11. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО КОЛИЧЕСТВА КЕТОНОВЫХ ТЕЛ В КРОВИ

Принцип метода. Под действием серной кислоты кетоновые тела распадаются до ацетона. Последний соединяется с йодом, образуя комплексное соединение. При помощи гипосульфита свободный йод оттитровывают и по разности между контролем и опытом определяют связанный йод.

Реактивы.

1. Бихроматная смесь - 5 г двухромовокислого калия тщательно смешивают с 50 мл концентрированной серной кислоты и 250 мл дистиллированной воды.

2. 20%-ный раствор серной кислоты.

3. 10%-ный раствор едкого натра.

4. 0,01 н раствор йода (готовится перед анализом из 0,1 н раствора, приготовлен-ного из фиксанала).

5. 0,01 н раствор гипосульфита (готовится перед анализом из 0,1 н раствора, при-готовленного из фиксанала).

6. 1%-ный раствор крахмала (сначала растворяют крахмал в небольшом количестве холодной дистиллированной воды, а затем доливают остальное количество и доводят до кипения).

7. 0,3 н раствор едкого натра.

8. 5%-ный раствор сернокислого цинка.

Оборудование и аппаратура.

1. Прибор для определения кетоновых тел.

2. Электроплитки по ГОСТ 14919-83.

3. Микробюретки на 2 и 5 мл

4. Стеклянные палочки.

5. Стаканчики химические на 75 и 100 мл по ГОСТ 25336-82.

Материал для исследования.

Материалом служит безбелковый фильтрат крови.

Ход определения.

1. Готовят безбелковый фильтрат крови по методу Сомоджи. К 5 мл гепаринизи-рованной крови добавляют 25 мл дистиллированной воды, 10 мл 0,3 н раствора едкого натра и 10 мл 5%-ного раствора сернокислого цинка. Перемешивают стеклянной палоч-кой и через 30 минут центрифугируют при 3000 об /мин в течение 15 минут.

2. В приемный стаканчик наливают 20 мл дистиллированной воды, 2 мл 0,01 н раствора йода, 2 мл 10%-ного едкого натра и ставят под холодильник прибора, чтобы ко-нец его погрузился в жидкость.

3. В перегонную колбу вносят 10 мл фильтрата крови, 15 мл бихроматной смеси и 10-12 мл дистиллированной воды, где вместе кипятят 20 минут. Параллельно ставят кон-троль, где вместо фильтрата крови вносят 10 мл дистиллированной воды.

4. Колбу охлаждают, холодильник смывают небольшим количеством дистиллиро-ванной воды в приёмный стаканчик.

5. Приёмный стаканчик ставят в темное место на 15-20 минут, после чего быстро приливают (используя пипетку с отбитым концом) 2 мл 20%-ного раствора серной кисло-ты (жидкость окрашивается в жёлтый цвет), добавляют 2-3 капли 1%-ного раствора крах-мала (смесь приобретает сине-черный цвет) и титруют 0,01 н раствором гипосульфита до обесцвечивания.

Расчет результатов.

Содержание общего количества кетоновых тел рассчитывают по формуле:

Х г/л = (А – В)х0,25х0,01 , где

Х - количество кетоновых тел, г/л;

А - количество мл 0,01 н раствора гипосульфита, пошедшее на связывание свобод-ного йода в контрольной пробе;

В - количество мл 0,01 н раствора гипосульфита, затраченное на связывание сво-бодного йода в опытной пробе;

0,25 - 1 мл 0,01 н раствора йода связывает в данных условиях 0,25 мг ацетона;

ЗНАЧЕНИЕ. Повышение кетоновых тел в крови (кетонемия) выше 6 мг % являет-ся одним из основных признаков предклинической формы кетоза и наблюдается при вы-соко концентратном типе кормления, при недостатке сена и корнеплодов, а также при скармливании коровам кислых недоброкачественных кормов (силоса, сенажа, жома, бар-ды), содержащих большое количество кислоты.

Кетонемия может быть и при нарушениях рубцового пищеварения вследствие де-фицита в кормах микроэлементов, гиподинамии, а также при гипофункции щитовидной железы, вследствие усиленного распада жиров, белков и углеводов.

При клинической форме кетоза содержание кетоновых тел в крови значительно возрастает и увеличивается выделение их с мочой и молоком (выше 10 мг %), что улавли-вается качественной пробой Лестраде.

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2021