9. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ОБЩИХ ЛИПИДОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

Принцип метода. Продукты распада липидов после гидролиза сыворотки серной кислотой образуют с сульфофосфованилиновым реактивом окрашенное соединение, ин-тенсивность окраски пропорциональна содержанию общих липидов.

Реактивы.

1. Серная кислота концентрированная 98%-ная, по Савалю.

2. Фосфорная кислота (орто) 85%-ная.

3. Набор «Общие липиды».

4. Водный раствор ванилина. 0,914 г ванилина растворяют при нагревании на во-дяной бане в небольшом количестве воды, охлаждают, доводят объём до 100 мл. Раствор стабилен при хранении в склянке темного стекла при комнатной температуре.

5. Фосфованилиновая смесь. Готовят путем смешивания 367 мл концентрирован-ной ортофосфорной кислоты и 100 мл водного раствора ванилина. Содержание Н3РО4 в реактиве составляет 11,5 мМ/л, ванилина - 10 мМ/л.

6. Хлороформ х.ч. или ч.д.а.

7. Эталонный раствор липидов с содержание 4 г/л 400 мг триолеина количествен-но переносят в мерную колбу на 100 мл и доводят до метки хлороформом. Стандартный раствор (8 г/л) разводят хлороформом в 2 раза.

8. Спирт этиловый (ректификат) абсолютный.

9. Спирт метиловый.

Оборудование и аппаратура.

1. Фотоэлектроколориметр.

2. Водяная баня.

3. Весы аналитические по ГОСТ 24104-2001.

4. Секундомер.

5. Колбы мерные на 100 мл. по ГОСТ 1770.

6. Цилиндры мерные на 250, 500 мл по ГОСТ 1770.

7. Унипиптки на 50, 100 мкл и наконечники к ним.

8. Бюретки 25-50 мл с ценой деления 0,05-0,1 мл по ГОСТ 29251-91.

9. Флаконы темного стекла на 100 и 500 мл

10. Пробирки Флоринского.

11. Штатив для пробирок.

12. Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.

13. Холодильник бытовой по ГОСТ 16317.

Материал для исследования.

Материалом для исследования служит негемолизированная сыворотка крови.

Ход определения.

п/п

Реактивы, мл

Проба

Стандарт

Контроль

                Гидролиз сыворотки:

    1.                       Сыворотка                                                      0,05                              -                                -

 2.                         Стандартный раствор                                         -                               0,05                         -

    3.                      Вода дистиллированная                                   -                                 -                             0,05

    4.                      Серная кислота                                               1,0                                1,0                         1,0

Перемешивают, кипятят на водяной бане 15 минут, немедленно охлаждают.

Постановка цветной реакции:

  5.                   Гидролизат                                                            0,1                               0,1                          0,1

    6.                Фосфованилиновая смесь                                   2,5                                2,5                          2,5

Сульфофосфованилиновую смесь отмеряют в пробирки с уже внесенным гидроли-затом бюреткой, перемешивают и через 40-50 минут определяют оптическую плотность против контроля в кюветах с толщиной слоя 5 мм при длине волны 510-550 нм (зеленый светофильтр).

Расчет результатов.

Производят по формуле:

41

Coп.  - концентрация общих липидов опытной пробы;

Eoп.  - экстинкция опытной пробы;

Ест.   - экстинкция стандартной пробы.

ЗНАЧЕНИЕ. Гиперлипидемия наблюдается при сахарном диабете, гипотиреозе, нефротическом синдроме.

Снижение общих липидов наблюдают при желтухе, тяжёлых заболеваниях печени лимфогранулематозе, длительном голодании, при неполноценном кормлении, особенно белково-витаминной недостаточности, при дисбалансе аминокислот в рационе, алимен-тарной дистрофии, анемии.

 

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2021