Вернуться к содержанию >>>

Методы очистки культур вибрионов. Часто при исследовании материала, особенно препуциальной слизи и спермы от быков-производителей, не удается сразу выделить чистую культуру вибрионов. В таких случаях прибегают к некоторым методам ее очистки.

1. При загрязнении культуры неподвижной или малоподвижной микрофлорой хорошие результаты дает метод пастеровских пипеток. В три-четыре пастеровские пипетки набирают (на половину ее длины) СЖН среду, в которой количество новобиоцина доведено до 20 мкг/мл, а затем подсасывают до расширения пипетки смешанную культуру вибрионов. Нижний конец пипетки запаивают и ставят их в высокий стакан, на дно которого положен кусочек ваты, помещают в вакуумный термостат, где создаются соответствующие условия для выращивания. При необходимости верхний конец пипетки можно залить парафином и использовать обычный термостат. Пипетки просматривают визуально ежедневно 3—5 дней, при появлении нежного тонкого голубоватого диска (кольца) ватную пробку пипетки извлекают и пастеровской пипеткой пересевают на пробирки с СЖН средой или ПЖА.

2. При загрязнении культуры вибрионов подвижной микрофлорой типа Е. coli очистку проводят методом рассева на чашках Петри. Для этой цели берут три чашки Петри с твердой СЖН средой, в которую добавляют при +45 10% дефибринированной крови коровы или 10% амннопептида-2. Pia одну из чашек с СЖН средой наносят по капле смешанной культуры, а затем шпателем распределяют культуру по поверхности агара, после чего этим же шпателем засевают вторую и третью. Чашки ставят в микроанаэростат или вакуумный термостат, откачивают воздух до 200 мм рт. ст., а затем добавляют углекислый газ до отметки 180 мм рт. ст., что соответствует 10—15% углекислого газа. Посевы просматривают при помощи лупы ХЗ—10 через трое, шесть и девять суток. Мелкие серовато-голубые с ровными краями колонии или инееподобный налет отмечают карандашом, делают мазок, окрашивают и микроскопируют при увеличении Х900. При наличии вибрионов колонии пересевают на СЖН среду и ПЖА.

3. Смешанную культуру с подвижной микрофлорой можно очистить, пользуясь мембранными фильтрами (Г. Плюмер и др., 1962; Я. А. Крылов, 1967; П. А. Волосков и др., 1968). Для этой цели монтируют фильтр Зейтца с колбой Бунзена. Стерилизуют прибор авто- клавированием. Два мембранных фильтра № 5 и № 2 кипятят в дистиллированной воде дважды по 15 мин. В боксе мембранные фильтры, сначала № 5, а затем № 2 и № 5, помещают матовой стороной вверх на сетку прибора, после чего прибор завинчивают. Смешанную культуру, выросшую на ПЖА, наполовину разводят физиологическим раствором, выливают в цилиндр прибора, а затем насосом постепенно откачивают воздух. Фильтрат из колбы высевают на три-четыре пробирки с СЖН средой, три-четыре пробирки с ПЖА и проводят выращивание.

4. Для очистки смешанной культуры можно пользоваться методом фракционного центрифугирования (Н. Савов, 1967) материала при 3 тыс. об/мин в течение 10 мин. Затем надосадочную жидкость отсасывают и вновь центрифугируют при 6 тыс. об/мин 20 мин. Пастеровской пипеткой на расстоянии 1 —1,5 см от дна центрифужной пробирки набирают жидкость и производят посев на три-четыре пробирки с СЖН средой и три-четыре пробирки с ПЖА. Можно центрифугат высевать и на чашки Петри с твердой кровяной средой.

5. При биологическом методе очистки используют морских свинок (П. А. Волосков, 3. С. Конвова, 1965) или белых мышей (А. В. Голиков, 1965; П. А. Волосков, 3. С. Коннова, 1968):

а) двум молодым морским свинкам весом 200— 300 г инъецируют внутрибрюшинно 2—3 мл смешанной культуры. Через 5—10 мин свинок убивают, а из крови сердца делают посев на три-четыре пробирки с СЖН средой И три-четыре пробирки 1С ПЖА. Одновременно рекомендуется проводить посев и на пастеровские пипетки, набирая в них СЖН среду;

б) четырем белым мышам весом 20—22 г вводят под кожу по 0,5—1 мл смешанной культуры. Мышей убивают через 30, 40, 50 и 60 мин, а затем осуществляют высев из крови сердца от каждой мыши на две пробирки с СЖН средой;

в) четырем белым мышам инъецируют внутрибрюшинно по 0,5 мл смешанной культуры. Мышей убивают через 5—10 мин. Осторожно вскрывают грудную полость, не затрагивая брюшную (в противном случае посевы будут загрязнены), и делают посев крови из сердца на СЖН среду и ПЖА по четыре пробирки;

г) смешанную культуру в дозе 0,1 мл при помощи опаянной пастеровской пипетки вводят в вагину трем- четырем мышам. На следующий день введение культуры повторяют. Через 6—7 дней мышей убивают, вскрывают брюшную полость, глазными ножницами вырезают кусочки рогов матки и высевают на пять-шесть пробирок с полужидким агаром. Рост проверяют на третий, шестой, девятый дни. По данным М. А. Лучко (1972), из рогов матки выделяли чистые культуры вибрионов.

Из препуциальной слизи и спермы быков иногда получают атипичные культуры вибрионов, которые по одному или двум биохимическим показателям не соответствуют тестам, принятым для того или иного типа вибрионов. В этих случаях можно полагать, что мы имеем дело с политипной культурой вибрионов. Такую культуру можно разложить на составные типы путем рассева на чашках Петри или провести два-три пересева на ПЖА с 10% желчи.

Вернуться к содержанию >>>

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2018