Аллергическая диагностика. Основным методом прижизненной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота является внутрикожная проба с ППД туберкулином для млекопитающих. В настоящее время туберкулин получают из культурального фильтрата микобактерий, выращенных на синтетической питательной среде, путем осаждения протеиновой фракции (PPD) трихлоруксусной кислотой и сульфатом аммония /А.С. Донченко, 1989; А.Н.Шаров, 1989; А.Х.Найманов, 1993; И.И.Румачик, 1993, 1997; Л.П.Ходун, 1997/.

Туберкулин, при внутрикожном введении, позволяет выявлять инфицированных животных задолго до появления других признаков заболевания. В тоже время эффективность метода во многом зависит от комплекса взаимосвязанных причин: степени распространения инфекции в стаде, характера течения туберкулеза, формы и вида персистирования микобактерий, от механизмов иммунного ответа, различия путей, доз и кратности инфицирования, времени года, физиологического состояния животных, их возраста.

Аллергическое исследование с ППД туберкулином для млекопитающих, проводят в соответствии с наставлением по его применению (см. наставление). Стандартный раствор туберкулина вводят безыгольным инъектором в подготовленный участок в средней трети шеи в объеме 0,2 мл в дозе дозе 10 000 Т.Е. + 2 000 Т. Е, внутрикожно. При правильно выполненной манипуляции в месте инъекции образуется «горошина». Учет реакции проводят через 72±3 ч. При утолщении кожной складки в месте инъекции на 3 мм и более животное считается реагирующим на туберкулин (у быков-производителей - на 2 мм и более при введении туберкулина в подхвостовую складку).

В разных странах для аллергической диагностики туберкулеза крупного рогатого скота применяют дозы от 2000 до 10000 ME туберкулина для млекопитающих. Выбор дозы зависит от эпизоотической ситуации и иммунологической реактивности животных в конкретном регионе. Оптимальной считают такую дозу туберкулина, которая выявляет наибольшее число животных, зараженных возбудителем туберкулеза и минимальное количество здоровых особей или инфицированных атипичными микобактериями.

Существует мнение о том, что при уменьшении дозы туберкулина ниже 10000 МЕ, часть зараженных животных может не реагировать и остается в стаде, что растягивает сроки оздоровления. Однако в стадах с сильным распространением болезни туберкулин в дозе 10000МЕ одномоментно не выявляет всех инфицированных животных, а средняя чувствительность теста составляет 70-77%. Вместе с тем, регулярная туберкулинизация с интервалом в 30-60 дней позволяет выявить практически всех инфицированных и больных животных. Истинная анергия отмечается не более, чем у 3-4% больных коров.

В неблагополучных по туберкулезу хозяйствах допускается применение двукратной туберкулиновой пробы с целью максимального выявления реагирующих животных (гипердиагностика), которая ранее была обязательной при исследовании скота на туберкулез во всех категориях хозяйств. При учете реакций на первое введение через 72 часа нереагирующим животным повторно вводят туберкулин в той же дозе и в то же самое место и реакции учитывают через 24 часа.

Согласно рекомендаций (МЭБ, 1996), в странах ЕС доза туберкулина была снижена до 2000-2500 МЕ. Для Белоруссии, при улучшении эпизоотической ситуации, оптимальной дозой может быть 5000 МЕ, использование которой без существенного снижения чувствительности на 30-50% уменьшает число неспецифических реакций на туберкулин.

Аллергические реакции на туберкулин у животных могут быть обусловлены не только возбудителем туберкулеза, но и атипичными микобактериями. Обычно применяемая внутрикожная туберкулиновая проба не дает возможности дифференцировать парааллергические реакции у крупного рогатого скота. /А.С. Донченко, 1989; А.И.Завгородний, 1987; А.Н.Шаров, 1989; Ю.Я. Кассича, 1990; А.Х.Найманов, 1993; И.И.Румачик, 1993, 1997; Л.П.Ходун, 1997/.

Для прижизненной дифференциальной аллергической диагностики у животных и птиц применяется симультанная внутрикожная проба: введение туберкулина для млекопитающих как основного аллергена для выявления больных туберкулезом животных (у птиц - туберкулина для птиц), и другого аллергена (туберкулина для птиц, КАМа, других сенситинов), способного в большей степени выявлять особи, инфицированные другими (нетуберкулезными) видами микобактерий. Препараты вводят внутрикожно в симметричные участки шеи с разных сторон. Учет реакции проводят через 72 часа, сравнивая наличие и интенсивность реакций. При отсутствии в стаде туберкулезной инфекции интенсивность реакций у животных будет более выражена на КАМ или туберкулин для птиц, и, наоборот, - при наличии туберкулезной инфекции в стаде - на туберкулин для млекопитающих.

Согласно наставлению, реакцию только на туберкулин для млекопитающих или более интенсивную на этот препарат оценивают, как «+». Реакции с одинаковым утолщением кожной складки оценивают, как «=», а с более выраженной на аллерген из нетуберкулезных микобактерий - «-». Статистическую обработку результатов проводят также согласно действующего наставления. Обычно при отсутствии в стаде скрытой туберкулезной инфекции число животных, реагирующих с оценкой «-» в 2-6 раз больше числа животных с оценкой «+» и «=».

Наличие значительного количества животных с оценкой пробы «+» и «=» указывает на высокую вероятность инфицирования возбудителем туберкулеза бычьего или человеческого вида.

Как правило, животных с оценкой «+» и «=» целесообразно сдавать на диагностический убой. Точность симультанной пробы колеблется в пределах 77100%.

Для дифференциации парааллергических туберкулиновых реакций в ветеринарной практике уже давно используется симультанная проба с применением туберкулина для птиц. /Г.В.Чепик, 1980; И.И.Румачик, 1993, 1997/. Оценку результатов этой пробы проводится по количественному и качественному проявлению реакции на туберкулин как в целом по стаду, так и индивидуально по каждому животному. Животные, инфицированные возбудителем туберкулеза или атипичными микобактериями, реагируют на гомологичный туберкулин в большем количестве и интенсивнее. Преимущественное реагирование крупного рогатого скота только на ППД туберкулин для птиц (более 85%) и незначительное (до 15%) его реагирование на оба туберкулина, при более выраженной интенсивности реакций на туберкулин для птиц и отсутствие или наличии единично реагирующих животные только на ППД туберкулин для млекопитающих со слабо выраженными реакциями, давали основание для предварительного заключения об инфицированности скота данного стада атипичными микобактериями (возбудитель туберкулеза птичьего вида - M.avium -отнесен к III группе атипичных микобактерий по классификации Runyon (1959 г.).

И наоборот, если имеет место преимущественное реагирование скота на ППД туберкулин для млекопитающих, то можно предварительно судить об инфицированности (или заболевании) животных возбудителем туберкулеза (M.bovis или M.tuberculosis).

Если животные реагировали в одинаковой степени на оба туберкулина без какой-либо закономерности, то можно было предположить, что в стаде (на ферме) имеет место смешанная микобактериальная инфекция, т.е. инфицирование животных возбудителем туберкулеза бычьего или человечьего вида и одновременно атипичными микобактериями.

Комплексный аллерген из атипичных микобактерий (КАМ), разработанный и внедренный в практику в конце 70-х годов (А.Н.Шаров, 1979, 1980), получил широкое применение для дифференциальной диагностики туберкулеза крупного рогатого скота в симультанной аллергической пробе. Симультанную аллергическую пробу с КАМ проводят в соответствии с наставлением. Ее применение рекомендовано через 30-45 дней после первого (или второго) планово исследования при условии выделения реагирующих на туберкулин животных. Хотя в приложении к инструкции (1988 г.) указывается на возможность проведения первичного исследования поголовья сразу симультанно, если ранее постоянно выявлялись реагирующие на туберкулин животные, но бактериологическим исследованием материала от них, диагноз не был подтвержден, а были выделены атипичные микобактерии.

Проводимые сравнительные испытания эффективности ППД туберкулина для птиц и КАМ в симультанной аллергической пробе у крупного рогатого скота явного предпочтения одному из них не дали. Эти аллергены могут в одинаковой степени быть использованы для дифференциации туберкулиновых реакций у скота. Однако обе методики - как с КАМ, так и с туберкулином для птиц - не лишены недостатков.

Во-первых, за положительную реакцию как на туберкулин для млекопитающих, так и на туберкулин для птиц (или КАМ) считали утолщение кожной складки на 2 мм и более (независимо от характера реакций), в то время как согласно основному юридическому документу (наставлению от 09.02.78 г. п. 15; наставлению от 25.02.86 г. п. 2.9.6.; наставлению по применению (ППД) туберкулинов для млекопитающих и для птиц, утвержденному Департаментом ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия РФ 16 февраля 1999 г., п. 3.8.8) реагирующими признаются животные, увеличение кожной складки у которых составляет 3 мм и более. В результате это несоответствие приводит к искусственному завышению общего показателя реагировавших животных (показатель «А») и необоснованному убою части животных, реагировавших в одинаковой степени (« = ») и со знаком плюс (« + »). Хотя в последнем варианте методики, которая вошла в наставление от 25.02.86 г. уже было внесено уточнение по части убоя животных: «...Для уточнения диагноза всех таких животных, а также реагирующих в равной степени на туберкулин и КАМ (при утолщении кожной складки на 3 мм и более), обязательно подвергают убою с осмотром органов на туберкулез».

- Во-вторых, животные, которые реагируют только на туберкулин для млекопитающих, учитываются со знаком плюс (« + »), однако животные, реагирующие только на КАМ - вообще не принимаются во внимание. Но ведь оба аллергена должны быть поставлены в одинаковые условия (методически). Реагирующих только на КАМ животных, логически, должны были бы учитывать со знаком минус (« - »). Данное методологическое несоответствие во многих случаях приводит к тому, что при явном количественном и качественном преобладании реакций на КАМ и отсутствии туберкулезной инфекции в стаде мы приходим к заключению: «различия в интенсивности реакций на туберкулин и на КАМ статистически не достоверны, а результаты симультанной пробы неопределенны». В то же время опять подвергаем необоснованному убою животных со знаком «плюс» и «равно», а эпизоотический статус ферм остается невыясненным.

При математическом анализе результатов симультанной пробы и оценки достоверности интенсивности реакций с КАМ не принимаются во внимание животные, реагирующие только на КАМ и с одинаковой интенсивностью реакций на оба аллергена; при использовании методики симультанной пробы с туберкулином для млекопитающих не учитывались реагирующие только на туберкулин для млекопитающих, только на туберкулин для птиц и реагирующие на оба туберкулина в одинаковой степени. Учитывались только животные, реагировавшие одновременно на оба туберкулина с разной интенсивностью реакций. Такой методический подход более правильный.

В последнее время для прижизненной аллергической дифференциальной диагностики туберкулеза у крупного рогатого скота в РНИУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского НАН Беларуси» разработан «Способ ускоренной дифференциации туберкулиновых реакций у скота при плановых исследованиях на туберкулез». Он сочетает в некоторой степени одновременно аллергическое исследование животных туберкулином для млекопитающих и симультанную пробу на реагировавших животных. Способ прост в применении, технологичен, сокращает затраты на проведение дифференциальной диагностики в 2-3 раза и на 95-100% уменьшает необоснованный убой реагировавших на туберкулин животных по причине инфицированности их атипичными микобактериями. Кроме того, нет необходимости в изоляции реагировавших животных, перегруппировке и выбраковке наиболее продуктивных коров, что положительно отражается на морально-психологическом климате животноводов /И.И.Румачик, 1993, 1997/.

В РНИУП «Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского НАН Беларуси» разработан «Очищенный специфический аллерген (ОСА) для выявления крупного рогатого скота, инфицированного возбудителем туберкулеза». Препарат получают путем удаления из ППД туберкулина общеродовых компонентов. Благодаря очистке, специфичность препарата повышается в 8-9 раз, и в кожной аллергической пробе на него практически не реагируют коровы, инфицированные атипичными микобактериями. Утолщение кожной складки на 3 мм и более с вероятностью 95% свидетельствует о заражении животного M.bovis или M.tuberculosis (А.П. Лысенко, 1994). Применение препарата особенно показано в стадах с очень высокой степенью сенсибилизации атипичными микобактериями и с высоким риском туберкулезной инфекции, так как по результатам исследования исключается убой фактически здоровых животных с парааллергией и проводится целенаправленное удаление особей с повышенным риском возникновения туберкулеза.

Для массовой аллергической диагностики предложен также "Туберкулин очищенный для млекопитающих" Разработанный препарат обладает целым рядом преимуществ, в том числе и по стоимости. "Туберкулин очищенный для млекопитающих" за счет очистки методом ультрафильтрации и высокой специфической активности на 30% дешевле ППД туберкулина. Апробация препарата более, чем на 10000 головах крупного рогатого скота в хозяйствах с разной эпизоотической ситуацией показала, что при равной специфичности с ППД туберкулином Курской биофабрики он обладает достоверно большей специфической активностью, то есть полнее выявляет больных животных в неблагополучном стаде /А.П.Лысенко, Т.Н.Агеева, Г.В.Карпова и др.1997; А.Н.Притыченко, 2002/.

Особенностью аллергической диагностики туберкулеза у свиней является то, что у этого вида животных до сих пор применяется введение одновременно (симультанно) двух аллергенов: ППД туберкулинов для млекопитающих и для птиц. А поскольку в республике туберкулез у свиней отсутствует, то, естественно животные реагируют, в основном, на туберкулин для птиц. Это создает много искусственно надуманных, ничем научно и практически необоснованных ситуаций. В инструкции и наставлении по туберкулезу животных много в этом плане противоречивых пунктов, хотя диагноз на туберкулез у свиней устанавливается на основании п.3.3. Следует в то же время отметить, что у крупного рогатого скота при инфицировании его атипичными микобактериями, в том числе и возбудителем туберкулеза птичьего вида, никаких ограничений не устанавливается (п. 6.6 инструкции), даже молоко от таких животных (стад) идет на общих основаниях.

Анализ научно-практической работы по туберкулезу свиней позволил нам сделать заключение о том, что этот вид животных достаточно исследовать на туберкулез аллергически только одним туберкулином для млекопитающих и это не приведет к ущербу в диагностике и профилактике туберкулеза.

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2021