Вернуться к содержанию >>>

Окрашивание. Вибрионы окрашиваются по Граму отрицательно. Хорошо воспринимают все анилиновые краски. Наиболее простой метод — окраска фуксином Циля, разведенным 1:5, генцианвиолетом и спиртовым раствором метиленовой сини. При окрашивании серебрением в модификации Морозова жгутики заметны уже при увеличении Х900—1200.

Некоторые авторы предложили прижизненные методы окраски вибрионов. По методике Д. Бринера и др. (1955), для приготовления краски берут 0,1 г кристаллвиолета, 0,5 г метиленовой сини, 0,2 г щавелевокислого аммония, растворяют сначала в 5 мл этилового спирта, а затем в 120 мл дистиллированной воды и добавляют 187 мл физиологического раствора. П. А. Волосков (1965) для приготовления краски использовал вместо метиленовой сини 0,1 г азур-эозина, а количество щавелевокислого аммония доводил до 0,5 г.

При прижизненной окраске вибрионов каплю красителя наносят на предметное стекло, а затем вводят каплю культуры или нативного материала, перемешивают, накрывают покровным стеклом и просматривают под микроскопом при увеличении Х630 или Х900.

Можно наблюдать вибрионов и в висячей капле.

Культуральные свойства. Культивирование вибрионов представляет значительные трудности, так как для развития микроорганизма нужны особые условия, в смешанных культурах они не выдерживают конкурентной борьбы и быстро погибают. Вибрионы очень чувствительны к высоким температурам и щелочному рН среды. При +42°, а также при рН 7,6 рост вибрионов прекращается.

В 1947 г. В. Пластридж и другие рекомендовали полужидкий агар (ПЖА). Т. Терпстра (1951) предложил две среды: говяжий бульон, содержащий 0,2% агара и 10% крови крупного рогатого скота, и твердую среду, состоящую из 270 мл говяжьего бульона, 6 г агара, 525 мг рицинолеата натрия и 900 мг эскулина. После стерилизации прибавляли 30 мл дефибринированной крови крупного рогатого скота.

Во Франции широко применяют следующие среды Хансена и др. (1952): 1) бульон из говяжьего сердца с 0,2% агара—1000 мл, аминобензойная кислота — 0,025 г, хлористый цистеин — 0,5, сульфит натрия — 0,1, тиогликолевая кислота — 0,5, растворимый крахмал—1 и аутолизат пивных дрожжей — 5 г при 118° стерилизуют 25 мин, рН 7,3); 2) бульон из сердца быка — 1000 мл, триптикоза—17 г, фитон — 3, глюкоза—б, поваренная соль — 2,5, тиогликолят натрия —0,5, цистнн — 0,25, сульфат натрия —0,1 и агар — 0,7 г. Культивирование в первой среде проводят при обычной атмосфере или в атмосфере с 10% углекислого газа. Выращивание возможно также после замены 3,5 частей воздуха азотом (откачивают воздух до 30 мм ртутного столба, а затем азотом доводят давление до нормального) .

А. Флорент (1957) использовал твердую среду из бульона говяжьего сердца (500 г на 1 л воды). На 1 л бульона добавляют 10 г пептона и 20 г агара, рН 6,8. Перед употреблением в 100 мл среды растворяют 50 мг дрожжей, 50 тиогликолята натрия, 10 сульфата натрия Я 50 мг хлористого цистеина, стерилизуют среду 15 мин при 115°. После этого в среду при 60° вводят 10 мл де- фибринированной крови овцы и 1,25 мл 2,2%-ного раствора бриллиантового зеленого. Среду разливают в чашки Петри, посев производят на следующий день. После посева чашки ставят в эксикатор, 10% атмосферы которого замещают азотом. Рост вибрионов появляется через 72 ч. На этой среде автор выделял вибрионы из патологического материала в 66, а методом биопробы— в 68% случаев.

Т. Хубриг и др. (1956) применяли среду следующего состава: 1 л мясного бульона, 10 г пептона, 2 г соли, 2 г фосфорнокислого натрия и 2,5 г агара, рН 7,2. После автоклавирования в среду вводили 40 мл дефибриниро- ванной крови лошади.

С. Денис и др. (1959) описали среду, состоящую из 1 л дистиллированной воды, 10 г пептона, 5 г экстракта дрожжей, 2 г сукцината натрия, 10 мг сульфата магнезии и 10 мг хлористого кальция. После стерилизации в среду прибавляли 10 мг 10%-ного раствора цистина, рН среды 7,0.

П. А. Триленко (1961) рекомендовал полужидкий агар следующего состава: мясной бульон — 25 мл, печеночный отвар — 25, водопроводная вода—50 мл, пептон— 1%, хлористый натрий—-0,5, агар — 0,15—0,2%, рН 7—7,2. Среду разливают столбиком по 5—7 мл и 20 мин стерилизуют при 115°. Можно мясной бульон заменять отваром мышцы сердца крупного рогатого скота. Данная среда широко применяется в лабораториях Советского Союза.

По указанному принципу готовят и твердую среду» добавляя в нее 2% агара, 10 — аминопептида, 10 — обезжиренного молока или 10% дефибринированной крови крупного рогатого скота.

М. Балчев (1967) для выявления сероводорода предложил такую среду: мясная вода — 250 мл, пептон — 15 г, цистин — 0,2, натрий хлористый — 3, натрии фосфорнокислый двузамещенный — 2, натрий серноватисто- кислый (гипосульфит) — 1, железо лимонноаммиачное (зеленое) — 1, ага.р-^1, феноловый красный — 0,005 г и дистиллированная вода — до 1 л; после стерилизации рН среды — 7,2—7,4. Штаммы вибрионов, выделяющие сероводород, вызывают сильное почернение данной среды уже через 48 ч.

Для приготовления питательных сред биологические учреждения расходуют значительное количество высококачественного мяса и печени. Нами использовались для приготовления сред беременные (1—4 месяца) матки крупного рогатого скота вместе с амниотической жидкостью и эмбрионом, которые брали на мясокомбинатах, где их утилизуют.

По данным Р. М. Ибрагимова (1969), в маточноамнио-эмбриональном экстракте по сравнению с отваром из мяса больше цистина — на 187,5%, глутамина — на 186,3, тирозина — на 152, фенилаланина, лейцина и изолейиина— на 302,3%. Количественный состав лизина, треонина, метионина и валина идентичен, а гисти- дина, аргинина, серипа и аланина — несколько меньше. Предполагается, что рост вибрионов на средах, приготовленных из маточно-амнио-эмбрионального экстракта, улучшает цистин, стимулирующий развитие большинства видов грамотрицательных микроорганизмов.

А. В. Голиковым (1969) предложена также сафранино-железо-новобиоциновая среда (СЖН среда), которая готовится следующим образом.

Вернуться к содержанию >>>

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2018