10. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ОБЩЕГО ХОЛЕСТЕРИНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

Принцип метода. Холестерол в присутствии уксусного ангидрида и смеси уксус-ной и серной кислот дает зеленое окрашивание, интенсивность окраски пропорциональна концентрации холестерина в сыворотке крови.

Реактивы.

1. Реактив Либермана-Бурхардта представляет собой смесь 1 части ледяной уксус-ной кислоты, 5 частей уксусного ангидрида и 1 части концентрированной серной кисло-ты, по Савалю. При приготовлении реактива колбу постоянно охлаждают и серную кис-лоту прибавляют очень медленно. Реактив хранят в холодильнике, в посуде из темного стекла.

2. Стандартный раствор холестерина (4,7 мМ/л). На аналитических весах отвеши-вают 180 мг холестерина, навеску растворяют в 2 мл хлороформа, количественно перено-сят в мерную колбу на 10 мл и доводят до метки абсолютным спиртом. Раствор хранят в склянке из темного стекла в холодильнике. 1 мл раствора содержит 1,8 мг холестерина. Раствор нестойкий.

3. Абсолютный этиловый спирт.

4. Хлороформ х.ч. или для наркоза.

Оборудование и аппаратура.

1. Фотоэлектроколориметр любой марки.

2. Аналитические весы по ГОСТ 24104-2001.

3. Холодильник бытовой по ГОСТ 16317.

4. Секундомер.

6. Пробирки Флоринского.

7. Мерные цилиндры на 10, 100 мл по ГОСТ 1770.

8. Унипипетки на 100, 250, 1000 мл и наконечники к ним.

9. Мерная колба на 10 мл по ГОСТ 1770.

10. Флаконы из темного стекла на 10, 100 мл

Материал для исследования.

Материалом для исследования служит негемолизированная сыворотка крови.

Ход определения.

К 2,5 мл реактива Либермана-Бурхарда осторожно, добавляют 0,1 мл сыворотки крови. Пробирку энергично встряхивают. Инкубируют при комнатной температуре 20 минут. Определяют оптическую плотность опытного раствора против контрольного на ФЭКе в кюветах объёмом 2,5 мл (ширина слоя 5 мм) при красном светофильтре (630-690 нм).

Расчет результатов.

Содержание холестерина определяют по калибровочному графику. Для построе-ния калибровочного графика берут ряд стандартных разведении:

п/п

Стандартный раствор

холестерина, мл

Реактив

Либермана-Бурхарда, мл

Концентрация

холестерина, мМ/л

   1.                                           0,05                                                             2,05                                       2,322

   2.                                           0,10                                                             2,00                                       4,644

   3.                                           0,15                                                             1,95                                       6,966

   4.                                           0,20                                                            1,90                                        9,288

ЗНАЧЕНИЕ. Содержание холестерина в сыворотке крови повышается при забо-левании печени, гломерулонефрите, хронической почечной недостаточности, гипотирео-зе, беременности, диабете; снижается - при гипопротеинемии, циррозе печени, недоста-точном питании, анемии, пневмонии, тяжелых острых заболеваниях

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2021