19. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЩЕЛОЧНОГО РЕЗЕРВА ПЛАЗМЫ КРОВИ

Принцип метода. В одной половине сдвоенной колбы плазма крови обрабатыва-ется серной кислотой, благодаря чему выделяется углекислый газ, находящийся в составе бикарбонатов. Выделивший углекислый газ поглощается раствором едкого натра, кото-рый находится в другой половине колбы. Избыток едкого натра, не вошедшего в реакцию с углекислым газом, и половину натрия углекислого (Na2CО3), образовавшегося в про-цессе поглощения СО2, оттитровывают раствором серной кислоты. По количеству свя-занного едкого натра определяют количество выделенного из плазмы углекислого газа, которое эквивалентно содержанию бикарбонатов (NaHCО3).

Реактивы.

1. 0,1 н раствора серной кислоты (из фиксанала).

2. 0,02 н раствор серной кислоты. Готовится из 0,1 н раствора серной кислоты в день исследования.

3. 0,1 н раствор едкого натра.

4. 0,02 н раствор едкого натра в бутыли, защищенной от доступа воздуха и соеди-ненной с микробюреткой на 5 мл.

5. 5%-ный раствор серной кислоты. Берут 2,7 мл концентрированной серной кис-лоты и добавляют 95 мл дистиллированной воды.

6. 1%-ный спиртовой раствор фенолфталеина

7. Вазелиновое масло по ГОСТ 3164.

8. 1%-ный раствор гепарина.

Оборудование и аппаратура.

1. Сдвоенные колбы с резиновыми пробками.

2. Микробюретки на 2 и 5 мл

3. Штативы универсальные.

4. Пипетки на 1, 2, 5 мл

5. Бутыль с тубусом.

6. Центрифужные пробирки из толстого стекла.

7. Центрифуга.

8. Колбы мерные на 100 и 1000 мл по ГОСТ 1770.

Материал для исследования.

Материалом для исследования служит плазма крови, полученная в условиях, мак-симально исключающих доступ воздуха в пробу.

Ход определения.

1. В чистые, сухие центрифужные пробирки вносят 0,5-1,0 мл вазелинового масла, 2-3 капли 1%-ного раствора гепарина и закрывают пробками, нумеруют.

2. В подготовленную пробирку берут кровь, осторожно перемешивают и ставят в прохладное место (термос со льдом).

3. В лаборатории кровь центрифугируют в той же пробирке под слоем вазелиново-го масла (пробирки открывают) при 2500-3000 об/мин в течение 20 минут.

4. В одну половину сдвоенной колбы наливают 2 мл 0,02 н раствора едкого натра, закрывают пробкой, в другую половину колбы - 0,5 мл плазмы крови и 1 мл 5%-ного рас-твора серной кислоты и быстро закрывают её пробкой. Анализы проводят серийно. Сна-чала во все колбы вносят из бюреток на 5 мл раствор едкого натра, затем вносят плазму и раствор серной кислоты, каждый раз поочередно открывая их.

5. Проверяют, хорошо ли закрыты колбы, осторожно перемешивают (вращатель-ными движениями) плазму крови с кислотой и оставляют стоять в течение 4-х часов (можно и больше, обычно на ночь). В контроле (не менее 4-х колб) вместо плазмы вносят дистиллированную воду. Перемешивание плазмы с кислотой проводят не менее 3-х раз.

6. Через четыре часа (или утром следующего дня) приступают к титрованию. Для этого поочередно открывают половину колб, где находится раствор едкого натра, вносят 2 капли 1%-ного раствора фенолфталеина и титруют из микробюретки на 2 мл. 0,02 н раствором серной кислоты до полного обесцвечивания раствора.

Расчет результатов.

1. По разнице титрования в контрольных и опытных образцах устанавливают ко-личество мл 0,02 н раствора едкого натра, связанного с углекислым газом, вытесненным из бикарбонатов плазмы.

2. Расчет ведут по формуле:

36

Vк - количество 0,02 н раствора серной кислоты в мл, пошедшего на титрование контрольного образца;

Vоп - количество 0,02 н раствора серной кислоты в мл, пошедшего на титрование исследуемого образца;

Vк – Vоп - количество 0,02 н раствора едкого натра в мл, связанного с СО2;

Vпл. - количество плазмы крови в мл (в методике принято равным 0,5 мл);

0,448 - коэффициент пересчета 0,02 н раствора едкого натра на СО2 в условиях данной реакции;

100 - коэффициент для перевода результатов анализа на 100 мл плазмы крови.

3. Разницу количества (мл) 0,02 н раствора серной кислоты, пошедшего на титро-вание контрольного и опытного образца, умножают на коэффициент 89,6 и получают ко-нечный результат в об.%СО2.

ЗНАЧЕНИЕ. Нормальные величины щелочного резерва плазмы крови животных представлены в таблице 2.

 

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2021