МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ БУТИЛГИДРОКСИАНИЗОЛА, БУТИЛГИДРОКСИТОЛУОЛА И ЭТОКСИКВИНА В АНТИОКСИДАНТНЫХ КОРМОВЫХ ДОБАВКАХ

Комаров А.А., Благодатских С.В.

Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов (ВГНКИ), Москва, Рос-сия

Задача увеличения срока хранения кормов для животных чрез-вычайно актуальна. Для этого необходима стабилизация состава, что достигается применением специальных добавок - антиоксидантов, препятствующих окислительной деструкции. В качестве стабилиза-торов в кормах для животных наиболее часто используются такие ан-тиоксиданты, как бутилгидроксианизол (3-трет-бутил-4-гидроксиани-зол) (БГА), бутилгидрокситолуол (2,6-ди-трет-бутил-4-метилфенол, ионол) (БГТ) и этоксиквин (2,2,4-триметил-6-этокси-1,2-дигидрохино-лин, сантохин). В последние годы на рынке появи-лось много различных кормовых добавок, которые содержат данные антиоксиданты. Эти добавки используются  при  производстве кор-мов,  содержание антиоксидантов в них колеблется  от единиц до де-сятков процентов, причем нередко используются смеси данных анти-оксидантов. Для контроля количественного содержания антиокси-дантов   в данном виде продукции нет официальных методов опреде-ления. Фирмы-производители предлагают различные методы для конкретных образцов с использованием ГЖХ, ВЭЖХ, различных спектрофотометрических методов. Из официальных методов имеется ГОСТ на определение БГТ и БГА в животных жирах [1], где БГТ определяют методом отгонки с водяным паром с последующим опре-делением в дистилляте с хлорным железом и α, α'-дипиридилом при λ=515 нм, БГА определяют экстракцией 72 %-ным спиртом из рас-твора жира в петролейном эфире с последующим определением в экстракте с помощью  цветной реакции с 2,6-дихлорхинонхлоримидом при λ=615 нм. Разработан также метод ко-личественного определения БГА и БГТ в образцах подсолнечного масла с использованием спектрофотометрии [2].

Целью данного исследования явилась разработка метода опре-деления  БГА, БГТ и этоксиквина  в сухих и жидких ( не содержащих воду) кормовых добавках  при раздельном и совместном присутствии данных антиоксидантов. Содержание антиоксидантов в кормовой до-бавке  может колебаться от 0,5  до 100% .

Метод основан на экстракционном выделении антиоксидантов из пробы  ацетонитрилом и последующем количественном  анализе с использованием капиллярной ГЖХ с пламенно-ионизационным де-тектором.

Материал и методы. Реагенты. Стандартные образцы БГТ, БГА и этоксиквина были получены от фирм-производителей. Содер-жание БГА в образце 99,9%, БГТ 99,9%, содержание этоксиквина в стандартном образце 95,2%. Ацетонитрил для жидкостной хромато-графии марки ОСЧ. Исходные калибровочные растворы антиокси-дантов готовили растворением 100 мг стандарта бутилгидроксиани-зола, бутилгидрокситолуола  и этоксиквина в 100 мл ацетонитрила.  Данные растворы имеют концентрацию 1мг/мл.

Аппаратура. Для работы использовали газовый хроматограф  модели 3800 фирмы “Вариан” (США) с пламенно-ионизационным детектором. Колонка  RTX-5 фирмы “Restek”, длина колонки 30 м, внутренний диаметр 0,32 мм. Генератор водорода марки ГВЧ  фирмы “Химэлектроника” (Россия, Москва), масляный компрессор марки  300-4B фирмы “JUN AIR”(Дания).

Подготовка проб для анализа. Навеску образца берут в зависи-мости от содержания в ней антиоксиданта. Масса его в навеске должна быть примерно 100 мг, поэтому навеска составляет   от 100 мг до 10 г. Взвешивание проводят в мерной колбе на 100 мл. В колбу добавляют раствор ацетонитрила да метки. При анализе сухих  об-разцов требуется обработка образцов на ультразвуковой бане  в тече-ние 15 минут, при анализе жидких образцов можно ограничиться энергичным встряхиванием образца в течение 5 минут. Затем прово-дится центрифугирование при 3000 об/мин в течение 15 минут, 5 мл надосадочной жидкости переносят в мерную колбу на 25 мл и дово-дят до метки ацетонитрилом, после перемешивания образец объемом 1 мкл вводится в хроматограф.

Условия хроматографического анализа. В качестве газа-носителя используется поверочный нулевой газ “Азот” марки Б. Для оптимизации разделения антиоксидантов  были подобраны следую-щие параметры работы прибора:

Программа для инжектора: 1000 С в течение 0,5 мин., затем нагрев до 2500 С со скоростью 2000 /мин. Выдерживание при этой температуре 4 мин.

Программа для колонки: 1000С в течение 2 мин., затем подъём до температуры до  2400 С  со скоростью 150 /мин., 5 мин. поддержи-вается  температура 2400 С. Общее время анализа 16.33 мин.  Ско-рость газа через колонку 1,5 мл/мин.

Расщепление потоков: в течение первых 3 мин. без расщепле-ния, далее расщепление 1:40.

Детектор: температура детектора  3000С, скорость азота через детектор 30 мл/мин, скорость водорода 30 мл/мин, скорость воздуха 300 мл/мин.

В этих условиях время выхода БГА 10,41 мин, БГТ 10,93 мин, этоксиквина  12,75 мин.

Расчет проводится по площадям по методу внешнего стандарта, можно также  в качестве стандарта использовать любой из антиокси-дантов, если его нет в образце.  Калибровочные кривые для антиокси-дантов строят в области 0,1-0,3 мкг.

Результаты исследования. Для всех антиоксидантов степень извлечения близка к количественной (более 95%). Графики в области 0,1-0,3 мкг линейны, коэффициент корреляции для БГА составляет 0,998, для ВГТ - 0,999, для этоксиквина- 0,986.

 В таблице 1 приведены значения содержания антиоксидантов в пробах, найденные  данным методом.

 Таблица 1

Результаты определения бутилгидроксианизола  в пробах

Содержание БГТ (мг/г)*

Коэффициент вариации

%

Добавлено

Найдено**

5

4,92±0,53

10,8

10

9,86±0,93

9,4

50

50,10±3,5

6.9

200

197,3±10,1

5,1

500

488,2±25,3

5,2

950

980,5±30,4

3,1

* n=5, ** ± стандартное отклонение

В таблице 2 приведены данные для бутилгидрокситолуола, в таблице 3 – для этоксиквина.

Таблица 2

Результаты определения бутилгидрокситолуола  в пробах

Содержание БГТ (мг/г)*

Коэффициент вариации

%

Добавлено

Найдено

5

4,87±0,43

8.8

10

10,14±0,83

8,1

50

49,10±3,5

7,1

200

200,3±10,2

5,1

500

490,2±22,3

4.5

950

920,4±35,3

3,8

* n=6, ** ± стандартное отклонение

Таблица 3

Результаты определения этоксиквина  в пробах

Содержание БГТ (мг/г)*

Коэффициент вариации

%

Добавлено

Найдено

5

5,.27±0,62

11,8

10

9,84±0,94

9,6

50

50,10±3,8

7,6

200

196,3±12,2

6,2

500

500,2±30,1

6,0

950

960,4±45,6

4,7

 * n=5, ** ± стандартное отклонение

Выводы. Результаты исследования показывают, что данный метод может быть применен к анализу бутилгидроксианизола, бутилгидрокси-толуола и этоксиквина в кормовых добавках, содержащих от 0,5 до 100% данных антиоксидантов как при раздельном, так и совместном их присутствии в образцах.

Литература. 1. ГОСТ 11254-65. Жиры животные топленые. Ме-тоды определения содержания антиокислителей.- 1980, М., Изд-во стан-дартов. 2. Espinosamansilla A. et al. //Applied Spectroscopy.- 1996.-v.50,№4.- P.449-453.

DETERMINATION OF BUTYLHYDOXYANISOL, BUTYLHYDOXYTOLUENE AND ETOXYQUIN IN ANTIOXYDATIVE MIXTURES

Komarov A.A., Blagodatskich S.V.

The Russian State Centre for Quality and Standardization of veterinary Drugs and Feed (VGNKI), Moscow, Russia

A gas chromatography prosedure with capillary column and flame -ionization detector has been developed for determination of butylhidroxyan-isol, butylhidroxytoluene and ethoxyquine in antioxidative mixtures. Ace-tonitril was used as extragent. The described method is specific, precize and accurate enough for determination of butylhidroxyanisol, butylhidroxytolu-ene and ethoxyquine in antioxidative mixtures.

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2021