ИСПОЛЬЗОВАНИЕ В КОМПЛЕКСНОЙ ВЕТЕРИНАРНО-САНИТАРНОЙ ЭКСПЕРТИЗЕ ПРИБОРОВ СЕРИИ ДЕНСИТОМЕТР И БАКТРАК

Поветкин С.Н.1, Мирошниченко П.В.1, Якимов Г.В.1, Якимов Ю.В.1, Симонов А.Н.2, Верёвкина М.Н.2, Берест А.М.3, Кирпанев В.Н.4

ГНУ Краснодарский научно - исследовательский ветеринарный институт Россельхозакадемии, Краснодар, Россия ФГОУ ВПО Ставропольский государственный аграрный университет, Ставрополь, Россия 1047 центр ветеринарно-санитарной экспертизы и лабораторной диагностики Минобороны России, Санкт-Петербург, Россия 4Россельхознадзор, Черкесск, Карачаево-Черкесская республика

При проведении лабораторных, в том числе арбитражных исследований доброкачественности продукции зачастую возникает необходимость проведения комплексной ветеринарно-санитарной экспертизы, куда помимо традиционных паразитологических и микробиологических исследований также могут входить исследования на наличие остаточных количеств микотоксинов в органах и тканях [2].

Эффективность используемого метода анализа значительно возрастает при использовании оборудования, уменьшающего значение человеческого фактора при проведении анализа. Классические методы микробиологических исследований, используемые в практике микробиологических лабораторий, требуют больших затрат труда и времени и практически всегда довольно длительны по времени [1]. В последние годы всё больше внимания лабораторной практики привлекает применение аппаратных методов анализа.

Материалы и методы исследований. Приборами и технологиями из такой серии является использование аппаратов под обозначением Денситометр, использующих для обработки анализируемых пластин программное обеспечение для графической обработки получаемых с помощью устройств видеозахвата изображений и приборы серии Бак Трак 4000, предполагающих использование импедансных технологий для получения быстрых и надёжных результатов для большого числа одновременно исследуемых в микробиологическом отношении образцов.

Импедансная микробиология является непрямым культуральным методом обнаружения микроорганизмов с использованием определения электрического импеданса. Импеданс - это сопротивление потоку переменного тока через проводящий материал; является функцией активной проводимости, ёмкостного сопротивления и применяемой частоты. Изменения импеданса обычно происходят в питательной среде по мере того, как её химический состав изменяется в результате роста и метаболической активности микроорганизмов.

Под действием ферментов микроорганизмов заряженные конечные продукты метаболизма выделяются в ростовую среду. При этом незаряженные или слабо заряженные субстраты превращаются в сильно заряженные конечные продукты. Это обусловлено тем, что, например, белки метаболизируются до аминокислот, углеводы и жиры - до органических кислот. Образующиеся метаболиты имеют меньший размер и, таким образом, более подвижны. Эти электрохимические изменения в ростовой среде приводят к существенному изменению импеданса.

Время, необходимое для достижения значимого изменения импеданса, называется временем определения импеданса (IDT). Это значение обратно пропорционально начальной концентрации микроорганизмов в исследуемой пробе. Ход кривых импедансного сигнала соответствует и отражает кривую роста микроорганизмов в исследуемой пробе. Экспоненциальные изменения импедансного сигнала могут наблюдаться уже в то время, когда количество микроорганизмов достигает порога 106 - 107 микробных клеток в 1 мл субстрата [3].

Тонкослойная хроматография (ТСХ) - наиболее доступный и дешёвый метод количественного и полуколичественного анализа всех классов низкомолекулярных органических соединений, неорганических веществ и высокополимеров, выполняемый с помощью специального оборудования на пластинах, покрытых слоем сорбента. Пластины выпускаются на полимерной или алюминиевой подложке с нанесённым рабочим слоем фракционированного сорбента толщиной 90-120 мкм, закреплённый специальным связующим компонентом.

Денситометр, используя математические алгоритмы, выводит относительную концентрацию и строит график зависимости концентрации, как по площади пика, так и по его высоте (интенсивности пятна), с применением общепринятых в тонкослойной хроматографии показателей, таких, как Rf, Rh, S, H, причём показатели кривых могут несколько отличаться друг от друга, в зависимости от того, какая аппроксимация была нами выбрана -линейная или квадратичная, по площади или по высоте пика, что повышает точность исследования и впоследствии, введя значения для стандарта (а в качестве стандарта может быть использовано вещество с различной заранее известной концентрацией), мы с лёгкостью получаем абсолютные значения присутствующих в исследуемой пробе веществ методом абсолютной калибровки (методом внешнего стандарта) [2].

Прибор БакТрак является автоматизированной экспресс - системой для ускоренной количественной и качественной оценки степени микробной контаминации продовольственного сырья, пищевых продуктов, косметической и фармацевтической продукции, питьевой воды и других объектов внешней среды.

Все полученные данные, в обоих случаях использования названных приборов, обрабатываясь математически, заносятся в таблицу и сводятся в подробный, с красивым интерфейсом протокол (отчёт), что, несомненно, повышает качество лабораторной работы и поднимает авторитет лаборатории как среди коллег (коллектива) учреждения, так и среди клиентов.

Для наших исследований мы взяли приборы БакТрак марки SY -LAB instruments GMBH. Austria и Денситометр марки Сорбфил и использовали в комплексной ветеринарно-санитарной экспертизе сырья животного происхождения, где микробиологически исследовалось количество мезофильной, анаэробной, факультативной анаэробной микрофлоры с последующим анализом животного сырья на наличие остаточного количества микотоксинов и количественной оценки кривой импедансного сигнала и калибровочных кривых анализа видеоизображения хроматограмм с помощью ЭВМ.

Следует отметить, что Бак Трак и Денситометр обозначенных марок оснащены программным обеспечением с удобным интерфейсом, которое позволяет как дробно, так и комплексно очень быстро проводить расчёты основных показателей, характеризующих математическое выражение функции проводимого анализа.

Для исследований использовали ростовые среды серии BiMedia с последующей верификацией опыта в трёхкратной повторности и использованием классической триады Генле-Коха в обычных лабораторных условиях на мясо-пептонном агаре, мясо-пептонном бульоне и последующей биохимической типизацией полученных колоний микроорганизмов с помощью пластин биохимических фирмы НПО «Диагностические системы»

Нами при исследовании всех представленных образцов патматериала, с помощью Денситометра было обнаружено наличие в них остаточных количеств афлатоксина В1 и М1, а в ряде образцов было обнаружено количество микотоксина, превышающего уровень предельно допустимой концентрации, согласно СанПиН.

Результаты исследований. В данной статье мы приводим результаты анализа сердечной мышцы, поражённой финнозом и ножек диафрагмы, поражённых личинками трихинелл.

Результат исследований показал, что в сердечной мышце было обнаружено 30 цистицерков, а также микрофлора, отнесённая к представителям грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов: St. aureus, St. albus, C. freundii.

При исследовании ножек диафрагмы с помощью компрессориума в каждом срезе в поле зрения микроскопа при использовании объектива х8 было обнаружено до 10 личинок трихинелл, а при микробиологическом исследовании выделена грамположительная микрофлора: E.coli, S. aureus, S.albus.

Выводы и предложения. Таким образом, мы считаем целесообразным использовать Денситометр в комплексном подходе к веетеринарно-санитарной экспертизе, поскольку он позволяет выявить даже незначительные, остаточные количества микотоксина в исследуемом материале, и прибор БакТрак для ускорения времени проведения микробиологического анализа, что является важным моментом в повышении качества ветеринарно-санитарного обслуживания.

Справедливости ради следует отметить, что полностью исключить влияние человеческого фактора на формирование объективного анализа вряд ли удастся, поскольку при проведении анализа обозначенным методом приходится руководствоваться общими стандартизированными принципами пробоподготовки с последующим нанесением проб (пятен) и их последующей разгонкой, где обязательно присутствие человеческого контроля для подготовки лабораторной посуды, отслеживания её чистоты, а также для контроля за ходом разделения анализируемых фракций и исключения форсмажорных обстоятельств, способных привести к негативным последствиям.

Сравнивая эффективность тонкослойной хроматографии и иммуно-ферментного анализа для выявления одних и тех же показателей, например, наличия остаточных количеств микотоксинов в анализируемых навесках, следует отметить, что эти два метода могут органично дополнять друг друга.

Литература. 1. Антипов В.А. Микотоксикозы животных и птиц на Кубани / В.А. Антипов, В.Ф. Васильев, Т.Г. Кутищева // Научные основы обеспечения защиты животных от экотоксикантов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний: Материалы международного симпозиума. Казань. 28-30 нояб.2005.- с. 43. 2. Мирошниченко П.В. Сравнение использования тонкослойной хроматографии и иммуноферментного анализа для выявления наличия микотоксинов в исследуемых субстратах / П.В. Мирошниченко, С.Н. Поветкин // Современные проблемы диагностики, лечения и профилактики болезней животных и птиц: Сборник научных трудов ведущих учёных России и Зарубежья.- Екатеринбург. - 2010.- с.178. 3. Использование метода измерения электрического сопротивления (импеданса) для санитарно-бактериологического исследования объектов окружающей среды: Методические рекомендации.- М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2005.- 59 с.

USE IN COMPLEX VETERINARY-SANITARY EXAMINATION OF DEVICES OF SERIES DENSITOMETER AND BACTRACK Povetkin S.N.1, Miroshnichenko P.V.1, Yakimov G.V.1, Yakimov Y.V.1, Si-monov A.N.2, Veryovkina M.N.2, Berest A.M.3, Kirpanev V.N.4

1The Krasnodar SRVI, Krasnodar, Russia Stavropol State Agrarian University, Stavropol, Russia 1047 Center of Food Laboratory expertises, Military Departament, St.-

Petersburg, Russia

4Management on veterinary and fytosanitory supervision, Cherkessk, Kara-

chaevo-Cherkessian Republic The information review on devices and analysis methods in complex vet-erinarno-sanitary examination is spent, comparative research is carried out two departmental laboratories by means of the described devices.

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2021