ИНДУЦИРОВАННАЯ ЛЮМИНОЛЗАВИСИМАЯ ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНЦИЯ КАК МЕТОД СТАНДАРТИЗАЦИИ ТКАНЕВЫХ ПРЕПАРАТОВ

Востроилова Г.А.

Научно-производственное предприятие «Агрофарм», Воронеж, Россия

В настоящее время  в ветеринарной фармакологии все большее распространение находят лекарственные средства биологической при-роды. В первую очередь это тканевые препараты (ПДС, ПДЭ, ФИБС, АСД, сирепар и др.), препараты растительного происхожде-ния (эссенциале, лигфол, силибинин), различного рода экстракты ле-карственных трав  («Флор-эссенс», «Оксофил» и др).

Определенную сложность представляет стандартизация ткане-вых лекарственных средств вследствие многокомпонентности состава и невозможности идентифицировать ДВ этих препаратов. В то же время определенные трудности для фармацевтических предприятий представляет  достижение идентичности лекарственного сырья при-родного и биологического происхождения сходного по химическим свойствам и составу, что обуславливает необходимость доступных и высокочувствительных методов их стандартизации. Поэтому разра-ботка и апробация интегрального метода оценки тканевых препара-тов является актуальной задачей современной фармацевтики.

Предложен метод люминолзависимой индуцированной хеми-люминесценции для контроля тканевых препаратов. Для апробации были подобраны различные препараты из тканей плаценты (ПДЭ, Аминотон, Липотон, Криотон). Для определения чувствительности метода были взяты две концентрации тканевых препаратов и под каждую концентрацию была подобрана реактогенная среда. Далее была определена их химическая активность на модели реакции Фен-тона (Fe2+/H2O2).

В реакционную среду 1 содержащую 1 мл 0,3 М фосфатного   буфера рН=8,2 с добавлением 3 нг люминола и 0,4 мл 1 мМ р-ра се-миводного сульфата железа вносили препараты плаценты растворен-ными в смеси 1,2-пропиленгликоль/полиэтиленоксид 400 в количе-стве соответствующим 100 мкл нативного препарата. Реакцию Фен-тона инициировали 0,1 мл 10 мМ перекиси водорода.

В реакционную среду 2 содержащую 1 мл 0,3 М фосфатного   буфера рН=8,2 с добавлением 350 нг люминола и 0,4 мл 1 мМ р-ра семиводного сульфата железа вносили препараты плаценты раство-ренными в смеси 1,2-пропиленгликоль/полиэтиленоксид 400 в коли-честве соответствующим 1 мкл нативного  препарата.  Реакцию  Фен-тона  инициировали  0,2 мл 0,5  мМ перекиси водорода. Регистрацию сверхмалого свечения проводили на IBM PC с помощью пакета при-кладных программ разработанных Нижегородской государственной медицинской академией (г. Нижний Новгород) на хемилюминометре БХЛ-06 М в нашей модификации с разработанной инъекционной си-стемой ввода инициатора. В качестве сравнения использовали ди-стиллированную воду (холостая проба) и смесь полиэтиленоксида-400 и 1,2-пропиленгликоля в объемах идентичных опытным пробам. Данные представлены в таблице.

Данными опыта установлено, что путем подбора оптимальной реакционной среды чувствительность метода может составлять по-рядка 0,5-1,0 мкг ДВ (концентрата) тканевых препаратов (табл.1).

Таблица

Влияние тканевых препаратов на интенсивность реакции Фентона

Препарат, количество
(эквивалентно объему нативного препарата)

Светосумма вспышки, S

Интенсивность сверхмалого свечения в точке наибольшей интенсивности реакции, Imax

Кинетика снижения интенсивности реакции, tg2

Реакционная среда 1

Аминотон, 100 мкл

50,8±1,97*

14,4

5,8

Липотон, 100 мкл

29,2±0,51*

11,1

5,2

Концентрат липотона, 1 мг (со-ответствует 1,3 мл нативного препарата)

0,0±0,00*

0,0

0,0

Криотон, 100 мкл

67,2±1,79*

25,0

10,1

ПДЭ, 100 мкл

112,2±0,03*

56,4

32,6

Холостая проба (дистиллированная вода)

86,4±1,52

46,9

29,0

Смесь ПЭО/ПГ

84,7±0,69

31,4

12,2

Реакционная среда 2

Аминотон, 1 мкл

25,2±1,51*

7,7

2,6

Липотон, 1 мкл

14,6±0,64*

5,4

2,1

Криотон, 1 мкл

31,1±0,39*

12,2

5,9

ПДЭ, 1 мкл

68,7±1,80*

28,4

12,0

Холостая проба (дистиллированная вода)

66,0±2,21

27,6

11,7

Смесь ПЭО/ПГ

62,5±1,97

23,3

9,4

* - Р<0,05 по отношению к холостой пробе

Корреляция данных между двумя реакционными средами со-ставляет 1,0; что позволяет использовать обе прописи для стандарти-зации тканевых средств.

Исследуемые тканевые препараты проявляют различные свой-ства в условиях реакции  Fe2+/H2O2. Так, ПДЭ оказывает ярко выра-женные проокислительные свойства стимулируя реакцию инициации свободных радикалов, в то время как аминотон, липотон и криотон проявляют в различной степени антиоксидантные свойства.

Далее изучена вариабельность различных серий тканевого пре-парата аминотон и влияние его длительного хранения на изменение люминолзависимой индуцированной хемилюминесценции. В этом опыте реактогенная смесь не содержала смеси полимерных раствори-телей ПЭО/ПГ, реакция проходила в термостатируемом режиме 370С. Данные приведены в таблице 2.

Таблица 2

Влияние аминотона различных серий выпуска на интенсивность хемилюминесценции  в нативном виде и при длительном хранении  

Препарат, серия

Антиокислительная активность, ΔS

Интенсивность сверхмалого свечения в точке наибольшей интенсивности реакции, Imax

Кинетика снижения интенсивности реакции,

tg2*-1

Аминотон

     

серия 1

29,5±0,86

13,7

15,7

серия 2

29,9±1,24

15,4

15,9

серия 3

28,8±1,09

12,6

11,7

Хранение 15 мес.

-0,43±4,26

20,2

11,7

Холостая

0,00±1,50

41,8

38,6

Как видно из таблицы 2  различные серии аминотона обладают практически идентичными антиокислительными свойствами, вариа-бельность которых не превышает 5%, в то время как длительное хра-нение негативно отразилось на свойствах препарата, что проявилось  в смене антиокислительных свойств на проокидантные.

Таким образом, люминолзависимая индуцированная биохемилю-минесценция является чувствительным интегральным методом оценки химических свойств тканевых препаратов и может быть использован для их стандартизации.

INDUCTION LUMINOLDEPENDENT CHEMISTRYLUMINESTENTIONS AS A METHOD  STANDARTIC DIFFERENTS PREPARATIONS

Vostroilova G.

research and production company «Agropharm», Voronezh, Russia

The method for the control of  preparations is offered. Is established, that биохемилюминесценция is a sensitive integrated method of an estima-tion of chemical properties of fabric preparations and can be used for them standartisations.

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2021