Приготовление сердечной воды. Говяжье сердце суточного созревания отделяют от жира, измельчают и пропускают через мясорубку. Заливают двойным количеством холодной водопроводной воды (на 1 кг мяса 2 л воды) и настаивают 15—16 ч, затем смесь 1 ч кипятят. Отмечают первоначальный объем жидкости, в случае выкипания доливают дистиллированную воду.
После кипячения фильтруют через бумажный фильтр, разливают по бутылям и стерилизуют 30 мин при давлении в 1 атм.
Приготовление печеночной воды. Говяжью печень режут на кусочки. Заливают равным количеством дистиллированной воды, затем 1 ч кипятят. Также отмечают первоначальный объем, а при выкипании до метки доводят дистиллированной водой. Фильтруют через бумажный фильтр, разливают по бутылям и при давлении в 1 атм (120°) стерилизуют 30 мин.
Приготовление растворов. На дистиллированной воде в отдельных флаконах из темного стекла готовят 2%-ный раствор сернокислого закисного железа, 0,5%-ный раствор сафранина Т и 0,2%-ный раствор новобиоцина. Все растворы можно хранить 1 месяц в холодильнике.
Приготовление среды. На 1 л СЖН среды берут по 250 мл печеночной и сердечной воды, прибавляют 500 мл водопроводной воды, 10 г пептона и 5 г поваренной соли. Отмечают первоначальный уровень. Кипятят 15 мин, доливают дистиллированной водой до первоначального уровня, затем лакмусовой бумажкой ориентировочно определяют рН. Подщелачивают среду 20%-ным раствором едкого натра, добавляя его небольшими порциями до тех пор, пока бумажка не покажет нейтральную реакцию. Когда грубо установлена нейтральная реакция среды, приступают к точному определению рН по рН-метру, доводя его до 7,0. Если рН испытуемой жидкости выше 7,0, то среду подкисляют 20%-ным раствором соляной кислоты. При каждом введении щелочи или кислоты среду тщательно перемешивают. После установления нужного рН в среду добавляют 1,5 г агар-агара и кипятят до полного растворения, снимают с огня, отмеряют 985 мл среды и вводят по 5 мл 2%-ного раствора сернокислого закисного железа, 0,5%-ного раствора сафранина Т и 0,2%-ного раствора новобиоцина. Среду тщательно встряхивают, фильтруют через бумажный фильтр, разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют 25 мин при 0,8 атм. Среда имеет розовый цвет, рН среды после стерилизации 6,8—7,0.
При росте вибрионов через 24—48 ч цвет среды не изменяется; если же в отдельных пробирках наблюдается рост посторонней микрофлоры, цвет среды переходит в ярко-желтый.
Результаты исследований патологического материала на разных средах представлены в таблице 1. Из приведенных данных видно, что при применении СЖН среды результативность исследования препуциальной слизи по сравнению с исследованием на ПЖА была выше в 2,8 раза, спермы —в 12,2, органов убитых коров и абортированных плодов крупного рогатого скота — в 5. слизи шейки матки, больных вибриозом коров, — в 10 и абортированных плодов овец — в 2 раза.
Таблица I. Выделяемость чистых культур вибрионов на различных питательных средах
Всего на СЖН среде было проверено 2333 пробыразличного материала, при этом на СЖН среде выделено 262 (11,2%) культуры вибрионов, на ПЖА—82(3,5%) и на ПЖА с бриллиантовой зеленью в разведений 1 : 50 ООО — 61 (2,6%)- Более низкий процент выделения культур на ПЖА с бриллиантовой зеленью посравнению даже с ПЖА объясняется ингибирующимдействием препарата на вибрионов.
При бактериологических исследованиях для выращивания микроорганизмов (вибрионов, бруцелл и др.)необходимо создавать анаэробные условия, а для вибрионов и бруцелл добавлять еще 10—15% углекислогогаза. В. Пластридж и др. (1961 —1962), Д. Ловел(1965) предлагают выращивать вибрионы в атмосферес 5% кислорода, 10% углекислого газа и 85% азота. Втаком составе атмосферы даже на твердых средах вибрионы способны развиваться без добавления тиоглико-лята натрия и дефибринированной крови. Г. Плюмери др. (1962) получили хорошие результаты при культивировании вибрионов в атмосфере, состоящейjH3 25%воздуха, 10% углекислого газа и 65% азота.
А. В. Голиков (1969) рекомендует для этих целейприменять вакуумный термостат. Прибор состоит извакуумной камеры размером 50 X 27 X 37 с герметической дверкой на четырех болтах. В дверку вмонтировано смотровое стекло с резиновой прокладкой. В камере имеется термометр. Давление измеряют вакуумметром. Вакуумная камера встроена в термостат с водянымобогревом. К вакуумной камере через патрубок манометраподведены баллоны с углекислым газом, азотом и кислородом. Для откачки воздуха применяется электронасос.В вакуумную камеру помещается 600 пробирок или до150 чашек Петри.
При исследовании абортированных плодов с использованием вакуумного термостата число положительныхэкспертиз (вибриоз, бруцеллез) составило 64,4%,
Использование вакуумного термостата создает большие удобства при работе в лаборатории, повышает производительность труда, дает возможность проводитьмассовые исследования поступающего материала, принеобходимости он работает и как обычный термостат.Для повседневной работы в лабораториях под вакуумный термостат можно приспособить польский сушильный шкаф марки НЗВ.
- Подробности
- Раздел: Вибриоз животных и птицы