КРАТКАЯ ХАРАКТРИСТИКА МЕТОДОВ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ ПРИ ДИАГНОСТИКЕ ПНЕВМОЭНТЕРИТОВ ТЕЛЯТ И ПОРОСЯТ. Выделение вирусов из биологического материала

Для выделения вирусов-возбудителей пневмоэнтеритов телят (инфекционного ринотрахеита, диареи, парагриппа - 3, респираторно -синцитиального вируса, рота-, корона-, парво- и аденовирусов) и поросят(вирусы трансмиссивного гастроэнтерита свиней, ротавирусная и парвовирусная инфекции) применяют первично - трипсинизированные и перевиваемые культуры клеток почек эмбрионов коровы, почек телят, тестикул бычков, легких эмбрионов коров, селезенки эмбрионов, почки поросенка, легких эмбриона свиней и т.д.

Вируссодержащий материал (слизистая оболочка носа, пораженного кишечника, преджелудков, селезенки, легких, трахеи), полученный в виде 10—20%-ной суспензии и приготовленный при помощи центрифугирования при 3,0—5,0 тыс. об./мин., после 4-часовой экспозиции с антибиотиками при 4 С вносят по 0,1 —0,2 мл не менее чем в 4—5 пробирок с культурой клеток.

Флаконы с фекалиями замораживаются при -20 С в течение 18—24 часов, затем оттаивают при 37°С и центрифугируют при 5 тыс.об./мин. в течение 20 мин. Надосадочную жидкость отсасывают в стерильные пробирки, куда вносят по 1000 ЕД пенициллина и стрептомицина, 50 ЕД нистатина и выдерживают в течение 2—4 часов при +2+4°С, дополнительно центрифугируют и после отрицательного бактериологического контроля используют для заражения культуры клеток. Зараженные и контрольные пробирочные культуры ставят на инкубацию при 37 С на 7—10 суток до появления ЦПД. В случае, если в первом пассаже ЦПД будет отсутствовать, необходимо провести 3—4 слепых пассажа. При наличии в исследуемом материале цитопатогенных штаммов вирусов, возбудителей пневмоэнтеритов телят, в клеточном монослое обнаруживается ЦПД, характерное для каждого из вирусов.

Идентификацию выделенных цитопатогенных изолятов вирусов проводят реакциями нейтрализации, иммунодиффузии, связывания комплемента, иммунофлюоресценции, иммуноферментного анализа.

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2021