13. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ НЕОРГАНИЧЕСКОГО ФОСФОРА В КРОВИ И В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

Принцип метода. Фосфор в безбелковом супернатанте образует с ванадат-молиб-датным реактивом лимонно-желтое окрашивание, интенсивность которого пропорцио-нальна содержанию фосфора в крови (сыворотке крови).

Реактивы.

1.  Набор реактивов «Фосфор».

2. Стандартный раствор фосфора 5 мМ/л. 0,68 г КН2РО4 перекристаллизованного и высушенного до постоянного веса растворяют в 1 л воды. Перед применением разводят водой в 2 раза (2,5 мМ/л).

3. 10%-ный раствор трихлоруксусной кислоты. 100 г ТХУ растворяют в 900 мл во-ды.

4. 2 мМ/л раствор ванадата аммония. 0,234 г ванадата аммония растворяют в 500 мл воды (кипящей) и кипятят до пожелтения раствора, охлаждают, доводят до 1 литра.

5. 30 мМ/л раствор молибдата аммония. 5,88 г молибдата аммония растворяют в 500 мл воды при температуре 50°С, после охлаждения добавляют 100 мл концентриро-ванной серной кислоты, охлаждают, доводят водой до 1 литра.

6. Ванадат-молибдатный реактив. Перед проведением исследования смешивают растворы молибдата и ванадата аммония в равных объемах.

7. Кислота серная концентрированная, квалификации х.ч. или ч.д.а.

Оборудование и аппаратура.

1. Спектрофотометр.

2. Центрифуга.

3. Холодильник бытовой по ГОСТ 16317.

4. Унипипетки на 200, 250, 500, 12000 мкл и наконечники к ним.

5. Колбы мерные на 1000 мл по ГОСТ 1770.

6. Пробирки Флоринкого.

7. Пробирки центрифужные.

8. Штатив для пробирок.

9. Весы аналитические по ГОСТ 24104-2001.

10. Флаконы на 500, 1000 мл.

11. Мерные цилиндры на 25 и 50 мл по ГОСТ 1770.

12. Секундомер.

Материал для исследования.

Материалом для исследования служит кровь и сыворотка крови без гемолиза.

Ход определения.

п/п

Реактивы, мл

Проба

Стандарт

Контроль

Депротеинизация:

 1.                               Кровь (сыворотка)                               0,2                                     –                                     –

   2.                             Стандарт                                               –                                      0,2                                  –

    3.                             Вода                                                    –                                         –                                  0,2

   4.                             10%-ный р-р ТХУ                               1,0                                     1,0                              1,0

Перемешивают и через 5 мин центрифугируют при 3000 об/мин в те­чение 10 мин.

Постановка реакции:

1.                                Супернатант                                       0,5                                    0,5                               0,5

   2.                    Ванадат-молибдатный реактив                   0,5                                  0,5                               0,5                                                

Перемешивают и через 2 часа измеряют оптическую плотность пробы и стандарт-ной пробы против контроля (раствор сравнения) на спектрофотометре при λ=436 нм.

Расчет результатов.

40

где

Соп. - концентрация неорганического фосфора в крови или сыворотке крови в мМ/л;

Eoп. - экстинкция опытной пробы;

Ест. - экстинкция стандартной пробы.

ЗНАЧЕНИЕ. Содержание неорганического фосфора в крови повышено при нефрите, острой дистрофии печени, поносах, метаболическом ацидозе, тяжелой форме миоглобинурии, атонии преджелудков, лейкозе, гиперфункции щитовидной железы, ги-перфункции щитовидной железы, гипофункции паращитовидных желез, высококонцен-тратном типе кормления, острой форме остеодистрофии, повышенном поступлении ви-тамина Д. Снижение наблюдают при гиперпаратиреозе, остеомаляции, почечном ацидозе, гипокалиемии, гипофосфатемическом рахите, дефиците витамина Д, анемии, диспепсии, родильном парезе, хронической форме остеодистрофии.

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2021