4.4.6 Определение фагоцитарной активности клеток крови

Принцип метода. Метод основан на явлении фагоцитоза – реакции организма, проявляющейся в способности клеток-фагоцитов захватывать и переваривать чужеродные микроорганизмы.

Реактивы: 1. Стабилизатор крови.

2. Взвесь суточной микробной культуры (0,5-1 млрд.м.к./мл) в физрастворе.

Ход определения. В стерильные центрифужные пробирки наливают по 0,5 мл стабилизированной исследуемой крови и 0,5 мл микробной взвеси, содержащей по оптическому стандарту мутности 0,5-1 млрд. микробных клеток в 1 мл.

В зависимости от задач и целей исследований в работе могут быть ис-пользованы различные виды живых или убитых микроорганизмов: ки-шечная палочка, стафилококк, стрептококк и т.п.

Пробирку с приготовленной смесью осторожно встряхивают, поме-щают на 30 мин в термостат или водяную баню, отрегулированную на 37°С. По истечении указанного срока из смеси делают 3-5 мазков (по спо-собу приготовления мазков крови), фиксируют метиловым спиртом и окрашивают по Романовскому-Гимзе.

Расчет: Фагоцитарная активность лейкоцитов. Фагоцитарная ак-тивность выражается процентом активных лейкоцитов (фагоцитов) в об-щем числе подсчитанных нейтрофильных лейкоцитов. Из числа подсчи-танных 100 нейтрофилов выводится их процентное соотношение, т. е. лей-кограмма. По найденным 100 фагоцитам определяют число клеток, участ-вующих в фагоцитозе (захвативших определенное количество микробов). Полученный результат выражают в процентах.

Фагоцитарный индекс определяется средним числом фагоцитиро-ванных микробов, приходящихся на один активный лейкоцит. Этот пока-затель характеризует интенсивность фагоцитоза. Для определения фагоци-тарного индекса используют те же мазки крови, по которым определялась фагоцитарная активность лейкоцитов. В препаратах, приготовленных опи-санным выше способом, подсчитывают не менее 100 лейкоцитов и количе-ство поглощенных ими микробных тел. Вычисляется фагоцитарный индекс путем деления числа фагоцитированных бактерий на число активных лей-коцитов.

Фагоцитарное число является дополнительным показателем, харак-теризующим как агрессивность нейтрофилов, так и их активность. Вычис-ляется фагоцитарное число путем деления числа фагоцитированных бакте-рий на общее число подсчитанных лейкоцитов.

Фагоцитарная емкость определяется количеством микробных кле-ток, фагоцитированных лейкоцитами в 1 мм3 крови. Этот показатель ха-рактеризует общую фагоцитарную активность крови и зависит от количе-ства лейкоцитов, содержащихся в I мм3. Некоторые авторы этот показатель называют фагоцитарной интенсивностью, абсолютным фагоцитозом или общим фагоцитозом. Вычисляется фагоцитарная емкость умножением фа-гоцитарного числа на количество лейкоцитов в 1 мм3 крови.

При высокой функциональной активности фагоцитов процесс перева-ривания захваченных микробов начинается немедленно, и уже в первые 30 мин. отмечают не только визуальное изменение микробной клетки, но и преобразование некоторых нейтрофильных лейкоцитов (набухание, изме-нение очертания ядра, слабое прокрашивание и т.д.), т.е. появляются при-знаки, характеризующие автолиз (самораспад) и начало деструкции нейтрофила. В течение 2 ч фагоцитарная реакция в норме заканчивается перевариванием захваченных микробов и разрушением полиморфноядер-ных фагоцитов.

Для количественной оценки переваривающей способности фагоцитов введено понятие индекса завершенности фагоцитоза (ИЗФ), для этого определяют полусумму отношений фагоцитарной активности нейтрофи-лов, полученной через 30 мин. инкубации к фагоцитарной активности нейтрофилов, полученной через 2 ч, и отношения фагоцитарных индексов в эти же сроки. Принято считать, что при ИЗФ 1 и больше реакция счита-ется завершенной, а меньше 1 – незавершенной.

У новорожденных животных при значительных различиях в содержа-нии лейкоцитов целесообразно оценивать фагоцитарную активность клеток крови по элиминирующей их способности (ЭСК).

Под ЭСК понимается способность клеток, содержащихся в 1 мкл кро-ви, фагоцитировать антигенно-чужеродные частицы в течение 30 мин. и выражается количеством поглощенных за этот срок частиц (микробов и др.).

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2021