НОВЫЙ СПОСОБ ТЕРАПИИ БОЛЬНЫХ ОСТРЫМ ЭНДОМЕТРИТОМ КОРОВ

Конопельцев И.Г., Муравина Е.С.

ФГБОУ ВПО Вятская государственная сельскохозяйственная академия,

Киров, Россия

Из числа заболеваний репродуктивных органов послеродового пе-риода наиболее широкое распространение имеет острый гнойно-катаральный эндометрит. В настоящее время в ветеринарном акушерстве накоплен богатый материал по этиопатогенезу заболевания, а также по во-просам его профилактики и терапии (Конопельцев И.Г., 2004; Асоев П., Баженова Н.В., 2009; Шабунин С.В. и др., 2011). Однако вместе с тем уро-вень заболеваемости коров, особенно высокопродуктивных, не снижается. Современное состояние ветеринарной медицины характеризуется всё бо-лее настойчивым внедрением в практику экологически безопасных, деше-вых и высокоэффективных способов и средств лечения больных живот-ных. К ним можно отнести и озонидотерапию. В настоящее время в усло-виях производства при акушерской патологии и гинекологических заболе-ваниях у коров апробированы различные озонированные вещества, но по-иск оптимизации форм их применения продолжается.

Целью работы являлась разработка нового способа терапии больных послеродовым острым эндометритом коров с использованием озонирован-ной эмульсии на основе рыбьего жира и настоя семени льна.

Задачи исследования: - изучить возможность получения озонирован-ной эмульсии; - установить фармако-токсикологические характеристики новой озонированной эмульсии и определить её антимикробные свойства;

- определить терапевтическую эффективность озонированной эмульсии при послеродовом остром эндометрите у коров.

Материал и методы исследований. Разработка методики озонидо-терапии выполнена с использованием отечественного генератора медицин-ского озона «Озон-М-50» (МАЮИ 941714.004 ТУ) производства ОАО «Электромашиностроительный завод им. ЛЕПСЕ» г. Киров, рыбьего жира, изготовленного согласно ТУ 8112-04977536-1-93.

Микробиологические исследования проводили в условиях лаборато-рии кафедры микробиологии Кировской государственной медицинской академии.

В качестве тест-культур использовали музейные штаммы Staphylococcus aureus 35 и Escherihia coli М-17. Оценку антимикробной активности озони-рованной эмульсии в отношении тест-культур проводили методом серий-ных разведений чистой микробной культуры, куда вносили исследуемые вещества, перемешивали в течение 30 минут при комнатной температуре с последующим высевом на соответствующую плотную питательную среду и инкубировали при 37оС в течение 72 часов.

Фармако-токсикологическую оценку озонированной эмульсии осу-ществляли согласно нормативным документам: «Доклинические испыта-ния новых медицинских иммунобиологических препаратов. Основные по-ложения. РД 42-28-8-89», «Методы контроля медицинских иммунобиоло-гических препаратов вводимых людям. Методические указания. Мук 4.1/4.2.588-96», «Государственные испытания и регистрация новых меди-цинских иммунобиологических препаратов. Санитарные правила СП 3.3.2.561-96».

Научно-производственный опыт по оценке терапевтической эффек-тивности озонированной эмульсии провели на животноводческом ком-плексе ЗАО «Агрофирмы «Дороничи» Кировской области на коровах чер-но-пестрой голштинизированной породы с молочной продуктивностью 5,1- 7 тысяч кг (Методические указания по диагностике, лечению, профи-лактике акушерско-гинекологических болезней и ветеринарному контролю за воспроизводительной функцией коров, Воронеж,1986). После установ-ления диагноза на послеродовой острый гнойно-катаральный эндометрит животным подопытной группы внутриматочно назначали озонированную эмульсию в количестве 100-50 мл с интервалом 48 часов до клинического выздоровления. Животным контрольной группы в полость матки по той же схеме вводили препарат Эндометромаг.

Результаты исследования. В результате фундаментальных изыска-ний было установлено, что предъявляемым требованиям по отсутствию пенообразования и повышенному содержанию озонидов отвечает эмуль-сия, состоящая из равных частей рыбьего жира и настоя семени льна с до-бавлением эмульгатора-стабилизатора.

На следующем этапе провели изучение антимикробной активности озонированной эмульсии, которую готовили путем барботирования озоно - кислородной смесью с концентрацией озона 20 мг/л и скоростью подачи кислорода 0,3 л/мин в течение пяти часов.

Путем прямого подсчета колоний, выросших на плотной питатель-ной среде, проводилась оценка антимикробной активности. Данные опы-тов отображены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1

Антимикробная активность озонированной эмульсии в отношении E. coli

Показатель

Время

109

108

107

106

105

104

103

102

Физ.

раствор

24 ч

СПЛР

СПЛР

СПЛР

БКМИК

БКМИК

151

19

-

48 ч

СПЛР

СПЛР

СПЛР

БКМИК

БКМИК

151

19

-

72 ч

СПЛР

СПЛР

СПЛР

БКМИК

БКМИК

151

19

3

Не

озонирован.

эмульсия

24 ч

СПЛР

СПЛР

СПЛР

БКМИК

1012

132

16

-

48 ч

СПЛР

СПЛР

СПЛР

БКМИК

1012

132

16

-

72 ч

СПЛР

СПЛР

СПЛР

БКМИК

1012

132

16

-

Озонированная

эмульсия

24 ч

РОСТ ОТСУТСТВУЕТ

48 ч

72 ч


Таблица 2

Антимикробная активность озонированной эмульсии в отношении St. aureus

Показатель

Время

109

108

107

106

105

104

103

102

Физ.

раствор

24 ч

СПЛР

СПЛР

СПЛР

СПЛР

БКМИК

764

68

1

48 ч

СПЛР

СПЛР

СПЛР

СПЛР

БКМИК

776

71

3

72 ч

СПЛР

СПЛР

СПЛР

СПЛР

БКМИК

776

71

3

Не

озонирован.

эмульсия

24 ч

СПЛР

СПЛР

СПЛР

БКМИК

964

284

46

-

48 ч

СПЛР

СПЛР

СПЛР

БКМИК

964

284

46

-

72 ч

СПЛР

СПЛР

СПЛР

БКМИК

964

284

46

-

Озонирован.

эмульсия

24 ч

РОСТ ОТСУТСТВУЕТ

48 ч

Из анализа цифрового материала таблиц 1 и 2 можно сделать заклю-чение о том, что озонированная эмульсия при данном режиме барботажа озоно-кислородной смесью обладает выраженными антимикробными свойствами в отношении музейных штаммов E. coli и St. aureus.

Положительные результаты лабораторных исследований по опреде-лению антимикробных свойств озонированной эмульсии, явились основа-нием для определения её фармако-токсикологических характеристик. Для определения острой токсичности озонированную эмульсию разводили сте-рильным физиологическим раствором с шагом 2. Каждое разведение гомо-генизировали до получения однородной масляной эмульсии и вводили внутрибрюшинно белым мышам. Максимальная из введенных доз при этом составляла 0,5 мл, что превышает более 15 лечебных доз. Объём ле-чебной дозы рассчитывали исходя из планируемой лечебной дозы для крупного рогатого скота (75 мл) с учётом коэффициентов отношения мас-сы и площади поверхности тела животных. После введения данного сред-ства за животными наблюдали в течение 7 суток, регистрируя их гибель, а также другие проявления интоксикации (изменение поведенческих, темпе-ратурных реакций, снижение массы тела). Белым мышам контрольной группы внутрибрюшинно вводился физиологический раствор в объёме по 0,5 мл. Через 24 часа и 7 суток от момента введения эмульсии и физрас-твора натрия хлорида часть животных из каждой группы усыпляли эфир-ным наркозом для оценки патологоанатомической и гистологической кар-тины. С этой же целью подвергались вскрытию все павшие в ходе опыта животные. В течение срока наблюдения у отдельных животных состав-ляющих опытную группу, которым вводилось изучаемое средство в мак-симальных дозах, регистрировались отказ от пищи, снижение двигатель-ной активности, взъерошивание волосяного покрова. Результаты экспери-мента обобщены в таблице 3.

Величина ЛД50 при внутрибрюшинном введении составила 0,562 мл, что превышает расчетную терапевтическую дозу более чем в 20 раз.

Вскрытие животных опытной и контрольной групп, усыпленных в контрольные сроки, не выявило у них патологии внутренних органов.

Таблица 3

Проявления острого токсического действия озонированной эмульсии в
зависимости от дозы её введения

Кол-во

введенного препарата, лечебных доз

Кол-во

животных в группе

Кол-во животных с проявлениями

токсического действия

Кол-во

погибших животных

снижение массы

изменение

температуры

изменение

поведенческих

реакций

12

6

0

0

3

2

6

6

0

0

1

0

3

6

0

0

0

0

1,5

6

0

0

0

0

0,75

6

0

0

0

0

Для определения хронической токсичности озонированную эмуль-сию вводили внутрибрюшинно двум группам белых мышей в количестве, соответственно, одной (0,02 мл) и двух (0,04 мл) лечебных доз, взятых в объеме 0,5 мл. Препарат вводился пятикратно с интервалом между инъек-циями 1 сутки. Животным контрольной группы в те же сроки в объеме 0,5 мл внутрибрюшинно вводился физиологический раствор. Наблюдение за лабораторными животными осуществляли в течение всего срока введения препаратов, а также на протяжении 7 суток от момента последней инъек-ции, регистрируя при этом возможные проявления интоксикации. Через 24 часа и 7 суток от момента последнего введения данных растворов часть животных усыпляли хлороформом для оценки патоморфологической кар-тины. В течение срока наблюдения гибели животных, а также других пато-логических проявлений не было зарегистрировано. При вскрытии живот-ных признаков дистрофии, воспаления и гемодинамических нарушений не выявлено. Гистологическое исследование секционного материала также не выявило патологических изменений внутренних органов.

Для оценки местного действия озонированную эмульсию вводили группе белых мышей внутримышечно пятикратно, с интервалом в одни су-тки. Объем эмульсии для однократного введения составлял 0,02 мл (одна лечебная доза). Контрольной группе животных в таком же объеме и в те же сроки вводился физиологический раствор. За время наблюдения признаков местного воспалительного и раздражающего действия препарата не выяв-лено.

Следовательно, результаты исследований по оценке острой, хрони-ческой токсичности и раздражающего действия озонированной эмульсии позволили нам продолжить исследования по изучению её аллергизирую-щего действия.

Определение гиперчувствительности немедленного типа проводили методом воспроизведения анафилаксии у морских свинок. Для этого жи-вотных предварительно сенсибилизировали путем трехкратного введения озонированной эмульсии с интервалом между инъекциями одни сутки. Первая сенсибилизирующая инъекция проводилась подкожно, две после-дующие – внутримышечно.

Количество эмульсии для однократного введения составляло 0,12 мл (расчетная лечебная доза для морской свинки). Через две недели после за-ключительной сенсибилизирующей инъекции животным внутрибрюшинно вводили разрешающую дозу эмульсии (0,25 мл), после чего за ними на-блюдали в течение 30 минут. Тяжесть шока оценивали по следующей шка-ле:

А – взъерошивание шерсти, почесывание лапами морды;

Б – периодическое чихание, понижение температуры;

В – спастический кашлевой синдром, падение на бок;

Г – резкое нарушение дыхания, судороги, гибель в течение 5…7 минут;

Д – реакция отсутствует.

Индекс синдрома в группе вычисляли по формуле Вейгла:

И=((Ах1) (Бх2) (Вх3) (Гх4)) / (А+Б+В+Г)

Животным группы отрицательного контроля вместо предваритель-ных сенсибилизирующих инъекций по такой же схеме вводился физиоло-гический раствор. В качестве положительного контроля использовались животные, подготовленные к шоку сенсибилизацией нормальной лошади-ной сывороткой, введенной подкожно двукратно, в количестве 0,1 мл за две недели до разрешающей внутрисердечной инъекции этого препарата в количестве 0,2 мл.

Результаты эксперимента обобщены в таблице 4.

Таблица 4

Проявления анафилаксии у морских свинок

Показатель

Количество животных

в группе

Количество животных с проявлениями анафилаксии

Индекс

синдрома

в группе

А

Б

В

Г

Д

Опытная

15

0

0

0

0

15

0

Положительный контроль

10

1

4

3

2

0

2,6

Отрицательный контроль

10

0

0

0

0

10

0

Представленные данные показывают, что озонированная эмульсия не оказывает анафилактогенного действия на морских свинок.

Гиперчувствительность замедленного типа характеризовали по из-менению массы конечности животных.

Для этого белых мышей сенсибилизировали внутрибрюшинно дву-кратно, с интервалом одни сутки одной лечебной дозой озонированной эмульсии (0,02 мл). Спустя 5 суток после заключительной сенсибилизи-рующей инъекции в подушечку одной задней лапы вводили 0,05 мл озони-рованной эмульсии, другой – такой же объем физиологического раствора. Через сутки животных усыпляли хлороформом, задние лапы ампутировали по уровню пяточного сустава и проводили их взвешивание. По разнице массы лап оценивали уровень воспалительной реакции (отека). Индекс отека рассчитывали по формуле:

И = (Во - Вк)/Вк*100 %, где

Во – масса опытной лапы;

Вк – масса контрольной лапы.

В качестве контроля в данном эксперименте были использованы жи-вотные, которым, вместо предварительных сенсибилизирующих инъекций в те же сроки и тех же объемах вводился физиологический раствор. Ре-зультаты эксперимента представлены в таблице 5.

Таблица 5

Проявления гиперчувствительности замедленного типа у белых мышей

Препарат для

сенсибилизирующей инъекции

Средняя масса опытной лапы, мг

Средняя масса контрольной

лапы, мг

Индекс отека

в группе, %

Озонированная эмульсия

145,4

142,7

1,89

Физиологический раствор

148,6

145,8

1,92

Как видно из представленных данных, индекс отека в обеих группах практически одинаков, что свидетельствует о том, что озонированная эмульсия не вызывает реакций гиперчувствительности замедленного типа.

Результаты по оценке терапевтической эффективности озонирован-ной эмульсии при послеродовом остром гнойно-катаральном эндометрите у коров показаны в таблице 6.

Таблица 6

Терапевтическая эффективность применения озонированной эмульсии при
послеродовом остром эндометрите у коров

Показатель

Озонированная эмульсия

Эндометромаг

Количество больных коров

21

10

Выздоровело, коров / %

21/100

10/100

Количество внутриматочных введений

7,0±0,4

8,9±0,5

Оплодотворилось, коров / %

21/100

10/100

Оплодотворилось после 1-го осеменения, коров / %

11 / 52,3

3/30

Коэффициент оплодотворения

1,52±0,13

1,9±0,11

Количество дней от выздоровления до стельности

52±4,1

111±9,4

Применение озонированной эмульсии при терапии коров, больных острым послеродовым гнойно-катаральным эндометритом по совокупности признаков в сравнении с препаратом эндометромаг оказалось более эффек-тивным. Несмотря на то, что клиническое выздоровление всех животных констатировали в обеих группах – подопытной и контрольной, однако ко-эффициент оплодотворения коров из числа подопытной группы составил 1,52, а из числа контрольной группы – 1,9, что указывает на большее коли-чество затраченных доз спермы. Различие в периоде от клинического вы-здоровления до стельности между животными подопытной и контрольной групп составило 59 дней, что позволяет более интенсивно использовать продуктивный и репродуктивный генетический потенциал коров, лечив-шихся с применением озонированной эмульсии.

Таким образом, применение озонированной эмульсии при терапии ко-ров, больных острым послеродовым гнойно-катаральным эндометритом, по-зволяет сократить срок болезни и период бесплодия, что обеспечивает опти-мизацию воспроизводительной способности и гарантирует качество животно-водческой продукции.

Литература. 1. Асоев П., Баженова Н.В. //Ветеринария, 2009, № 6. 2. Конопельцев И.Г.: автореф. дисс … докт. вет. наук.- Воронеж, 2004. 3. Шабунин С.В. с соавт.//Ветеринария, 2011, № 2.

THE NEW METHOD THERAPY OF SHARP ENDOMETRITIS AT COWS

Konopeltsev I.G., Muravina E.C.

Vyatka State Agricultural Academy, Kirov, Russia

The ozoned emulsion is not toxic and it hasn’t a intensification effect. It isn’t possesses embryotoxic action. The emulsion has also antimicrobial effect. This method allows to shorten period of the treatment sharp endometritis at cows.

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2021