5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ МОЧЕВИНЫ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

Принцип метода. Мочевина образует с диацетилмонооксимом в присутствие тио-семикарбазида в кислой среде красный комплекс, интенсивность окраски которого оп-ределяют фотометрически.

Реактивы.

1. Набор для определения мочевины

2. Рабочий раствор реактива готовят растворением 1 таблетки в 30 мл воды в мер-ной колбе на 50 мл при умеренном нагревании. После охлаждения доводят водой до мет-ки. Готовят перед применением.

3. Стандартный раствор содержанием мочевины 16,65 мМ/л разводят водой в 3 ра-за (5,55 мМ/л).

4. Раствор трихлоруксусной кислоты (ТХУ) 6,13 мМ/л 100 г ТХУ растворяют в мерной колбе на 1000 мл.

5. Раствор серной кислоты 277 мМ/л концентрированной серной кислоты (уд. вес 1,84) доводят водой до метки в мерной колбе на 250 мл.

6. Перед применением готовят рабочий раствор смешиванием рабочего раствора реактива с раствором серной кислоты в соотношении 1:1.

Оборудование и аппаратура.

1. Спектрофотометр.

2. Центрифуга.

3. Водяная баня.

4. Холодильник бытовой по ГОСТ 16317.

5. Весы технические.

6. Секундомер.

7. Пипетки на 100, 200, 1000 мкл

8. Штатив для пробирок.

9. Пробирки центрифужные.

10. Пробирки Флоринского.

11. Флаконы на 50, 100, 250, 1000 мл

12. Мерные колбы на 50, 100, 250, 500, 1000 мл по ГОСТ 1770.

Материал для исследования.

Материалом для исследования служит сыворотка крови, свободная от гемолиза.

Ход определения.

п/п

Реактивы, мл

Проба

Стандарт

Контроль

Депротеинизация

1.

Сыворотка

0,2

-

-

2.

Вода дистиллированная

-

-

0,2

3.

Стандарт

-

0,2

-

4.

10%-ный раствор ТХУ

1,0

1,0

1,0

Перемешивают и через 5 минут центрифугируют при 3000 об/мин. в течение 10 минут

Постановка реакции:

1.

Супернатант

0,1

0,1

0,1

2.

Рабочий раствор реактива

1,0

1,0

1,0

Пробирки закрывают крышечками из фольги и кипятят на водяной бане 10 минут, быстро охлаждают под струёй холодной воды и сразу измеряют оптическую плотность при 525 нм.

Расчет результатов.

45

где

Coп. - концентрация мочевины в сыворотке;

Eoп. - экстинкция опытной пробы;

Ест. - экстинкция стандартной пробы.

ЗНАЧЕНИЕ. Определение мочевины в плазме крови или моче позволяет судить об уровне метаболизма белков, дотации азотистых веществ в кормовом рационе и диа-гностике заболеваний печени и почек.

Повышение содержания мочевины в крови наблюдают при скармливании живот-ным кормов с избытком протеина, например, зелёных бобовых кормов, при нарушении функции почек, при сердечной недостаточности и обезвоживании организма (рвота, по-нос, повышенной диурез).

Снижение уровня мочевины наблюдают при длительном белковом недокорме, при нарушении мочевинообразовательной функции печени. Такое явление часто встречают у коров с дистрофией печени после переболевания их кетозом, при повышенной утилиза-ции белка (последняя стадия беременности, растущий молодняк до года и др.).

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2021