23. ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДИЕНОВЫХ КОНЪЮГАТОВ И КЕТОДИЕНОВ ПОЛИНЕНАСЫЩЕННЫХ ЖИРНЫХ КИСЛОТ В КРОВИ

Принцип метода. Процесс перекисного окисления полиненасыщенных жирных кислот сопровождается перегруппировкой двойных связей и возникновением системы сопряженных диеновых структур, имеющих максимум поглощения при 232-234 нм с пле-чом в области 260-280 нм, соответствующим coпряженным кетодиенам.

Реактивы.

1.Экстрагирующая смесь гептан - изопропиловый спирт 1:1 (по объему).

2.Спирт этиловый, 96%.

Оборудование и аппаратура.

1.Спектрофотометр.

2.Баня водяная.

3.Центрифуга рефрижераторная.

4.Баллон с газообразным азотом.

5.Пипетки измерительные.

6.Пробирки химические и центрифужные.

Материал для исследования.

Материалом для исследования служит гепаринизированная кровь.

Ход определения.

1.В центрифужные пробирки вносят по 1 мл крови.

2. К пробам приливают по 7 мл экстрагирующей смеси, закрывают корковыми пробками ( нельзя закрывать резиновыми пробками ) и интенсивно встряхивают в тече-ние 2 минут.

3. Пробы центрифугируют в течение 15 минут при 3000 об/мин при 0-4 °С.

4. 2 мл верхнего гептанового слоя переносят в чистые химические пробирки и вы-паривают в токе азота на водяной бане при 40-50°С.

5. К сухому остатку на дне пробирки приливают 3 мл этилового спирта, пробирки интенсивно встряхивают, оставляют на 10-15 минут при комнатной температуре и перед измерением еще раз встряхивают.

6. Измеряют относительную плотность опытных проб при 232 и 273 нм против контрольной, содержащей этиловый спирт, в кюветах с ходом луча 10мм.

7. В этих же пробах определяют содержание общих липидов по п.9 сульфованили-новым методом.

Расчет результатов.

Содержание диеновых конъюгатов (ДК) и кетодиенов (КД) рассчитывают по фор-муле:

34

С ДК(КД) - содержание диеновых конъюгатов (кетодиенов) в единицах оптической плотности на мг липидов;

Е232 - оптическая плотность пробы для диеновых конъюгатов;

Е273 - оптическая плотность пробы для кетодиенов;

А - содержание общих липидов в пробе.

Примечание.

Пробы гепаринизированной крови исследуют не позднее 6 часов после взятия при условии хранения не выше 10°С.

 

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2021