12. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ОБЩЕГО КАЛЬЦИЯ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

Принцип метода. Мурексид при рН 10,1 образует с кальцием соединение розового цвета. При добавлении трилона Б, последний образует с кальцием более прочное ком-плексное соединение и мурексид освобождается с восстановлением точке эквивалентно-сти первоначального фиолетового цвета.

Реактивы.

1. 0,005 н раствор динатриевой соли ЭДТА (трилон Б). 0,932 г вещества растворя-ют в дистиллированной воде в мерной колбе на 1 л и доводят до метки, добавляют не-сколько капель хлороформа или толуола. 1 мл такого раствора ЭДТА эквивалентен 0,1 мг кальция.

2. 1,8 н раствора едкого натра. 7,2 г вещества растворяют в дистиллированной во-де, после охлаждения объём доводят до 100 мл.

3. Водный раствор индикатора мурексида (пурпурат аммония) содержащий в 1 мл 1 мг вещества. Готовят в день проведения анализов. Хранят в холодильнике не более 3 суток.

4. Стандартный раствор углекислого кальция. 2, 495 г предварительно высушен-ного до постоянного веса при температуре 105-110 °С углекислого кальция, помещают в колбочку на 150-200 мл, добавляют 20-25 мл воды и концентрированной соляной кисло-ты каплями до полного растворения вещества. Затем смесь нагревают до кипения, пере-носят в мерную колбу на 1 мл и после охлаждения доводят дистиллированной водой до метки. 1 л содержит 1 мг кальция.

5. Установление титра ЭДТА. 1 мл 0,005 н раствора ЭДТА эквивалентен 0,1 мг кальция, содержащемуся в 0,1 мл стандартного раствора углекислого кальция. Берут 0,1 мл стандартного раствора кальция, добавляют 9,3 мл бидистиллированной воды, 0,4 мл 1,8 н раствора едкого натра, 2 капли раствора индикатора мурексида и титруют до пере-хода розовой окраски в фиолетовую (окраска контроля). Проводят не менее 6 параллель-ных определений и вычисляют среднюю величину раствора ЭДТА. Титр ЭДТА равен единице, деленной на количество мл 0,005 н раствора ЭДТА, пошедшее на титрование 0,1 мл стандартного раствора углекислого кальция.

Оборудование и аппаратура.

1. Стаканчики химические по ГОСТ 25336-82.

2. Пипетки на 0,1, 1,0 и 2,0 мл.

3. Колбы мерные на 100, 200 и 1000 мл по ГОСТ 1770.

4. Колбы конические из термостойкого стекла на 150-200 мл

5. Электроплитка по ГОСТ 14919-83.

6. Микробюретки на 2,0 и 1,0 мг по ГОСТ 29251-91.

Материал для исследования.

Материалом служит сыворотка крови.

Ход определения.

1. В контрольный стаканчик вносят 9,4 мл бидистиллированной воды, 0,4 мл 1,8 н раствора едкого натра и 2 капли индикатора. Раствор окрашивается в фиолетовый цвет.

2. В опытный стаканчик вносят 9 мл воды, 0,4 мл 1,8 н раствора едкого натра, 0,4 мл сыворотки, 2 капли индикатора. Появляется светло-розовая окраска.

3. Опытную пробу ставят рядом с контролем и титруют по каплям 0,005 н раство-ром ЭДТА до восстановления цвета индикатора (окраска контроля).

4. Индикатор вносят в опытные образцы и стандарт непосредственно перед титро-ванием. Через 5-6 определений ставят новый контроль.

Расчет результатов.

Расчет проводится по формуле:

Са, мМ/л  =  (п х Т х 25) × 0,250,  где

п - количество мл раствора ЭДТА, пошедшее на титрование пробы:

Т - титр раствора ЭДТА;

25 - постоянный коэффициент.

ЗНАЧЕНИЕ. Концентрация кальция в сыворотке крови животных - величина до-вольно постоянная. Однако содержание его в сыворотке крови всё же изменяется в зави-симости от уровня поступления его кормами и клинического состояния животного.

Снижение содержания кальция в крови (гипокальцемия) наблюдают при длитель-ном дефиците его в рационе или при плохом усвоении при недостатке витамина Д, про-теина, углеводов и избытке фосфора и цинка. Гипокальцемия бывает при тяжелых фор-мах остеодистрофии, пастбищной тетании, родильном парезе.

Повышение содержания кальция в крови (гиперкальциемия) встречается редко, например, при избытке йода в организме, гиперфункции желез, острой костной дистро-фии, гипервитаминозе Д.

Определение кальция в сыворотке крови или плазме (показатели одинаковы) необходимо также для характеристики фосфорно-кальциевого соотношения.

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2021