КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА ВЕТЕРИНАРНОЙ ДЕЗИНФЕКЦИИ ОБЪЕКТОВ ЖИВОТНОВОДСТВА

Контроль качества проведенной дезинфекции проводят в три этапа: контроль подготовки объекта к дезинфекции, контроль за соблюдением установленных режимов дезинфекции, бактериологический контроль качества дезинфекции.

1. Контроль подготовки объектов к дезинфекции (проверяют степень очистки поверхностей, их увлажненность, защиту электрооборудования и приборов, герметизацию помещений) осуществляет ветеринарный специалист, ответственный за ее проведение.

2. Контроль за соблюдением установленных режимов дезинфекции (выбор препарата и метода дезинфекции, концентрация, температура раствора, равномерность увлажнения поверхностей дезинфицирующим раствором, соблюдение параметров производительности используемых машин и аппаратов, качество распыления раствора) проводит ответственный ветеринарный специалист.

3. Бактериологический контроль качества дезинфекции осуществляют специалисты ветеринарных лабораторий периодически или в сроки, установленные с учетом эпизоотической обстановки, технологии производства, целей дезинфекции и других конкретных особенностей.

При бактериологическом контроле качества дезинфекции определяют наличие на поверхностях обеззараживаемых объектов жизнеспособных клеток санитарно-показательных микроорганизмов - бактерий группы кишечной палочки (Escherichia, Citrobacter, Enterobacter), стафилококков (aureus, epidermatis,Saprophiticus), микобактерий или спорообразующих аэробов рода Bacillus.

По наличию или отсутствию бактерий группы кишечной палочки определяют качество профилактической и вынужденной (текущей и заключительной) дезинфекции при бруцеллезе, колибактериозе, лептоспирозе, листериозе, болезни Ауески, лейкозе, пастереллезе, сальмонеллезах, трихомонозе, кампилобактериозе, трипанозомозе, токсоплазмозе, инфекционном ринотрахеите, парагриппе и вирусной диарее крупного рогатого скота, инфекционной агалактии и контагиозной плевропневмонииовец и коз, отечной болезни, инфекционном атрофическом рините, дизентерии, трансмиссионном гастроэнтерите, балантидиозе, гемофилезной плевропневмонии и роже свиней, (кроме туберкулеза, споровых и экзотических инфекций).

По наличию или отсутствию стафилококков контролируют качество текущей дезинфекции при туберкулезе, болезнях, вызываемых спорообразующими микроорганизмами, и экзотических инфекциях; заключительной дезинфекции при туберкулезе, аденовирусных инфекциях, ящуре, оспе, туляремии, диплококкозе, стафилококкозе, стрептококкозе, некробактериозе, катаральной лихорадке, бешенстве, чуме всех видов животных, злокачественной катаральной горячке, ринопневмонии и паратуберкулезном энтерите крупного, рогатого скота, везикулярной болезни свиней, хламидиозах, риккетсиозах, энтеровирусных инфекциях, гриппе сельскохозяйственных животных, трихофитии, микроспории, других микозах животных, актиномикозе крупного рогатого скота, а также болезнях, вызываемых неклассифицированными вирусами

Качество заключительной дезинфекции при микозах контролируют также по выделению соответствующих возбудителей.

Качество заключительной дезинфекции при туберкулезе контролируют по выделению стафилококков и микобактерий, при сибирской язве, эмфизематозном карбункуле, брадзоте, злокачественном отеке, других споровых инфекциях и экзотических инфекциях, по наличию или отсутствию спорообразующих микроорганизмов рода Bacillus.

Отбор проб для исследования

Отбирают пробы для бактериологического контроля и доставляют их в лабораторию лица, ненесущие ответственности за качество дезинфекции и не находящиеся в подчинении работников, ответственных за ее проведение. Отбор проб проводят по истечении срока экспозиции, до начала проветривания помещений.

Пробы (смывы, отпечатки, соскобы) для исследования берут с 10-20 различных участков поверхности животноводческого помещения (полов, стойл, проходов, стен, перегородок, столбов, кормушек, поилок и т. д.). При наличии на объекте участков поверхности с механическими загрязнениями пробы материала для исследования берут методом соскобов.

Для контроля качества дезинфекции при туберкулезе с каждого вида поверхности берут по пять смывов, которые объединяют в одну пробу. Из каждого помещения отбирают не менее 10 объединенных проб, в том числе по три пробы с пола и кормушек.

При заключительной дезинфекции одновременно берут пробы с территории фермы в разных направлениях от углов здания и от центра каждой стены на расстоянии 5, 10 и 15 метров (с учетом рельефа местности). Всего с прилегающей территории отбирают не менее 24 проб. Поверхностный слой грунта разрыхляют стерильным скальпелем или ножом на глубину 3-5 см и отбирают в стерильную посуду 10-20 г исследуемого материала. Если прилегающая территория имеет твердое покрытие, пробы отбирают методом смывов.

После проведения дезинфекции и последующей экспозиции с участков, подвергаемых контролю, отбирают пробы стерильными ватно-марлевыми тампонами, смоченными в стерильном нейтрализующем растворе или воде. Участки площадью 10x10 см тщательно протирают до полного снятия с поверхности всех имеющихся на ней загрязнений, после чего тампоны помещают в пробирку с нейтрализующей жидкостью. Плотные загрязнения (корочки) снимают с помощью стерильного скальпеля и переносят в эту же пробирку.

Для нейтрализации хлорсодержащих дезинфицирующих средств служит раствор тиосульфата натрия (гипосульфита); щелочных растворов — раствор уксусной кислоты; формалина — раствор аммиака (нашатырный спирт); кислот и ее производных, пероксида водорода — раствор бикарбоната натрия. При использовании для дезинфекции щелочного раствора формальдегида участки сначала увлажняют раствором аммиака, затем дополнительно раствором уксусной кислоты. При дезинфекции дезонолом, лизолом, феносмолином, фенолятами натрия и другими средствами, для которых нет нейтрализаторов, применяют стерильную водопроводную воду.

Отбор проб-отпечатков

Предметные стекла с нанесенной средой извлекают корнцангом из ванн или пробирок, не касаясь застывшей питательной среды, и накладывают на исследуемый объект таким образом, чтобы питательная среда соприкасалась с его поверхностью. Через 2 мин пробы-отпечатки отделяют от контролируемого объекта и помещают в ванны или пробирки, в которых их транспортировали. При взятии проб с труднодоступных или вертикальных поверхностей время контакта слоя питательной среды с объектом сокращают до 30оС. Смывы должны быть доставлены в лабораторию в течение 3-6 ч с момента взятия, отпечатка не позднее 2ч.

Контроль качества дезинфекции помещений методом бактериологического исследования смывов

Пробы, каждую в отдельности, отмывают в той же пробирке путем нескольких погружений и отжатий тампона. Последний удаляют, а жидкость центрифугируют 20-30 минут при частоте вращения 3000-3500 оборотов в минуту. Затем надосадочную жидкость сливают, в пробирку наливают такое же количество стерильной воды, содержимое смешивают и снова центрифугируют. Надосадочную жидкость сливают, а из центрифугата делают посевы. При наличии в смыве грубых механических примесей их растирают в пробирке стеклянной палочкой, после чего смыв переносят в центрифужную пробирку.

Для индикации кишечной палочки 0,5 мл центрифугата высеивают в пробирки с модифицированной средой Хейфеца или КОДА. Посевы выдерживают 12-18 часов в термостате при 37-38°С. Изменение сиренево-красного цвета сред (в зеленый или салатовый) с помутнением их и образованием газа свидетельствует о наличии роста кишечной палочки. Другие изменения цвета (желтоватый, розовый, сероватый), наблюдаемые приросте микроорганизмов других видов, не учитывают.В сомнительных случаях делают подтверждающий посев с жидких сред на агар Эндо. Посевы инкубируют 12-16 ч при 37-38°С.

Для индикации стафилококков (0,5 мл центрифугата высеивают в 5 мл мясопептонного бульона с 6,5% хлорида натрия. Через 22-24 часа инкубирования посевов при 37-38°С делают пересевы бактериологической петлей на 8,5%-ный солевой мясопептонный агар. Посевы выдерживают в термостате 22-24 часа при температуре 37-38°С. Из выросших культур для подтверждения роста стафилококков готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют.

Для индикации спорообразующих аэробов смывы обрабатывают, как указано выше, но перед центрифугированием их прогревают 30 минут на водяной бане при 65°С, затем центрифугируют. Из центрифугата каждой пробы делают посевы в одну пробирку с мясо-пептонным бульоном (МПБ) и на две чашки с мясопептонным агаром (МПА). Для контроля качества дезинфекции при сибирской язве МПА может быть заменен дифференциально-диагностической средой. Посевы инкубируют 24-28 ч в термостате при 37оС.

При наличии роста на МПА подсчитывают колонии и изучают морфологию их при малом увеличении микроскопа. В случае возникновения подозрения на выделение возбудителя сибирской язвы проводят идентификацию культуры.

При наличии роста на дифференциально-диагностической среде в крышку чашки Петри вносят 1-2 мл культуры при 20±2°С в течение 1 мин, после чего визуально или под малым увеличением микроскопа учитывают тест. Под действием паров аммиака происходит порозовение колоний микроорганизмов, обладающих фосфатазной активностью. Вас. anthracis фосфатазной активностью не обладают, и его колонии остаются бесцветными.

При отсутствии роста или характерных колоний на плотных средах и наличии роста в МПБ делают дробные посевы из МПБ на плотную питательную среду. При просмотре посевов учитывают общее число проб, в которых обнаружен рост санитарно-показательных микроорганизмов, а при споровой инфекции — и колонии непатогенных спорообразующих аэробов рода Bacillus.

Контроль качества дезинфекции методом отпечатков на тонкий слой плотной питательной среды

Метод отпечатков наиболее приемлем в условиях промышленного ведения животноводства на комплексах, где имеются лаборатории.

Ванны и пробирки с пробами-отпечатками, доставленные в лабораторию, помещают на 16-18 ч в термостат при 37°С. После инкубирования пробы просматривают невооруженным глазом на наличие роста. При отсутствии макроколоний и изменении среды пробы дальнейшим исследованиям не подвергают. В сомнительных случаях, когда отсутствует рост макроколоний, но изменены цвет или прозрачность среды, пробы-отпечатки высушивают на воздухе до полного подсыхания среды, фиксируют над пламенем, окрашивают по Муромцеву и микроскопируют с целью обнаружения микроколоний. Учитывают общее число отпечатков, в которых обнаружен рост микроорганизмов.

Исследование с целью выделения микобактерий

Контроль качества заключительной дезинфекции при туберкулезе проводят параллельно двумя методами по выделению стафилококка и микобактерий.

Смывы обрабатывают, как указано выше. Из центрифугата каждой объединенной пробы делают высев на среды для выделения стафилококков, готовят по шесть мазков на узких (1,2x7,5 см) предметных стеклах. Мазки высушивают при комнатной температуре или в термостате 2-3 ч, складывают их по два тыльной стороной и погружают в 8-12%-ный раствор серной кислоты на 15 минут. После этого стекла-мазки берут пинцетом и погружают на 5-10 секунд в стерильную дистиллированную воду, а затем переносят в пробирки со средой Сотона и помещают в термостат при 37-38°С.

Пробы почвы с прилегающей территории и соскобы с поверхности помещений (каждую в отдельности) помещают в колбу, заливают двух-трехкратным количеством дистиллированной воды, взбалтывают и фильтруют через двойной слой марли в узкогорлую колбу вместимостью 200-250 мл. К фильтрату добавляют 2-3 мл ксилола или авиационного бензина, встряхивают 1520 минут и доливают дистиллированную воду до горлышка. Содержимое отстаивают, 30 мин с целью получения флотата, из которого готовят мазки на узких предметных стеклах.

При наличии роста стафилококков хотя бы в одной исследованной пробе качество дезинфекции признают неудовлетворительным и дальнейшее исследование по выделению микобактерий не проводят. Стекла с мазками извлекают из пробирок на 6-й, 8-й и 12-й день инкубирования, высушивают, фиксируют над пламенем горелки, окрашивают по Циль-Нильсену и микроскопируют для обнаружения микроколоний.

Оценка качества дезинфекции

Качество профилактической дезинфекции помещений для получения и содержания молодняка скота и текущей дезинфекции изолированных секций (боксов, скотных дворов) с автономной системой жизнеобеспечения животных признают удовлетворительным при отсутствии роста санитарно-показательных микроорганизмов в 90% исследованных проб.

При профилактической дезинфекции помещений для содержания взрослого поголовья и текущей дезинфекции частично освобожденных от животных или неизолированных помещений допускается выделение санитарно-показательных микроорганизмов из 20% исследованных проб.

Качество заключительной дезинфекции при ее контроле по выделению бактерий группы кишечной палочки, стафилококков, грибов и микобактерий признают удовлетворительным при отсутствии выделения названных культур во всех исследованных пробах.

При споровых инфекциях качество дезинфекции признают удовлетворительным при отсутствии роста Вас. anthracis. При прямом посеве на МПА допускают рост единичных (не более трех а смыве) колоний непатогённых спорообразующих аэробов рода Bacillus.

Контроль качества профилактической аэрозольной дезинфекции, проводимой формалином

Метод предназначен для быстрого (непосредственно после окончания экспозиции дезинфекции) контроля качества аэрозольной дезинфекции животноводческих помещений, проводимой формалином. Метод основан на окрашивании индикаторной среды под воздействием газовой и капельной фаз аэрозоля фомальдегида. В качестве индикатора используют среду Эндо, которая под воздействием формальдегида в процессе аэрозольной дезинфекции приобретает резко очерченное красное окрашивание.

Перед проведением дезинфекции индикаторные пробирки размещают на полу, стенах и потолке помещения и на находящемся в нем оборудовании. Особо важно прикрепить индикаторные пробирки с помощью пластилина, липкой ленты или других средств в труднодоступных местах (внутри оборудования, у щелей и т.д.). На одно помещение требуется в среднем 10-15 пробирок.

Качество дезинфекции оценивают непосредственно после окончания экспозиции (12 или 24 ч). Линейкой с миллиметровой шкалой измеряют длину окрашенного столбика индикаторной среды, начиная с обреза пробирки. Дезинфекцию считают удовлетворительной, если глубина окрашивания среды после экспозиции 12 ч составляет не менее 18 мм, а после экспозиции 24 часа — 30 мм.

При контроле качества дезинфекции в очагах бактериальных (кроме туберкулеза) и вирусных инфекций в качестве тест-культуры используют музейные штаммы кишечной палочки, в очагах туберкулеза и малоизученных вирусных инфекций — золотистого стафилококка, в очагах споровых инфекций — антракоида.

Приготовление нейтрализующих растворов

Нейтрализующие растворы готовят в концентрации в 10 раз меньше, чем концентрация использованного дезинфицирующего средства. Раствор делают на стерильной воде в стерильной посуде и разливают в пробирки или флаконы с соблюдением правил стерильности (растворы уксусной кислоты и бикарбоната натрия можно стерилизовать автоклавированием). Раствор аммиака стерилизации не подлежит. Готовые пробирки (флаконы) можно хранить в течение пяти дней при комнатной температуре.

Подготовка предметных стекол

Для исследования используют предметные стекла (размером 2,5x7,5 см) или стекла, разрезанные вдоль на две половинки (1,2x7,5 см). Стекла предварительно кипятят 10-15 мин в 2-5%-ном растворе моющего порошка ("Лотос", "Новость" и т. и.). Затем поверхность предметных стекол с двух сторон натирают с помощью зубной щетки или ерша этим же порошком, слегка увлажненным водой, после чего тщательно промывают в проточной воде, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают на воздухе. Подготовленные стекла хранят в банке с притертой крышкой в сухом виде.

Подготовка предметных стекол со средой

В стерильном боксе на предметные стекла наносят тонкий слой расплавленной питательной среды: для выделения группы бактерии кишечной палочки используют агар Эндо, стафилококков - 8,5%-ный солевой мясопептонный агар (рН 7,2-7,4). Количество нанесенной среды должно соответствовать 0,15 мл (четыре капли) для узкого предметного стекла и 0,33 мл (восемь капель) - для широкого. Перед нанесением на стекло, среду, находящуюся в пробирках, ставят на водяную баню и расплавляют. Затем в нее погружают стерильную пастеровскую пипетку. Температуру воды в бане поддерживают в пределах 80-90оС.

Прогретые над пламенем горелки предметные стекла (берут корнцангом) раскладывают на ровной, строго горизонтальной поверхности стола. На них пипеткой наносят указанное количество питательной среды, отступив на 2-2,5 см от поперечного края стекла. Затем, расположив горизонтально пастеровскую пипетку, питательную среду быстро распределяют по средней трети поверхности стекла и подсушивают при комнатной температуре до появления вокруг питательной среды высушенной полосы шириной 0,5-1 мм. Широкие стекла со средой помещают в пластмассовые ванны, узкие - в пробирки. Ванны и пробирки предварительно увлажняют путем внесения на дно 1 мл и 0,1 мл стерильной водопроводной воды. Подготовленные предметные стекла с солевым агаром хранят при температуре 4°С до 10 суток, со средой Эндо - 2-3 суток (если нет видимого изменения цвета среды).

Подготовка стекол для микрокультивирования микобактерий

Предметные стекла разрезают вдоль на узкие полоски размером 1,2x7,5 см, моют и помещают на 2 часа в хромпик (40 г дихромата калия высыпают в фарфоровую кружку или эксикатор и растворяют в небольшом количестве воды, затем осторожно добавляют концентрированную серную кислоту до общего объема 1 л). После хромпика стекла вновь моют дистиллированной водой, протирают чистой льняной тканью, стерилизуют сухим жаром (160 гр.) 2 ч и хранят в закрытых сосудах (эксикаторах).

Приготовление диагностических сред

Модифицированная среда Хейфеца. К 1 л дистиллированной воды добавляют 10 г пептона, 5 г хлорида натрия и 4 г лактозы. Смесь доводят до кипения, затем фильтруют и после остывания определяют рН, который должен быть 7,4-7,8. Затем к среде добавляют в качестве индикатора 1 мл 5%-ного спиртового раствора розоловой кислоты и 2,3 мл 0,1%-ного водного раствора метиленовой сини. Среду разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют в автоклаве при 0,05 МПа 15 мин. Исходный цвет среды— красновато-сиреневый.

Питательная среда КОДА сухая. Состав и способ приготовления приведены в этикетке на упаковке среды.

Солевой мясопептонный бульон. К обычному МПБ с рН 7,2-7,4 добавляют 6% натрия хлорида, перемешивают до полного растворения соли, разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют при 0,1 МПа 20-30 минут.

Солевой мясопептонный агар. К расплавленному МПА добавляют 8% хлорида натрия, перемешивают до полного растворения соли, разливают в колбы и стерилизуют при 0,1 МПа 20-30 мин. Перед использованием солевой агар разливают в стерильные бактериологические чашки по 10-15 мл. После застывания среду подсушивают в термостате 1 ч.

Дифференциально - диагностическая среда для индикации Вас. Anthracis. При приготовление дифференциально - диагностической среды. 100 мл питательного агара (в колбах) расплавляют на кипящей водяной бане и охлаждают до 45-50°С. Затем в агар добавляют 0,5 мл полимиксина М сульфата, столько же невиграмона, гризеофульвина (добавляют в среду при подозрении на загрязнение материала грибами.), такое же количество моющего средства и 0,1 мл фенолфталеинфосфата натрия. После перемешивания среду разливают в чашки Петри (крышки открыты) и подсушивают 1,5-2 ч. Дифференциально-диагностическую среду после разлива можно хранить в холодильнике в течение 1 -2 суток.

Полимиксин М сульфат во флаконе растворяют в стерильной дистиллированной воде, а затем последовательными разведениями стерильным 0,9%-ным раствором хлорида натрия доводят до концентрации 10000 ед/мл.

Невиграмон переносят в стеклянный флакон или пробирку и растворяют в 25%-ном водном растворе аммиака при тщательном перемешивании стеклянной палочкой. Затем последовательно разводят стерильным 0,9%-ным раствором хлорида натрия до концентрации 100 мкг/мл.

Гризеофульвин (в таблетках) тщательно растирают в ступке, затем растворяют в стерильной дистиллированной воде до содержания 100 мкг препарата в 1 мл.

Фенолфталеинфосфат натрия (заводской 10%-ный раствор) стерилизуют 30 мин на водяной бане при 56°С.

Среда Сотона для выделения микобактерий. В 940 мл дистиллированной воды растворяют 4 г аспарагина, 2 г лимонной кислоты, 0,5 г дифосфата калия, 0,5 г сернокислой магнезии и 0,05 г аммиачного цитрата железа. Затем добавляют 60 мл нейтрального глицерина. После полного растворения аспарагина и солей рН среды должен быть 7,4. Среду разливают по 200 мл в колбы вместимостью 250 мл и стерилизуют 30 мин в автоклаве при 0,15 МПа. Перед использованием в колбу со средой Сотона добавляют 30 мл стерильной сыворотки крови крупного рогатого скота и разливают в стерильные пробирки по 7-8 мл.

Приготовление индикаторных пробирок для контроля качества дезинфекции аэрозолями формальдегида. Индикаторные пробирки — это стеклянные трубки диаметром 4-8 мм и длиной 40-50 мм. В качестве таких пробирок могут быть использованы пробирки Уленгута или отрезки пастеровских пипеток, запаянные с одного конца. Пробирки заливают расплавленной индикаторной средой до уровня обреза пробирок, запечатывают парафином и хранят 1 месяц (со дня изготовления) при 0-5°С. Для учета результатов без линейки на индикаторные пробирки при их изготовлении можно нанести две риски на расстоянии 18 и 30 мм от среза пробирки.

Для экспресс-метода контроля качества аэрозольной дезинфекции помещений используют среду Эндо, выпускаемую биологической промышленностью в сухом виде: 2%-ную взвесь сухой среды в дистиллированной воде доводят до кипения и пропускают через ватный фильтр, после чего среду заливают в пробирки при помощи пипеток.

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2021