4.4.5. Определение бактерицидной активности сыворотки крови (БАСК)

Принцип нефелометрического метода определения БАСК заключается в том, что микробы в течение определенного времени подвергаются воз-действию сыворотки при 37°С, при этом чем слабее бактерицидное дей-ствие сыворотки, тем сильнее размножаются микробы и тем больше мут-ность взвеси.

Реактивы. Оптическую плотность (Е) определяют на ФЭКа с исполь-зованием зеленого светофильтра. Контролем (в параллельном пучке света) служит дистиллированная вода (кювета 3 мм).

Для постановки реакции используется разлитый в стерильные про-бирки МПБ в объеме 4,5 мл.

В качестве тест-культуры используют 24-часовую бульонную культу-ру кишечной палочки или золотистого стафилококка.

Подготовка микробной культуры: смыв суточной агаровой культуры доводится до 2 млрд. м. клеток в 1 мл стерильного физраствора на ФЭКе (по красной шкале барабана, экстинкция должна быть 0,3). Затем 0,01 мл (1 капля) 2 млрд. микробной взвеси вносится в 4,5 мл МПБ  и оставляется в термостате на 24 ч (суточная бульонная культура). Как в опыте, так и в контроле в пробирки вносится по 0,1 мл суточной бульонной культуры.

Ход определения. В пробирки с 4,5 мл стерильного МПБ добавляется по 1 мл испытуемой сыворотки. Затем во все пробирки вносится по 0,1 мл суточной бульонной культуры кишечной палочки или золотистого стафи-лококка. Контролем служит пробирка с МПБ, но без сыворотки. Содер-жимое пробирок тщательно перемешивается и стерильной пипеткой от каждой пробы отбирается по 2 мл для измерения оптической плотности. Смесь, оставшуюся в пробирках (МПБ + сыворотка + культура микроба), помещается в термостат при 37ºС на 3 ч. Таким образом, получаются 2 показателя – первый характеризует оптическую плотность МПБ с культу-рой и сывороткой сразу после смешивания и второй – оптическую плот-ность той же смеси после 3 ч инкубации в термостате.

Расчет. В пробирках с добавлением активной сыворотки крови опти-ческая плотность остается на прежнем уровне или снижается. При слабой БАСК оптическая плотность среды резко возрастает за счет накопления в ней размножающихся микробов. В контрольных пробирках оптическая плотность может возрастать в 3 и более раз.

Удобнее выражать БАСК в единицах угнетения роста и развития мик-робов, а не в показателях нарастания оптической плотности:

19

где

БАСК - усл. ед.

Еоп0   - оптическая плотность опытной пробы до инкубации;

Еоп3     - оптическая плотность опытной пробы через 3 часа инкубации;

Ек0         - оптическая плотность контрольной пробы до инкубации;

Ек3      - оптическая плотность контрольной пробы через 3 часа инкуба-ции.

В пробирках, в которые добавляется сыворотка, происходит задерж-ка роста микроорганизмов и оптическая плотность нарастает тем меньше, чем сильнее выражено это действие.

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2021