20. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ВИТАМИНА А И КАРОТИНА В СЫВОРОТКЕ (ПЛАЗМЕ) КРОВИ

Принцип метода. Метод основан на щелочном гидролизе и экстракции витамина А и каротина из сыворотки (плазмы) крови при помощи малолетучих растворителей и последующем спектрофотометрическом измерении поглощения света раствором при длине волны 328 нм для витамина А и 460 нм для каротина.

Реактивы.

1. 96%-ный этиловый спирт.

2. 11 н раствор едкого калия: 617,21 г едкого калия доводят дистиллированной во-дой в колбе на 1 л.

3. 1 н раствор едкого калия добавить 10 объемов этилового спирта. Раствор гото-вят в день проведения анализов.

4. Ксилол-октановая смесь (1:1). Готовят в день проведения анализов.

Оборудование и аппаратура.

1. Спектрофотометр типа СФ-16, СФ-26, СФ-46 и др.

2. Пробирки из стекла «Пирекс» с пришлифованными пробками.

3. Центрифужные пробирки.

4. Пипетки градуированные на 1, 5, 10 мл

5. Водяная баня.

6. Ультрафиолетовая лампа ПРК-4.

7. Вентилятор настольный.

8. Центрифуга.

9. Мерные цилиндры на 250 мл по ГОСТ 1770.

10. Стеклянные палочки.

Материал для исследования.

Материалом для исследования служит сыворотка или плазма крови.

Ход определения.

1. В центрифужные пробирки набирают 1 мл сыворотки (плазмы) крови и добав-ляют такое же количество 1 н спиртового раствора едкого натра.

2. Перемешивают стеклянной палочкой до образования однородной смеси и ставят для гидролиза на водяную баню при температуре 60°С на 20 минут.

3. Пробу охлаждают в воде со льдом в течение 5-10 минут и добавляют 3 мл кси-лол-октановой смеси.

4. Пробирку со смесью сильно встряхивают и дают постоять, после чего центрифу-гируют 5 мнут при 1500 об /мин.

5. Надосадочную жидкость переносят пипеткой в кварцевую кювету и определяют оптическую плотность при длине волны 460 ни (максимум поглощения каротина).

6. Для определения витамина А измеряют оптическую плотность пробы при длине волны 328 нм до облучения (Е1).

7. Пробы облучают лампой ПРК-4 в закрытых пробирках из стекла, пропускающе-го ультрафиолетовые лучи, например, стекла «Пирекс» на расстоянии 15-20 см в течение часа. Охлаждают с помощью настольного вентилятора.

8. Измеряют оптическую плотность проб после облучения при длине волны 328 нм (Е2).

Расчет результатов.

 Витамин А, мкМ/л = (El - Е2)х3х22,238

 Каротин, мкМ/л = Е460 х3х8,942 , где

22,238 и 8,942     - постоянные коэффициенты;

El - Е2          - разница оптической плотности пробы до и после облучения

                                                   при 328 нм;

Е460                - оптическая плотность пробы при 460 нм;

3                - объем ксилол-октановой смеси, мл.

ЗНАЧЕНИЕ: Содержание каротина в сыворотке крови повышается в летний пе-риод и снижается в зимне-стойловый период. Уровень каротина в сыворотке крови сви-детельствует о величине поступления его в организм с кормами. Усвоение его и превра-щение в витамин А зависит от интенсивности обменных процессов в организме, а также неферментативных антиоксидантных процессов.

Уровень витамина А и каротина снижается при хранении сыворотки (плазмы) бо-лее недели в холодильнике, что следует учесть при проведении анализов.

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2021