РАЗРАБОТКА, МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ И ПРИМЕНЕНИЕ АНТИБАКТЕРИАЛЬНОГО ПРЕПАРАТА «ФЕРТИЛИФИЛ С» ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ ОПЛОДОТВОРЯЕМОСТИ СВИНОМАТОК

Г. Ф. МЕДВЕДЕВ, Е. Л. МИКУЛИЧ УО «Белорусская государственная сельскохозяйственная академия» г. Горки, Могилевской области, Республика Беларусь, 213407

А. А. СИВАКОВ, А. И. ЕВСЕЕНКОВА

ГУО «Белорусская медицинская академия последипломного образования» г. Минск, Республика Беларусь, 220013

(Поступила в редакцию 01.02.2014)

Введение. Состояние репродуктивной системы свиноматок является важнейшим фактором, определяющим уровень их репродуктивной способности. Зависит в значительной мере от характера и продолжительности течения родов и послеродового периода. Для достижения высокого уровня оплодотворяемости (90 % или более) и реализации потенциально высоких репродуктивных качеств свиноматок (не ниже 10,5-11,0 живых поросят на опорос) необходимо осуществлять контроль послеродового периода и своевременно выполнять соответствующие терапевтические мероприятия.

В свиноводческих предприятиях нередко обращают внимание на высокую частоту вагинальных истечений, которые являются клиническим признаком бактериальной генитальной инфекции. Обнаружение их зависит от ряда факторов, включая условия содержания и приспособляемость свиней. Поэтому во многих случаях проявляются как наиболее общая форма инфекционного бесплодия у свиноматок [1-4].

Следует учитывать, что присутствие бактериальной инфекции в матке может незначительно влиять на проявление половых циклов, но в начале беременности приводит к проявлению регулярных или нерегулярных половых циклов, а в поздние стадии - к аборту [5].

Так как выделения из репродуктивного тракта могут быть связаны с послеродовым периодом, воспалительными процессами в мочевых путях и половых органах, половым циклом, осеменением, необходимо четкая их дифференциация [5]. Выделения большого объема (более 500 мл) кремового цвета указывают на развитие эндометрита. Выделение клейкой слизи на 15-21-й день после осеменения может быть предвестником повторения половой охоты [3]. При заболевании мочевых путей объем выделений, как и при метрите, обычно более 100 мл, тогда, как при вагините и цервиците, количество их значительно меньше. Секреты белого, зеленоватого или другого цвета объемом более 5 мл и неприятного запаха считают патологическими [6].

Инфицирование репродуктивного тракта возможно не только во время опороса и в послеродовой период, но и в период осеменения. Это может быть связано с присутствием микроорганизмов в свежеполученной сперме хряков [7-11].

Для восстановления нормального состояния маткиу свиноматок может возникнуть необходимость проведения лечебных и профилактических мероприятий вскоре после опоросов или после повторения половой охоты. При этом важно подобрать эффективный препарат для включения в разбавитель спермы и для непосредственного введения в матку животных.

Цель работы - разработать методы контроля и определить эффективность антибактериального препарата Фертилифил С для повышения оплодотворяемости свиноматок с патологией родов и послеродового периода.

Материал и методика исследований. Препарат «Фертилифил С» разработан на кафедре биотехнологии и ветеринарной медицины УО БГСХА, а методы контроля его состава - в научно-исследователь-ской лаборатории ГУО «Белорусская медицинская академия последипломного образования» (БелМАПО).

Определение активных фармацевтических ингредиентов в препарате выполняли методом жидкостной хромато-масс-спектрометрии.

Аналитическая система «Agilent 1200/6410» с дегазатором, системой градиентного элюирования, устройством автоматического ввода пробы, термостатом колонок и масс-спектрометрическим детектором. Колонка ZORBAX SB C18 2,1x30 мм, размером частиц 3,5 мкм. Подвижная фаза ацетонитрил - 5%-ная (об./об.) муравьиная кислота, режим градиентного элюирования. В качестве стандартных образцов использовали химически чистые субстанции антибиотических веществ, входящих в состав препарата. Растворы сравнения и испытуемые растворы готовили путем растворения в воде. Приготовленные растворы хранили в холодильнике при температуре 3-8 °С. Срок хранения - 1 сутки.

Бактериальная обсемененность матки свиноматок и спермы хряков изучена в двух сельскохозяйственных организациях.

В ЗАО «Агрокомбинат «Заря» Могилевского района для бактериологического исследования использовано содержимое матки 6 свиноматок, в том числе трех повторивших половую охоту и трех - через 36 дней после опороса. В ОАО СГЦ «Вихра» бактериологическое исследование проводилось дважды. Сначала пробы взяты от 6 свиноматок с патологией родови послеродового периода и 2 пробы неразбавленной спермы хряков. В последующем исследовано еще 6 проб из матки свиноматок и 4 пробы разбавленной спермы.

Выделение и идентификацию культур микроорганизмов осуществляли по общепринятым методикамв лаборатории кафедры эпидемиологии и микробиологии БелМАПО и ГУ «Минский городской центр гигиены и эпидемиологии».

Определение чувствительности микроорганизмов к фертилифил С в концентрациях 1 : 10, 1 : 100 и 1 : 1000 проводилось методом серийных разведений на среде Мюллер-Хинтонагар.

Для изучения эффективности Фертилифила С в качестве средства для повышения оплодотворяемости и репродуктивных качеств свиноматок, повторяющих половую охоту, был проведен опыт в ЗАО «Агрокомбинат «Заря». В период опоросов сформировали группу свиноматок (n=15) и молодых свинок (n=5) крупной белой породы и ланд-рас. У 12 взрослых свиноматок выявлялась патология во время родов и в послеродовой период, а три свиноматки после отъема поросят и осеменения повторили охоту. Молодых свинок осеменяли первый раз. Всем двадцати животным за 2-4 часа до осеменения в матку ввели-Фертилифил С.

Препарат растворяли в 80-100 мл стерильной очищенной подогретой до 40-45 °С воды, внесенной в стерильный флакон прибора ПОС-5. Показатели репродуктивной способности определены в два следующих друг за другом репродуктивных цикла: до и после применения препарата.

Изучение эффективности Фертилифила С в качестве терапевтического и профилактического средства с целью повышения репродуктивных качеств свиноматок с патологией родов и послеродового периода проведено вОАО СГЦ «Вихра».

Впериод опоросов наблюдали за течением родов и послеродового периода. Регистрировали животных, у которых роды были патологическими или длились дольше обычного, и у них после родов выявлялись воспалительные процессы половых органов и вымени. Всем таким животным (n=82) в 1-2-й день после родов вводили в матку одну дозу препарата. Осеменяли животных спермой хряков, разбавленной ГХЦС разбавителем в такой же дозе, как и всех других свиноматок без патологии, в период опороса и послеродовой период.

Математическая обработка данных проведена на ПК с использованием программы «Excel».

Результаты исследований и их обсуждение. В состав «Фертили-фила С» включены: бензилпенициллин натрия, гентамицина сульфат, линкомицина гидрохлорид, неомицина сульфат, спектиномицина гидрохлорид и стрептомицина сульфат.

Обычно для исследования препаратов с одним действующим веществом пригодны аналитические методы, применяемые для анализа субстанций, которые описаны в ГФ РБ, EuPh и других фармакопеях. В случае «Фертилифила С» задача оказалась более сложной. Препарат содержит шесть субстанций. Кроме того, субстанция гентамицина не является индивидуальным веществом, а представляет собой смесь из 5 веществ. В такой ситуации подход с использованием фармакопейных методик выглядел нецелесообразным, поскольку предполагал использование индивидуального аналитического метода определения на каждую субстанцию, а близкие физико-химические свойства субстанций не позволяли надеяться на то, что фармакопейные методы будут иметь приемлемую специфичность.

Нами был разработан простой и специфичный метод, позволяющий определять все действующие вещества, входящие в состав препарата, в одном анализе. Метрологические характеристики разработанной методики представлены в табл. 1.

Т а б л и ц а 1. Предварительные нормативы внутреннего контроля

140

Растворы сравнения готовили вместе с испытуемыми растворами и поочередно подвергали хроматографическому анализу не менее 5 раз в режиме градиентного элюирования.

141

Аналитические сигналы регистрировали при помощи масс-спектрометрического детектора с источником ионизации электроспрей (ESI) в режиме SIM (таблица 2). Температура осушающего газа 300 °C, поток - 7 л/мин, распылитель - 30 psig, напряжение капилляра - +2000 V, время задержки - 100 мсек.

Т а б л и ц а 2. Параметры регистрации аналитических сигналов

142

Обработку ионных хроматограмм и интегрирование площадей пиков выполняли при помощи программы «MassHunter». Количественный расчет проводили методом внешнего стандарта.

Для подтверждения подлинности активных фармацевтических ингредиентов раствор сравнения и испытуемый раствор анализировали в условиях количественного определения в режиме MRM. Масс-спектры ингредиентов в испытуемом растворе должны совпадать со спектрами ингредиентов из раствора сравнения. Настройки масс-спектрометра, родительские и дочерние ионы представлены в табл. 3.

Т а б л и ц а 3. Настройки масс-спектрометра, родительские и дочерние ионы

143

Стабильность препарата подтверждена испытаниями образцов двух экспериментальных серий. Содержание действующих веществ находилось в пределах, установленных техническими условиями. Образцы выдержали экспериментальный срок хранения, что соответствует заявленному сроку хранения - 2 года. Результаты испытаний по стабильности препарата «Фертилифил С» серии № 12042011, изготовленной 12.04.2011 г., приведены в табл. 4.

Т а б л и ц а 4. Результаты испытаний стабильности препарата «Фертилифил С»

144

В «Агрокомбинате «Заря» в содержимом матки свиноматок с патологией родов и послеродового периода или повторяющих половую охоту основными микроорганизмами были Staph. epidermidis (50 %) и E. Coli (37,5 %). Лишь у одной свиноматки, повторившей половую охоту, микроорганизмы в пробе не были выявлены.

В СГЦ «Вихра» из содержимого матки шести свиноматок выделяли E. coli и, кроме того, у двух животных Enterococcusfaecalis. Из свеже-полученной спермы хряков выделяли Staph. saprophyticus.

При повторном исследовании (в ГУ «Минский городской центр гигиены и эпидемиологии») от свиноматок выделены Enterococcusfaecalis, Escherihiacoli, Kocuriakristinae, Staph. warneri, Pasteurellaaerogenes, Bud-viciaaquatica, Staph. chromogenes, Str. suis, Staph. hyicus. Из 4 проб разбавленной спермы хряков только в одной пробе выделена со среды обогащения Brevundimonasdiminuta/ vesicularis.

Результаты этих исследований указывают на необходимость более тщательного бактериологического контроля используемой для осеменения свиноматок спермы и репродуктивного тракта как в послеродовой период, так и во время осеменения.

Во всех опытах анаэробные и факультативно анаэробные микроорганизмы оказались чувствительными к Фертилифилу С в концентрациях 1:100 и 1:1000 и 1:10000. Только один штамм Staph. Epidermidis оказался резистентным к препарату в концентрации 1:10000.

Данные о применении препарата за 2-4 ч до осеменения свиноматкам с патологией во время родов и послеродовой период или повторившим половую охоту приведены в таблицах 5 и 6.

Т а б л и ц а 5. Репродуктивные качества подопытных свиноматок в репродуктивный цикл до применения препарата (n = 15)

145

Из данных табл. 5 видно, что до начала опыта оплодотворилось свиноматок 12 из 15, или 80 %, а три свиноматки были оплодотворены во вторую половую охоту. Продолжительность беременности для 12 свиноматок в среднем составила 115,4 дней, и на одну свиноматку получено 12,08 поросенка, всего 145, из них мертвых - 13 (8,9 %).

Высокий процент мертворожденных поросят обусловлен тяжестью родового процесса или длительностью их течения. У 10 свиноматок наблюдалась патология время родов и синдром вагинальных истечений или ММА (метрит, мастит, агалактия). Пять животных повторили половую охоту. Всем им в первую половую охоту после отъема поросят или после повторения охоты, а также пяти свинкам за 2-4 часа до осеменения был введен в матку Фертилифил С.

Репродуктивная способность оплодотворившихся 17 животных показана в табл. 6.

Т а б л и ц а 6. Репродуктивные качества подопытных свиноматок после применения Фертилифила С за 2-4 ч до осеменения

146

Из 15 взрослых свиноматок оплодотворились после первого осеменения 12 (80 %). Следовательно, в результате введения препарата были предупреждены осложнения патологии родов и послеродового периода, и оплодотворяемость животных не снизилась. Все свинки оплодотворились в первую охоту. В среднем оплодотворяемость в группе после применения препарата составила 85 %. Это достаточно высокий показатель для такой категории животных.

Продолжительность супоросности у них не изменилась и это указывает на нормальное состояние матки во время беременности. Число поросят в помете в среднем по всем животным было несколько ниже -11,5, но следует учитывать, что среди подопытных животных было 5 свиноматок первого опороса. Для взрослых маток этот показатель составил 12,3 поросенка. Всего родилось 195 поросят. Мертворожденные были в 7 опоросах (35 %), всего их 18 (9,2 %). На частоту мертворождаемости сильно повлиял результат одного опороса, где в помете родилось 17 поросят, в т. ч. 6 мертвых.

Полученные данные позволяют утверждать, что применение Фер-тилифила С до осеменения свиноматкам, у которых в анамнезе имеется патология родов и послеродового периода или повторение половой охоты, способствует более высокой оплодотворяемости и обеспечивает удовлетворительный показатель по многоплодию.

В КУСП СГЦ «Вихра» вопытную группу было включено 82 свиноматки с патологией родов и послеродового периода. Результаты применения Фертилифила С этим животным показаны в табл. 7.

Т а б л и ц а 7. Репродуктивная способность свиноматок с патологией родов и послеродового периода

147

В этой группе животных высокий процент плодотворных первых осеменений (90,2 %), поэтому индекс осеменения оказался минимальным (1,10, допускается 1,20). Удовлетворительным был и показатель многоплодия (10,2). Выбраковано 14 свиноматок (17,0 %).

Для категории животных с патологией родов и послеродового периода достигнутые показатели достаточно приемлемые не только для данной сельскохозяйственной организации, но и других хозяйств.

Заключение. При бактериологическом исследовании в содержимом матки свиноматок с патологией родов и послеродового периода или повторивших половую охоту обнаруживались микроорганизмы. Видовой состав и разнообразие выделяемых культур зависели от хозяйства и лаборатории.

В «Агрокомбинате «Заря» чаще выделялись Staph. epidermidis (50 %) и E. Coli (37,5 %). Лишь у одной свиноматки, повторившей половую охоту, микроорганизмы в пробе не были выявлены. В СГЦ «Вихра» выделяли E. coli и, кроме того, у двух животных - Enterococcusfaecalis. В свежеполученной сперме хряков выявлен Staph. saprophyticus.

При втором исследовании из проб от свиноматок СГЦ «Вихра» выделены Enterococcusfaecalis, E.coli, Kocurlakristlnae, Staph. warneri, Pas-teurellaaerogenes, Budviciaaquatica, Staph. chromogenes, Str. suis, Staph. hyicus. Из 4 проб разбавленной спермы хряков только в одной пробе выделена со среды обогащения Brevundimonasdiminuta/ vesicularis.

Из всех исследованных 18 животных лишь у одной свиноматки, повторившей половую охоту, микроорганизмы не были выявлены.

Все анаэробные и факультативно анаэробные микроорганизмы оказались чувствительными к Фертилифилу С в концентрациях 1:100 и 1:1000.

Применение Фертилифила С до осеменения свиноматкам, у которых в анамнезе имелась патология родов и послеродового периода или повторение половой охоты, способствовало более высокой оплодотво-ряемости и обеспечивало удовлетворительный показатель по многоплодию.

Однократное введение Фертилифила С в матку свиноматкам с патологией родов в 1-2-й день предупреждало развитие серьезных осложнений в послеродовой период и это способствовало наступлению супоросности у 90,2 % животных.

ЛИТЕРАТУРА

1. Профилактика и лечение эндометритов у коров и свиноматок препаратами на основе диоксидина / О. П. Ивашкевич [и др.] // Современные проблемы ветеринарного акушерства и биотехнологии воспроизведения животных. - Воронеж: Истоки, 2012. -С. 205-215.

2. Vulvar discharge syndrome in loosely housed Finnish pigs: prevalence and evaluation of vaginoscopy, bacteriology and cytology / J. Oravainen [et al] // Reproduction domestic animals, 2008. - V. 43. - P. 42.

3. Veterinary Reproduction & Obstetrics. Seventh Edition / Geoffrey H. Arthur [at al] // W. B. Saunders Comp. Ltd., 1996. - 726 р.

4. Arthur's Veterinary Reproduction and Obstetrics. Eighth Edition / Edited David E. Noakes, Timothy J. Parkinson, Gary С. W. England // W. B. Saunders Comp. Ltd., 2001. -868 р. (Reprinted 2007).

5. M e r e d i t h, M. J. Non-specific bacterial infections of the genital tract in female pigs / M. J. Meredith // Pig Vet J, 1991. - V. 27. - P. 110

6. Veterinary Reproduction and Obstetrics. Ninth Edition / Edited by David E. Noakes, Timothy J. Parkinson, Gary C.W. // W.B. Saunders Elsevier. Ltd. - England, 2009. - 950 р.

7. П е й с а к, З. Болезни свиней. Перевод с польского / Зигмунд Пейсак // ЗАО «Консул»», 2008. - Издание на русском языке. Оформление ОАО «Брестскаятипогра-фия», 2008. - 406 с.

8. М е д в е д е в, Г. Ф. Влияние антибиотических средств в разбавителе для спермы хряков на репродуктивные качества свиноматок / Г. Ф. Медведев, Н. Е. Семенченко, Н. И. Гавриченко // Животноводство и ветеринарная медицина, 2013. - № 1 (8). - С. 44-49.

9. Klopfenstein С., Farmer С., Martineau G.P. / In: Straw B, Zimmermann JJ, D'Allaire S, Taylor Dj (ed) Diseases of swine, 9th edit. Blackwell Publishing, Oxford. - P. 57-85.

10. W r a t h a l l, A. E. An approach to breeding problems in the sow / A. E. Wrathall // Veterinary Record, 1971. - V. 89. - № 3. - P. 61-71.

11. М е д в е д е в, Г. Ф. Использование антибактериального препарата для повышения репродуктивной способности свиноматок с патологией родов и послеродового периода / Г. Ф. Медведев, Е. Л. Микулич, А. Г. Хоченкова // Животноводство и ветеринарная медицина. - Горки, 2013. - №2 (9). - С. 44-48.

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2021