ВВЕДЕНИЕ

В обобщенном понимании слово "вирус" означает особую категорию инфекционных и неинфекционных частиц - вирионов, простейшие из которых состоят из молекулы нуклеиновой кислоты, окруженной белковой оболочкой. Вирионы сложных вирусов содержат также липиды и углеводы. Все вирусы отличаются от других объектов живой природы тем, что они обладают свойством живого только в потенциале и способны к самовоспроизведению при наличии соответствующих биосистем в форме чувствительных клеток.

Электронно-микроскопический метод исследований играет важнейшую роль в выявлении и идентификации различных вирусов и используется как вспомогательный при диагностике многих вирусных заболеваний. Основные преимущества электронно-микроскопической диагностики вирусных инфекций заключаются в потенциальной возможности выявления самых различных вирусов, которые могут присутствовать в исследуемом материале, а также в наглядности и убедительности позитивных результатов, регистрируемых в виде прямого изображения анализируемого объекта. Характерная морфология* папова-, адено-, рео-вирусов, а также вирусов оспы и герпесвирусов обеспечивает их идентификацию даже при наличии в препаратах единичных вирусных частиц. Выявление орто- и парамиксовирусов, рабдо- и ретровирусов облегчается за счет относительно крупных размеров их вирионов и наличия спирального нуклеокапсида. Идентификация более мелких вирусов: пар-во,- пикорна или тогавирусов возможна лишь при достаточно высокой концентрации частиц и их групповом расположении. Предварительная идентификация вируса, то есть определение его принадлежности к семейству (роду), способствует выбору оптимальной методологии дальнейших исследований. Во многих случаях, однако, данные электронной микроскопии оказываются вполне достаточными для выявления этиологии вирусного заболевания [Королев М.Б., 1982; England J. J., 1978; Madeley C.R., 1996].

Электронная микроскопия остается наиболее оптимальным, а иногда и единственным методом уверенной индикации аномальной формы вирионов, а также биоагентов в случае ассоциированных (смешанных) инфекций, категория которых типична для промышленного животноводства. Ассоциированные инфекции вызываются двумя и более возбудителями: вирус-вирус, вирус-бактерии, вирус-микоплазмы, вирус-риккетсии. Известно, что в клетку могут проникать два и более гетерологичных вируса, и в одной культуре клеток возможно одновременное размножение нескольких различных микроорганизмов (до 5-7), в том числе протозоа и микоплазм. Это в целом затрудняет диагностику болезни, профилактику и лечение [Быковский А.Ф., 1982; Макаров В.В. и др., 2000]. Кроме того, к преимуществам метода относится то, что результаты исследований могут быть получены через час после поступления образцов на исследования [Bergmann V., 1983; Ueda М. et al., 1995]. В отличие от других методов быстрой диагностики (иммунофлюоресценция, радиоиммунный и иммуноферментный анализы) прямая электронная микроскопия не ограничена специфичностью тест-объектов.

* Морфология — учение о формах (по-гречески «морфе» - форма, «логос» - слово, учение).

Позитивной стороной электронной микроскопии является также возможность измерения всех структурных параметров вирусных частиц на микрофотографиях. Для решения практических задач вирусологии, наряду с методом прямой электронной микроскопии, используется также метод иммуноэлек-тронной микроскопии (ИЭМ). Преимущества ИЭМ вытекают из её большей, по сравнению с методом прямой электронной микроскопии при обычной методике негативного контрастирования, чувствительностью (в среднем в 100 раз), что позволяет осуществлять индикацию вирусов при их относительно низких концентрациях в исследуемом материале. Особое значение имеет электронная микроскопия при выявлении биоагентов невирусного происхождения (бактерии, микоплазмы, грибы, хламидии и др.).

Основным источником информации при изучении строения различных вирусов является электронная микроскопия. Реализация возможностей современного электронного микроскопа высокой разрешающей способности предусматривает выполнение ряда условий, к которым, наряду с постоянным совершенствованием методов очистки препаратов вируса, возможностью отказа от метода ультрацентрифугирования при подготовке препаратов, относятся получение поддерживающих пленок-подложек с заранее заданными свойствами, способы нанесения и контрастирования вирусных препаратов.

При исследовании вирусов с идентичной морфологией вирионов метод прямой электронно-микроскопической идентификации позволяет поставить предположительное заключение. Относительно низкие концентрации вирусных частиц в анализируемых препаратах вызывают необходимость их концентрирования различными методами, что требует наличия соответствующего оборудования в виде высокоскоростных ультрацентрифуг и увеличения объёмов исследуемого материала. Дополнительное концентрирование методом высокоскоростного центрифугирования сопровождается осаждением вирионов вместе с большей частью белка, что ухудшает качество электронно-микроскопических препаратов и снижает эффективность выявления вирусных частиц. Исключение этапа ультрацентрифугирования из процесса подготовки препаратов для электронной микроскопии открывает перспективы более широкого внедрения данйого метода при диагностике заболеваний животных [Королев М. В., 1980; Turcu D. et al., 1994].

Настоящая работа представляет собой попытку обобщения большого количества наблюдений и экспериментальных исследований, касающихся структурно-функциональных аспектов строения вирионов вирусов животных, а также имеет целью информировать исследователей о возможностях электронной микроскопии в плане выявления патогенных и условно-патогенных микроорганизмов в клинических материалах от различных животных.

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2020