ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ КУЛЬТУР МИКРООРГАНИЗМОВ С МНОЖЕСТВЕННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТЬЮ, ВЫДЕЛЕННЫХ ОТ СВИНЕЙ К СОЧЕТАНИЯМ (КОМПОЗИЦИЯМ) АНТИБАКТЕРИАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ

Ефанова Л.И., Давыдова В.В., Манжурина О.А., Рубцова Ю.А., Гуторова Е.А.

ГНУ Всероссийский НИВИ патологии, фармакологии и терапии, Воронеж, Россия

Множественная лекарственная устойчивость патогенных, условнопатогенных микроорганизмов, циркулирующих в популяциях животных и способных вызвать у них развитие патологии, является следствием не рационального, не контролируемого, без учета чувствительности микроорганизмов применения антибактериальных препаратов и представляет серьезную общебиологическую проблему (1).

Доля резистентных одновременно к 10 и более антибактериальным препаратам культур, выделенных из патматериала от больных и павших животных разных видов в последние годы, превышает 50%, при этом от 8,7% до 34,7% культур оказываются устойчивыми к 16-20 препаратам. Мало того, появляются штаммы микроорганизмов усиленно размножающиеся в присутствии бактериальных средств, что приводит к низкой эффективности проводимой антибактериальной терапии (3,4).

Антибактериальная эффективность препаратов разных групп в настоящее время колеблется от 1-10% (пенициллин, эритромицин, стрептомицин и др.)до 50-80% (фторхинолоны, нитрофураны, гентамицин, полипептидные антибиотики и др.), что требует изыскания все новых и новых средств антибактериальной терапии как путем создания новых полусинтетических антибиотиков, изыскания иных продуцентов антибиотиков и новых лекарственных форм, так и конструирования комплексных (из 2-3 и более) препаратов, ротации антибактериальных средств с учетом антибиотикограммы (4,5).

Для определения чувствительности микробных патогенов к антибактериальным препаратам широко используют метод диффузии в агар с применением дисков, содержащих определенную концентрацию того или иного препарата, реже - метод серийных разведений (на жидкой или плотной питательной среде), с помощью которого выявляется чувствительность микроорганизмов не только к одному антибактериальному средству, но и к различным их сочетаниям, комплексным препаратам. Однако, последний метод громоздкий и трудоемкий в исполнении, хотя дает возможность определить широкий диапозон минимальной ингибирующей концентрации препарата, что особенно важно при выборе доз вводимых компонентов при создании новых комплексных препаратов, для научных целей и т.д.

Для ветеринарной практики важно знать, какой препарат, в т.ч. комплексный, может быть использован для терапии больных животных в случае выделения патогенов с множественной лекарственной устойчивостью, т.к. нередко в условиях циркуляции таких возбудителей оказываются малоэффективными и предлагамые комплексные препараты.

Материал и методы исследования. Исследовано 24 пробы влагалищных смывов больных эндометритом свиноматок, 41 проба спермы хряков из 11 свиноводческих хозяйств. Изоляцию возбудителей из патматериала от больных животных, спермы хряков проводили по общепринятым в микробиологии методам с использованием простых (МПА. МПБ), глюкозо-сывороточных, молочно-солевых, дифференциально-диагностических (агар Эндо, Левина, Плоскирева, висмут-сульфит, энтерококковый агар, МПБ с желчью) сред, кровяного агара.

Чувствительность выделенных патогенов определяли с использованием стандартных индикаторных дисков производства НИЦФ (С-Петербург), согласно МУК от 30 октября 1971 г. (6). Культуры микроорганизмов, обладающих устойчивостью к 14-16 препаратам, дополнительно исследовали на чувствительность к сочетаниям из 2-3 препаратов, по разработанному нами способу (3). Диски с антибактериальными препаратами вносили в МПБ (МПБГ). В каждом случае сочетания препаратов выбирали с учетом результатов предварительного определения чувствительности методом дисков на АГВ, совместимости препаратов (синергизм, аддитивное действие), а также имеющихся на рынке комплексных антибактериальных средств. Оценку результатов проводили через 16-18 часов после инкубации культуры при 36-37оС на МПБ (МПБГ) с дисками антибактериальных препаратов; контролем служила пробирка с МПБ (МПБГ), в которую засевали культуру без внесения дисков. Отсутствие роста микроорганизмов на МПБ (МПБГ) с дисками антибактериальных препаратов при наличии роста в контрольной пробирке (без дисков) - свидетельство эффективности выбранного сочетания в отношении микроорганизмов с множественной лекарственной устойчивостью.

Результаты исследований. 1. Влагалищные смывы больных эндометритом свиноматок. Исследовано 24 пробы влагалищных смывов свиноматок с признаками эндометрита. Установлено обсеменение всех исследованных проб ассоциациями из 2-3 микроорганизмов, представленными E.coli, Ent.faecalis, реже Citrobactor diversus, Staph.aureus, Staph.epidermidis.

Выделенная микрофлора в 11 случаях (46%) оказалась устойчивой к действию 16 испытанных антибактериальных препаратов при определении чувствительности методом дисков(фуразолидону, фурагину, бензилпенициллину, неомицину, канамицину, тетрациклину, доксициклину, эритромицину, рифампицину, полимиксину, энрофлоксацину, норфлоксацину, ампициллину, линкомицину, гентамицину, цефалотину).

В таблице 1 приведены результаты определения чувствительности культур с множественной лекарственной устойчивостью к сочетаниям препаратов.

Таблица 1

Чувствительность культур с множественной лекарственной устойчивостью, выделенных из влагалищных смывов больных эндометритом свиноматок, к сочетаниям препаратов

28

Установлено, что наиболее эффективными в отношении микрофлоры, с множественной лекарственной устойчивостью являются сочетания: энрофлоксацин+фуразолидон (87,5%), гентамицин+энрофлоксацин (75%), неомицин+фуразолидон (60%); малоэффективными - полимиксин+ фуразолидон (40%), полимиксин+гентамицин (33,3%), рифампицин+ доксициклин (25%). В 2 случаях (16,7%) культуры оказались устойчивыми ко всем испытанным сочетаниям препаратов.

2. Сперма хряков. Исследована 41 проба спермы хряков, из которых в 20 случаях (48,8%) выделены культуры микроорганизмов, устойчивые к действию 16 испытанных препаратов, указанных выше. Изолированные

культуры микроорганизмов были представлены E.coli (80%), Ent.faecalis (50%), Ent.faecium (50%), Ps.aeroginosa (30%), Proteus vulgaris (20%), Staph.aureus (10%), при этом из всех исследованных проб спермы выделены ассоциации указанных микроорганизмов из 3-4 видов. Множественной лекарственной устойчивостью обладали, как правило, все виды микробов, изолированные из каждой исследованной пробы спермы.

В таблице 2 приведены результаты исследования чувствительности выделенных культур к сочетаниям препаратов.

Культуры с множественной лекарственной устойчивостью оказались чувствительными, в большей степени, к сочетанию гентамицин+ энрофлоксацин (90%), а также к энрофлоксацин+фуразолидон (80%); в меньшей степени к сочетаниям неомицин+бензилпенициллин (10%), рифампицин + доксициклин (23,5%). От 30% до 40% чувствительных культур было к сочетаниям: полимиксин+гентамицин, пенициллин+канамицин, рифампицин+полимиксин.

Одновременно 40% выделенных культур с множественной лекарственной устойчивостью были чувствительны к 2-4 сочетаниям препаратов; в то же время 10% культур оказались устойчивыми ко всем испытанным сочетаниям, включая гентамицин+энрофлоксацин. Эти культуры были изолированы от животных 1 хозяйства из 11, которым принадлежали хряки, чья сперма была подвергнута бактериологическому исследованию.

Таблица 2

Чувствительность культур с множественной лекарственной устойчивостью, выделенных из спермы хряков, к сочетаниям препаратов

29

Параллельно с определением чувствительности культур с множественной лекарственной устойчивостью к сочетаниям препаратов разработанным нами способом была определена чувствительность 10 культур микроорганизмов методом последовательных серийных разведений в МПБ к сочетаниям полимиксин+гентамицин и гентамицин+энрофлоксацин. В таблице 3 приведены результаты этих исследований.

Установлено, что минимальная ингибирующая концентрация в одном случае была равна 75 МЕ/мл полимиксина+ 2,5 мкг/мл гентамицина, в двух- 300 МЕ/мл полимиксина+10 мкг/мл гентамицина, в остальных семи эти концентрации оказались не эффективными в отношении выделенных микроорганизмов с множественной лекарственной устойчивостью.

Таблица 3

Эффективные концентрации препаратов в сочетаниях гентамицин+ энрофлоксацин, полимиксин+гентамицин в отношении культур с множественной лекарственной устойчивостью

30

Все 10 культур были чувствительными к сочетанию гентамицин+ энрофлоксацин, взятых в концентрациях 2,5мкг/мл + 1,25 мкг/мл соответственно, при этом в семи случаях минимальная ингибирующая концентрация была при содержании 1,25 мкг/мл гентамицина + 0,62 мкг/мл энрофлоксацина. Бактерицидная концентрация этого сочетания препаратов в восьми случаях была равна 2,5 мкг/мл гентамицина + 1,25 мкг/мл энрофлоксацина, в двух случаях- 5 мкг/мл гентамицин + 2,5мкг/мл энрофлоксацина.

Таким образом, результаты определения чувствительности микроорганизмов с множественной лекарственной устойчивостью предлагаемым нами способом подтверждены результатами, полученными при определении чувствительности методом серийных разведений.

Выводы. 1. Патогенные и условнопатогенные микроорганизмы с множественной лекарственной устойчивостью (к 15-16 препаратам разных групп) в разной степени чувствительны (от 10 до 90%) к сочетаниям препаратов, в т.ч. используемым в комплексных антибактериальных препаратах. 2. Устойчивость микроорганизмов к комплексным антибактериальным

препаратам (сочетаниям) свидетельствует о необходимости дифференцированного подхода при их выборе для терапии животных с учетом антибиотикограммы. 3. В условиях диагностических ветеринарных лабораторий для определения чувствительности микробных патогенов с множественной лекарственной устойчивостью к комплексным препаратам (сочетаниям) может быть использован разработанный нами способ с использованием жидкой питательной среды (МПБ, МПБГ) и стандартных индикаторных дисков НИЦФ.

Литература. 1 . Выкин Л. Ф. Клиническая микробиология для ветеринарных врачей. /Выкин Л. Ф., Хапцев З. Ю. -М., «Колос», 2006. 2. Ефанова Л. И. Способ определения чувствительности микроорганизмов с множественной лекарственной устойчивостью к сочетаниям антибактериальных препаратов / Ефанова Л. И., Панина Т. А., Давыдова В. В. - Патент на изобретение №2388827 от 10.05.2010 приоритет от 9.10.08., 5с. 3. Ефанова Л. И. Чувствительность микроорганизмов к антибактериальным препаратам при смешанных инфекциях животных. Ефанова Л. И., Транькова

A. С., Давыдова В. В., Иванова Ю. В., Панина Т. А. Материалы первого съезда ветеринарных фармакологов 21-23 июня 2007 года с. 280-285. 4. Ефанова Л. И. Чувствительность микрофлоры спермы хряков, половых путей больных эндометритом свиноматок к антибактериальным препаратам. / Ефанова Л. И., Давыдова В. В., Рубцова Ю.А., Крутских Ю.А. Матер.межд.науч.-прак.конф.посвящ.   100-летию  со дня рождения проф.

B. А.Акатова 27-29 мая 2009 года с. 164-168. 5. Козлов Р.С. Антибиотико-резистентность Streptococcus pneumoniae в России в 1999-2005 гг.: Результаты многоцентровых исследований ПеГАС-I и ПеГАС-II./ Р.С.Козлов, О.В.Сивая, К.В.Шпынев и др. Клин. микробиол.химиотер., 2006, С.33-47. 6. Методические указания по определению чувствительности к антибиотикам возбудителей инфекционных болезней сельскохозяйственных животных. Утв. ГУВ МСХ СССР 30 октября 1971г.

SENSITIVITY OF CULTURES OF MICROORGANISMS WITH THE PLURAL MEDICINAL STABILITY, ALLOCATED FROM PIGS TO COMBINATIONS (COMPOSITIONS) OF ANTIBACTERIAL

PREPARATIONS

Efanova L.I., Davidova V.V., Manzhurina O. A, Rubtsova J.A., Gutorova Е.А.

Russian Research Veterinary Institute of Pathology, Pharmacology and Therapy,

Voronezh, Russia

Is defined sensitivity of cultures of microorganisms with the plural medicinal stability, the cases isolated in 46 % from sexual ways sick эндометритом sows and 48,8% of the investigated tests of sperm of male pigs, to combinations of antibacterial preparations. Effective compositions of preparations concerning the allocated cultures with plural medicinal stability are established, thus 10-16,7 % of cultures of microorganisms have appeared steady against 6-7 tested compositions that demands the account antibioticgramm at appointment

of complex preparations for antibacterial therapy. The simple way of definition of sensitivity of microorganisms to compositions of preparations is offered.

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2021