Клинические признаки трансмиссивного гастроэнтерита свиней.

Инкубационный период при естественном инфицировании поросят вирусом трансмиссивного гастроэнтерита колеблется от 12 часов до 5 дней. В среднем он равен 1 -3 дням. У взрослых животных он составляет 1 -7 дней. Клинические признаки ТГС и его течение прямо зависят от возраста животных. Типичным клиническим признаком заболевания у поросят является внезапная рвота, которая сопровождается быстро наступающей диареей, отказом от соска, вялостью и скучиванием.

Первые клинические признаки заболевания у них можно обнаружить уже через несколько часов после рождения, но чаще -- на 2—3 сутки. Фекалии, как правило, водянистые, желто-зеленого, реже серого цвета. В испражнениях могут присутствовать сгустки свернувшегося молока. Щетина поросят испачкана фекалиями, вследствие чего кожа становится грязной и липкой. Отмечается быстрая потеря массы животных, обезвоживание и исхудание, высокий процент заболеваемости и падежа поросят до 2-недельного возраста. Выраженность клинических признаков болезни, ее продолжительность и исход прямо пропорциональны возрасту животных. Так, падеж поросят при инфицировании до 5-дневного возраста составляет 100 %, а в 6--10-дневном - 67 %, в 11--15-дневном -30, 15-105-дневном - 3,5 % (66). Таким образом, основная масса поросят погибает от ТГС со 2-го по 7-й день после появления клинических признаков болезни.

Клинические признаки ТГС у поросят старших возрастов и взрослых свиней характеризуются угнетением, частичной или полной потерей аппетита и кратковременной диареей и рвотой у части животных. Заболевание продолжается 1-- 5 дней, реже -- 1-- 2 недели и, как правило, заканчивается выздоровлением. У больных свиноматок отмечают угнетение, уменьшении или полное прекращение секреции молока. Гипо- или агалактия начинается у них с 3--7-го дня после заболевания. У переболевших животных восстанавливается аппетит и нормализуется общее состояние.

Диагноз на трансмиссивный гастроэнтерит ставят комплексно на основании клинико-эпизоотологических данных, патолого-анатомических изменений и лабораторных исследований.

Предварительный диагноз на ТГС может быть поставлен на основании клинических, эпизоотологических и патологоанатомических данных заболевания. Клинические признаки при трансмиссивном гастроэнтерите у поросят, как уже нами описывалось ранее, характеризуются у части животных рвотой, гастроэнтеритом (фекалии водянистые, желто-зеленого цвета), скучиванием, загрязнением и потемнением щетины и кожи поросят, быстрым обезвоживанием организма животных.

При анализе эпизоотологических данных принимают во внимание фактор внезапного возникновения рвоты и диареи среди свиней различных возрастных групп в любое время, часто независимо от условий кормления и содержания животных. Однако необходимо отметить, что различные нарушения условий кормления и содержания животных часто являются "пусковым" механизмом для возникновения заболевания. Учитывают высокую контагиозность заболевания и быстрое его распространение, большой процент заболеваемости и падежа новорожденных поросят в первые дни жизни (до 10--14-дневного возраста). Необходимо учитывать и то, что острое течение трансмиссивного гастроэнтерита, как правило, через 3-4 недели сменяется подострой, энзоотической формой. Процент заболеваемости и падежа снижается до 50%.

При патологоанатомическом вскрытии трупов поросят, павших от этой болезни, в желудке содержится не свернувшееся молоко, слизистая дна желудка -темно-красного цвета с наличием на отдельных участках единичных кровоизлияний. Слизистая оболочка 12-перстной, тощей и частично подвздошной кишок отечная, покрасневшая. Мезентериальные лимфатические узлы сочные, увеличены, гиперемированы. В паренхиматозных органах (сердце, легкие, печень) видимых патологоанатомических изменений не обнаруживают. Часто под капсулой почек, которая с трудом отделяется, обнаруживают мелкие точечные кровоизлияния.

При гистологическом исследовании материала из тонкого отдела кишечника (тощая, подвздошная кишка) поросят, павших от ТГС, находят дистрофию и поверхностный некроз эпителия ворсинок тонкого кишечника. У взрослых свиней при вскрытии находят картину катарального гастроэнтерита.

Трансмиссивный гастроэнтерит по клиническим, эпизоотологическим и патолого--анатомическим признакам сходен с другими инфекционными заболеваниями вирусной этиологии (эпизоотическая вирусная диарея, ротавирусная болезнь, энтеровирусный гастроэнтерит свиней), протекающими с синдромом диареи. Все они клинически проявляются гастроэнтеритом. Поэтому практически затруднительно по клиническим, эпизоотологическим и патолого-анатомическим данным различать вирусные гастроэнтериты. В этой связи возникает необходимость в проведении лабораторных исследований и использовании лабораторных методов диагностики.

Достоверный диагноз на ТГС может быть поставлен путем постановки биологической пробы на новорожденных поросятах в возрасте до 10 дней, находящихся под свиноматкой или искусственно вскармливаемых коровьим молоком или теплой молочной смесью типа "Детолакт". Для этой цели поросят завозят из хозяйства, заведомо благополучного по трансмиссивному гастроэнтериту от серонегативных свиноматок. Поросятам инокулируют 20 %-ную стерильную безмикробную суспензию или фильтрат патологического материала от убитых больных животных. Биопробу считают положительной в случае, если подопытные поросята заболевают на 2--3-й день после заражения, проявляя клинические признаки, характерные для ТГС (рвота, понос, обезвоживание). На 3-5 день животные обычно погибают. Контрольным поросятам вводят стерильный раствор Хенкса. Они не должны заболеть и остаются здоровыми.

Биопроба является дорогостоящим методом диагностики ТГС, и ее постановку осуществляют при необходимости с разрешения Главного управления ветеринарии Минсельхозпрода Республики Беларусь или Департамента ветеринарии Минсельхозпрода Российской Федерации.

Лабораторные методы диагностики трансмиссивного гастроэнтерита основаны на обнаружении антигена вируса ТГС в РИФ, РДП, выделении вируса ТГС от больных гастроэнтеритом животных на культуре клеток и обнаружении специфических антител к вирусу ТГС в РН или РНГА.

Реакция иммунофлуоресценции (РИФ) основана на взаимодействии антигена вируса ТГС со специфическими антителами к нему, которые конъюгируют с флуорохромом (флуоресценцин изотиоционат -- ФИТЦ). Образовавшийся комплекс антиген-антитело под воздействием ультрафиолетовых лучей в люминесцентном микроскопе светиться зеленым светом.

Для диагностики трансмиссивного гастроэнтерита нами в БелНИИЭВ разработана тест-система по обнаружению антигена вируса ТГС в РИФ, включающая набор диагностикумов для этой реакции. В набор входят: кроличий специфический иммуноглобулин G к вирусу ТГС, меченный ФИТЦ; нормальный глобулин класса G кролика, меченный ФИТЦ; специфическая сыворотка кролика к вирусу ТГС; нормальная сыворотка кролика.

В качестве препаратов для выявления антигена вируса ТГС в РИФ являются мазки-отпечатки из стенок тонкого отдела кишечника, брыжеечных лимфатических узлов поросят, убитых с диагностической целью, которые готовили прикладывая обезжиренные предметные стекла к поверхности разреза ткани кишечника или лимфоузла. Кроме того, для этой цели использовали препараты из культуры клеток, выращенных на покровных стеклах и инфицированных 20%-ной суспензией из кишечника и паренхиматозных органов (легкие, селезенка, почки, брыжеечные лимфатические узлы) больных поросят. Через 24--48 часов после инфицирования культуры клеток покровные стекла с клетками извлекали из пробирок и монтировали на предметных стеклах.

Установлено также, что время отбора материала для исследования от начала заболевания поросят ТГС существенно влияло на результативность исследования. В том случае, если патматериал (отрезки тонкого отдела кишечника, брыжеечные лимфоузлы) отбирали у поросят, убитых не позже первых суток после проявления клинических признаков ВТГС, свечение на 3-- 4 креста обнаруживали в 70,8 % случаев. Если же материал отбирали от поросят, убитых через 6--7 суток после заболевания, положительные результаты обнаруживали только в 23 % случаев. Это связано, по-видимому, с тем, что у больных поросят происходит разрушение цилиндрического эпителия ворсинок тонкого отдела кишечника и замена его кубическим эпителием, в которых вирус не внедряется и, следовательно, в нем не обнаруживается.

К числу других экспресс-методов диагностики ТГС относится и тест-система диагностики трансмиссивного гастроэнтерита в реакции диффузионной преципитации в агаровом геле (РДП). Сущность реакции заключается в том, что специфические антигены и антитела диффундируют в агаровом геле из мест локализации навстречу друг другу и, взаимодействуюя, между собой, образуют в агаре полосы (линии) преципитации. Скорость диффузии компонентов реакции зависит от их молекулярной массы. Чем больше их молекулы, тем медленнее идет диффузия, и наоборот. Реакция проявляется при определенном количественном соотношении антигена и антител к нему. Для постановки реакции необходимы: 1%-ный агаровый гель, специфическая кроличья преципитирующая сыворотка к вирусу ТГС, положительный специфический антиген, нормальная сыворотка кролика, отрицательный (контрольный) антиген и испытуемые антигены.

Реакцию ставят в 2 вариантах: макро- и микрометодом. Макровариант реакции осуществляется на агаре в чашках Петри, микровариант - на предметных стеклах. Более приемлемым является макровариант РДП. Для этого в чашки Петри вносят 25,0 мл расплавленного агара. В слое застывшего агара с помощью специального штампа делали лунки диаметром 5-- 6 мм: 1 лунка -- центральная, 6 лунок -- периферических. Расстояние между лунками - 4-- 5 мм. На дно каждой лунки вносили по 1 капле расплавленного агара для предупреждения подтекания компонентов под слой агара.

Реакцию считают положительной при наличии выраженной линии преципитации между лункой со специфической преципитирующей сывороткой и испытуемым антигеном, которая плавно переходит в линию преципитации между лункой со специфической сывороткой и положительным антигеном, образуя в геле замкнутый шестиугольник. В контроле (специфическая преципитирующая сыворотка и отрицательный антиген; нормальная кроличья сыворотка и положительный преципитирующий антиген) линии преципитации отсутствуют.

РДП по обнаружению антигена вируса ТГС является специфичной и достаточно чувствительной реакцией и в комплексе с клиническими, эпизоотологическими, патолого-анатомическими данными позволяет ставить диагноз на трансмиссивный гастроэнтерит.

С целью изоляции вируса ТГС проводят вирусологические исследования патматериала на чувствительной к вирусу ТГС линии культуры клеток. Чаще всего для этой цели используют первично трипсинизированную культуру клеток почки поросенка, тестикул, щитовидной железы поросят. Важное значение имеет методика отбора проб патологического материала для изоляции вируса. В лабораторию направляют в сосуде Дьюара с жидким азотом или термосе со льдом участки пораженного тонкого отдела кишечника, кусочки легкого, селезенки, почек и печени убитых больных диареей поросят. Из патматериала готовят 20%-ную суспензию на растворе Хенкса, центрифугируют при 3--4 тыс. об/мин. в течение 30 мин. В надосадочную жидкость вносят антибиотики. Выдерживают при температуре 4 0С 6 часов, центрифугируют при 6000 об/мин в течение 30 мин. Надосадок после проверки на стерильность используют для заражения культуры клеток. Вносят по 0,2 см3 материала каждой пробы в 4 пробирки с культурой клеток, из которых предварительно удаляют ростовую среду и промывают монослой клеток раствором Хенкса. После инкубирования материала в термостате 0 3 при в течение 30--60 мин вносят в каждую пробирку 0,8--1,0 см поддерживающей среды (среда 199). Для выявления цитопатогенного действия (ЦПД) возбудителя ТГС культуру клеток ежедневно микроскопируют в течение 5-7 суток.

При отсутствии ЦПД в 1 -м пассаже материала проводят ряд последовательных пассажей на культуре клеток. ЦПД обычно проявляется в 3--7-м пассажах и характеризуется набуханием, округлением клеток и отторжением их от стекла. В случае выделения изолята вируса проводят его идентификацию в реакции нейтрализации на культуре клеток с использованием антисывороток.

Однако изоляция вируса еще не является доказательством того, что он является причиной гастроэнтерита у поросят. Необходимо воспроизвести заболевание на поросятах путем экспериментального заражения поросят изолятом вируса ТГС. Таким путем доказывают, что выделенный от больных животных вирус патогенен для поросят и является этиологическим агентом в возникновении гастроэнтерита.

Для диагностики ТГС достаточно обнаружить антиген вируса. Для этой цели используют РИФ, РДП и ИФА.

Обнаружение антител к вирусу ТГС является ретроспективным методом диагностики заболевания. Для этой цели используют реакцию нейтрализации (РН) на культуре ткани с сыворотками крови больных и переболевших свиней и вирусом ТГС. В РН исследуют сыворотки крови не менее чем от 10 свиноматок, взятые через 2-- 3 недели от начала заболевания и повторно с интервалом 14--21 день. Максимальный титр вируснейтрализующих антител к вирусу ТГС появляется через 3 недели после начала болезни. В организме переболевших животных вируснейтрализующие антитела сохраняются от 3 до 12 мес.

Для ретроспективной диагностики ТГС используют также реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА). Определяют специфические антитела в парных сыворотках крови больных и переболевших свиней.

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2021