Реакция иммунной флуоресценции

Реакция иммунофлуоресценции основана на обнаружении иммунного комплекса, образованного путем взаимодействия антигена и антитела, меченного флуоресцентной меткой. Имеются прямой, непрямой, антикомплементарный варианты постановки реакции иммунофлуоресценции.

Непрямой вариант РИФ может быть использован при индикации антигенов возбудителей пневмоэнтеритов в биологическом материале - в инфицированной культуре клеток, мазках-отпечатках из респираторных органов, проб фекалий, соскобов со слизистой тонкого кишечника больных и павших телят.

Для диагностики респираторных инфекций используют мазки-отпечатки из пораженных органов дыхания. Для диагностики желудочно-кишечных заболевавний препараты готовят, используя 10—20%- ную суспензию проб фекалий, которую центрифугируют в течение 5—7 минут при 3000—4000 об/мин. Супернатант удаляют, осадок взмучивают и, используя тщательно обезжиренные стекла, готовят мазок. Если в качестве испытуемого материала используется кишечник, то вначале слизистую подсушивают фильтровальной бумагой, а затем готовят мазки-отпечатки. Приготовленные препараты высушивают на воздухе, фиксируют в охлажденном ацетоне в течение 5—10 мин. В качестве контроля готовят препараты аналогично методике, описанной выше, используя материал от клинически здоровых животных.

На зафиксированные препараты наносят специфическую сыворотку и помещают их во влажную камеру, расположенную в термостате на 30—45 мин. Затем препараты тщательно промывают, используя 0,01М фосфатный буфер рН 7,2—7,4 и после подсушивания наносят антивидовую сыворотку, меченную ФИТЦ, с последующей инкубацией при тех же условиях.

По истечении экспозиции препараты снова тщательно промывают, подсушивают и просматривают в люминесцентном микроскопе (объектив х 90). В качестве контроля используют нормальную сыворотку. Препараты готовят аналогично опытным.

Непрямой вариант РИФ является более чувствительным. При его постановке используется антикомплементарная флуоресцирующая сыворотка. При этом формируется многокомпонентный иммунный комплекс, который значительно легче обнаружить при люминесцентной микроскопии. Препараты последовательно, в указанном выше режиме обрабатываются специфической сывороткой, комплементом, а затем — антикомплементарной флуоресцирующей сывороткой.

Оценка результатов РИФ осуществляется по интенсивности специфической флуоресценции:

++++ - изумрудно-зеленое свечение в цитоплазме инфицированных клеток;

+++ - интенсивное зеленое свечение перинуклеарной зоны цитоплазмы.

Позитивным результатом считается наличие специфической флуоресценции в исследуемом материале на три и четыре плюса.

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2021