломерации лейкоцитов (РСАЛ) и реакция специфического лизиса лейкоцитов (РСЛЛ). Это дает возможность выявить аллергическую ре-акцию замедленного типа связанную с сенсибилизацией клеток.

РСАЛ основана на специфическом склеивании (агломерации) лей-коцитов при добавлении аллергена, вызывающего сенсибилизацию  in vitro к крови сенсибилизированного животного. Феномен агломерации является первой фазой аллергической реакции клеток. Данная реакция учитывается по величине отношения процента агломерации лейкоцитов в опытном мазке (АО) к проценту агломерации лейкоцитов в контроль-ном мазке (АК), при этом реакция считается положительной, если про-цент агломерированных лейкоцитов в опытной пробе выше или ниже показателя агломерации контрольной пробы в 1,5 раза. Это объясняется тем, что слабая и умеренная сенсибилизация сопровождается увеличени-ем агломерации лейкоцитов под влиянием аллергена, а при высокой ак-тивности исследуемого химического соединения возможен лизис агло-мерированных клеток, вследствие чего процент РСАЛ становится суще-ственно ниже спонтанного уровня агломерации. Результаты РСАЛ у морских свинок, сенсибилизированных селемагом, представлены в таб-лице.

Из данных таблицы следует, что соотношение процентов агломе-рированных лейкоцитов в опытных группах несущественно отличается от контроля: разница показателей составила 1,1 и 1,3 раза соответствен-но.

Аллергические реакции могут заканчиваться лейкоцитолизом. Ре-акция специфического лизиса лейкоцитов расценивается как положи-тельная при показателе 10% и выше.

Таблица

Результаты РСАЛ у морских свинок

Опытная группа 1 (селемаг)

Опытная группа 2 (основа препарата)

Контроль

18,2

29,4

9,2

16

10,4

22,4

14,8

21,4

14,4

Среднее 16,3

Среднее 20,4

Среднее 15,3

Показатель для опытной группы 1 (селемаг) составил – 4,5%, для второй опытной (основа препарата) – 9,7%, для контроля – 4,3%. Таким образом, результат в опытных группах и в контроле отрицательный.

Результаты реакции дегрануляции тучных клеток во всех группах не превышал 10%, и составил в контрольной группе 5%, а в опытной - 8,25%.

Выводы. Исследование сенсибилизирующего действия селемага не выявило выраженной реакции иммунной системы подопытных живот-ных на данный препарат. Селемаг не обладает раздражающим действи-ем, не вызывает контактного дерматита после многократных накожных аппликаций; реакции специфического лизиса и агломерации лейкоцитов – отрицательны.

Исследование аллергизирующих свойств селемага при постановке непрямой реакции дегрануляции тучных клеток, не выявило выражен-ной реакции иммунной системы подопытных животных на данный пре-парат: результаты РДТК отрицательны.

Литература. 1. Беляев В.И. Селекор в ветеринарии/В.И.Беляев, Д.В.Дегтярев, Т.Е.Мельникова//В кн. «Соединения селена и здоровье».- М., 2004. - С. 129-134. 2. Дашукаева К.Г. Применение селемага для профилактики патологии родов и послеродового периода у коров/К.Г. Дашукаева, М.А. Зибров, В.А. Сафонов, О.В. Ситникова//Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: Мат. межд. науч.-практ. конф. 23-25.09.2002г. - Воронеж, 2002. - С. 231-215. 3. Карпуть И.М. Витаминно-минеральный препарат селевит в повышении резистентности и профилактики гастроэнтеритов у телят/И.М. Карпуть, С.Л. Борознов//Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии/Мат. коорд. совещания 19-23.05.1997. - Воронеж, 1997. – С. 317-319. 4. Папазян Т. Преодоление селенодефицита у молочного ско-та/Т. Папазян//Молочное и мясное скотоводство. – 2004. - №4. – С. 14-15. 5. Сидоркин В. Некоторые аспекты применения препарата «Е-селен» в свиноводстве/В. Сидоркин//Свиноводство. – 2003. - №4. – С. 24-25. 6. Фацетов А.И. Молочная продуктивность коров, рост и развитие телят при назначении селенсодержащих препаратов: Автореф. дисс… канд. сельскохоз. наук/А.И. Фацетов. – Воронеж. – 2002. – 28 с.

ALLERGENIC PROPERTIES OF A COMPLEX PREPARATION OF SELENIUM - SELEMAG

Vostroilova G.A.1, Cheskidova L.V.1, Balim Y.P.2

1 Russia Research Veterinary Institute of Pathology, Pharmacology and Therapy, Voronezh, Russia

2 Managements of Veterinary Science of the Kharkov Area, Kharkov, Ukraine

Research sensibilization action of selemag has not revealed the ex-pressed reaction of immune system of experimental animals to the given preparation. Selemag does not possess irritating action, does not cause con-tact dermatitis after repeated applications in the skin; reactions specific lysis and agglomerations of leukocytes - are negative. Research allergenic proper-ties of selemag at statement of indirect reaction degranulations mast cells, has not revealed the expressed reaction of immune system of experimental animals to the given preparation: results RDMC are negative.

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2021