4.4.4. Определение активности b-лизинов в сыворотке крови

Принцип метода: метод основан на способности b-лизинов лизиро-вать Bacillus subtilis.

Реактивы: 1. Сахароза 0,75М, рН 6,2.

2. Культура Bacillus subtilis, штамм № 83. 18-20-часовую агаровую культуру смывают со скошенного агара 0,75М раствором сахарозы, гото-вят микробную взвесь и стандартизируют на ФЭК-М с зеленым светофиль-тром в 3 мм кювете против сахарозы до оптической плотности 0,500 еди-ницы шкалы правого барабана.

Ход определения. К 0,2 мл сыворотки (опыт Д1 и Д2) и к 0,2 мл изото-нического раствора натрия хлорида (контроль К1 и К2) добавляют 0,4 мл приготовленной микробной взвеси. Смеси Дз и К2 помещают на 2 ч в тер-мостат при 37ºС. Д1 и К1 хранят при комнатной температуре. Для удобства последующего колориметрирования ко всем реакционным смесям (после инкубации в термостате) добавляют 0,6 мл сахарозы, доводя общий объем до 1,2 мл. Оптическую плотность опытных образцов (Д1 и Д2) замеряют против исследуемой сыворотки (0,2 мл) и сахарозы (1 мл), а контрольных (К1 и К2) только против сахарозы (1,2 мл).

Схема опыта:

К1 – 0,2 мл NaCl + 0,4 мл культуры + 0,6 мл сахарозы

Д1 – 0,2 мл сыворотки + 0,4 мл культуры + 0,6 мл сахарозы

К2 – 0,2 мл NaCl + 0,4 мл культуры + 0,6 мл сахарозы + термостат

Д2 – 0,2 мл сыворотки + 0,4 мл культуры + 0,6 мл сахарозы + термо-стат

Расчет. Результаты исследований учитывают путем сопоставления исходного и конечного показателя оптической плотности смеси в опыте и в контроле. Принимая во внимание, что в контрольной пробе оптическая плотность взвеси, как правило, за 2 ч инкубации в термостате существенно не меняется, расчет активности -лизинов проводят по данным только опытных образцов, используя формулу:

Х = 100 (Д1 - Д2) / Д1, где

X – активность бета-лизинов, % лизиса;

Д1 – оптическая плотность опытных проб до инкубации;

Д2 – оптическая плотность опытных проб после инкубации.

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2021