ДИАГНОСТИКА ТРИХОМОНОЗА

Диагноз на трихомоноз ставят на основании эпизоотологических данных, клинического обследования животных и результатов лабораторного исследования отобранного от больных животных материала.

Для исследования в ветеринарную лабораторию направляют абортированный плод (до 4-месячной стельности) вместе с плодовыми оболочками или часть плаценты, паренхиматозные органы плода, патологические выделения из половых органов. Направляют также соскобы слизистой препуция, секрет придаточных половых желез, сперму быков, патологические выделения из половых органов.

Согласно «Методическим указаниям по лабораторной диагностике трихомоноза крупного рогатого скота» (одобренным Главным управлением ветеринарии Госагропрома СССР 29.12.1985 г.) взятие и пересылка материала осуществляются следующим образом.

Перед взятием диагностического материала у животного половые органы моют теплой водой с мылом и вытирают полотенцем.

Вагинально-цервикальную слизь берут в период половой охоты или через 3—5 дней после введения СЖК в дозе 2000—3000 МЕ. За день до взятия материала рекомендуется вводить животным подкожно 1,5—2,0 мл 0,5%-ного водного раствора прозерина или 1%-ного раствора карбохолина.

Слизь берут полистироловыми пипетками. Для этого к 1 0-граммовому шприцу при помощи резиновой муфты присоединяют полистироловую пипетку, набирают 5 мл физиологического раствора и вводят его под давлением через раскрытое зеркалом влагалище в шейку матки на глубину 3—4 см. Затем, не извлекая пипетки, шприцем насасывают физиологический раствор вместе со слизью, переносят в пробирку, которую закрывают резиновой пробкой.

Вагинальную слизь можно брать ложкой-катетером, которую вводят во влагалище животного без зеркала. При этом положение ложки должно быть боковым, а ее стержня — горизонтальным. Ложкой делают соскоб слизистой оболочки влагалища и через канал стержня переливают в пробирку. Если соскоб густой консистенции, через канал стержня ложки шприцем вводят 5 мл физиологического раствора, выливают в пробирку и закрывают пробкой.

Сперму от быков получают на искусственную вагину, переливают в полиэтиленовые пакетики, как делают на станции искусственного осеменения.

Секрет придаточных половых желез получают путем массажа их через прямую кишку.

Соскобы со слизистой оболочки препуция берут с помощью приборов Казеева, Корчака или Жабоедова. Смонтированный прибор вводят в полость препуция до ее середины. Затем выдвинутым стержнем делают 3—4 возвратно-поступательных движения от свода препуциальной полости до трубки прибора. После этого стержень осторожно извлекают, опускают в пробирку с 3 мл физиологического раствора, промывают, вытаскивают. Пробирку закрывают резиновой пробкой.

Материал для исследования берут не раньше чем через 6 дней после профилактических орошении и через 10 дней после лечения трихомонадоцидными препаратами.

Абортированный плод, плаценту доставляют в лабораторию не позднее 12 ч после аборта. В холодное время года плоды рекомендуется замораживать.

Пробы секрета придаточных половых желез, препуциальной и вагинальной слизи, патологические выделения в пробирках, неразбавленную сперму в полиэтиленовых пакетиках доставляют в лабораторию в термосе со льдом не позднее 6 ч после взятия. Высевы из патологического материала рекомендуется делать на месте и отправлять в лабораторию засеянные питательные среды.

Нативный материал (соскобы, секрет, сперма) исследуют в раздавленной капле.

Соскобы слизи густой консистенции разбавляют физиологическим раствором при температуре 37 °С в соотношении 1 : 2—1 : 5, сперму — 1:10.

При исследовании спермы сперматозоиды обездвиживают, смешивая каплю ее с каплей уксусной кислоты, разбавленной в соотношении 1 : 500—1 : 800.

Жидкий материал берут со дна пробирки, наносят на предметное стекло, накрывают покровным и исследуют в раздавленной капле под малым, а затем под средним увеличением микроскопа в затемненном поле зрения.

При микроскопии надо учитывать, что живые трихомонады имеют ундулирующую мембрану и аксостиль, движения скачкообразно-поступательно-вращательные.

Для получения культуры возбудителя трихомоноза используют среду Петровского или пептонно-агаровую.

Перед посевом в каждую пробирку со средой (Петровского, пептонно-агаровой) добавляют стерильную сыворотку крови лошади или крупного рогатого скота (без признаков гемолиза) — 1 мл, пенициллин и стрептомицин по 1000 ЕД/мл, а в пептонно-агаровую среду—дополнительно и нистатин по 250 ЕД/мл среды. Затем эти пробирки помещают в термостат при 37 °С на 1—1,5 ч.

Каждую пробу от животного высевают в две пробирки со средой. В пробирки со средой вносят по 0,3—0,5 мл материала.

При исследовании абортированного плода делают посевы содержимого грудной, брюшной полостей, сычуга, печени, легких, сердца, измененных участков плаценты, околоплодной жидкости в две пробирки со средой.

Засеянные пробирки инкубируют в термостате при 37 °С в течение 10 дней.

На 3-й день посевы просматривают визуально и при обнаружении помутнения пипеткой берут каплю среды со дна пробирки, помещают на предметное стекло и просматривают в неразбавленном виде под средним увеличением микроскопа в затемненном поле зрения. Затем посевы просматривают на 5-й, 7-й, 9-й дни.

С целью дифференциации трихомонад готовят окрашенные мазки из среды. Делают тонкий мазок, высушивают на воздухе, фиксируют этиловым спиртом в течение 20-25 мин, окрашивают по Романовскому в течение 40-90 мин, промывают дистиллированной водой (рН 7,0-7,2), высушивают и исследуют под иммерсионной системой микроскопа.

При микроскопии необходимо учитывать, что трихомонады имеют округлую, овальную, грушевидную, ланцетовидную, палочковидную формы. Цитоплазма трихомонад окрашивается в голубой цвет различной интенсивности, ядро - в красно-фиолетовый или красный, жгутики - в красный.

От переднего конца трихомонады отходят 4 жгутика, из которых три направлены вперед, а четвертый, окаймляя ундулирующую мембрану, идет назад и оканчивается свободно. Вдоль всего тела расположен аксостиль. Ядро овальной формы, чаще расположено ближе к передней части тела возбудителя.

Трихомонаду необходимо дифференцировать от непатогенных жгутиковых рода Воdо, Oicоmоnаs, у которых имеется 1 или 2 жгутика, а ундулирующая мембрана и аксостиль отсутствуют.

Результаты микроскопического, культурального исследований считают положительными в случае обнаружения в препарате или посевах возбудителя трихомоноза.

Сроки исследования: микроскопического - 1 день; культурального - 10 дней (табл.9).

Таблица 9

Краткая схема дифференциальной диагностики трихомоноза, вибриоза, инфекционного фолликулярного вестибулита, пузырьковой сыпи, бруцеллеза и токсоплазмоза (по Б.А.Тимофееву, 1967)

56

57

Рецепты питательных сред для диагностики трихомоноза Среда Петровского. Свежеохлажденную печень крупного рогатого скота освобождают от жира, канальцев, пленок и пропускают через мясорубку. Затем берут 1 кг фарша, заливают 1 л водопроводной воды, настаивают в течение 1 ч и кипятят 1 ч. После отстаивания фарш удаляют, а жидкость доливают дистиллированной водой до первоначального объема и фильтруют через ватно-марлевый фильтр. В колбу наливают 1 л печеночной воды, добавляют 10 г пептина, 5 г натрия хлористого, 10 г мальтозы и стерилизуют при 112°С (0,5 атм) в течение 30 мин (рН среды до стерилизации — 8,0-8,2, после стерилизации—7,2-7,4). Среду разливают в стерильные пробирки по 8-10 мл, заливают стерильным вазелиновым маслом по 0,30,5 мл. Полученная среда светло-коричневого или светло-соломенного цвета.

Пептонно-агаровая среда. В колбу наливают 900 мл кипяченой дистиллированной воды, добавляют 0,5 г агар-агара и подогревают до полного его растворения. Затем в горячий раствор последовательно вносят 20 г пептона, 10 г глюкозы, 7 г натрия хлористого, постоянно встряхивая колбу. После растворения компонентов среду в горячем виде фильтруют через слой фильтровальной бумаги, в фильтрат добавляют кипяченую дистиллированную воду до первоначального объема и закрывают резиновой пробкой, через которую протыкают инъекционную иглу, а горлышко с пробкой перевязывают двумя слоями марли и ставят в кипящую баню, рН среды - 6,9-7,2. Если рН среды ниже, то добавляют по каплям 1%-ный водный раствор натрия едкого или натрия бикарбоната. Охлажденную среду встряхивают вращательными движениями колбы, разливают в стерильные пробирки по 8-10 мл, наслаивают стерильное вазелиновое масло по 0,5-0,6 мл. Полученная среда - светло-соломенного цвета, содержит небольшую взвесь из частиц агар-агара.

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2021