Семейство Babesiidae (Piroplasmidae)

Передача инвазии осуществляется клещами трансовариально; преэритроцитарные многоядерные стадии развития в позвоночном хозяине отсутствуют.

Род Babesia. Для представителей рода характерны развивающиеся в эритроцитах парные грушевидные стадии, соединённые тонкими цитоплазматическими мостиками. Размеры грушевидных стадий, расположение их в эритроцитах и относительно друг друга служат ведущим диагностическим признаком вида бабезий (прил., рис. 3, 4).

В данном роде представлены виды пироплазмид, диагностируемые в России как возбудители заболеваний (бабезиидозов) животных.

В. bovis (Fransaiella colchica) - паразитирует у крупного рогатого скота. Расположение паразитов в эритроцитах обычно центральное. Угол расхождения парных грушевидных стадий, как правило, тупой, размер их обычно равен радиусу эритроцита; размеры других стадий варьируют в пределах 1,4-2,8 x 1,3-1,5 мкм.

В одном эритроците чаще встречается 1-2, реже 3-4 паразита. Поражённость эритроцитов редко превышает 4-5 %.

В. bigemina (Piroplasma bigeminum) - паразитирует у крупного рогатого скота. Расположение паразитов в эритроцитах обычно центральное. Угол расхождения парных грушевидных стадий острый, размер их превышает радиус эритроцита; размеры других стадий такой же величины.

В одном эритроците чаще 1-2 паразита, реже - до 3. Поражённость эритроцитов в пределах 10-15 %.

В. divergens (Babesiella bovis) - паразитирует у крупного рогатого скота. Расположение в эритроцитах периферийное - бабезии как бы сидят на эритроците. Угол расхождения между парными грушевидными стадиями тупой, размер их меньше радиуса эритроцита; размеры других стадий 1,5-2,4 x 0,4-1,12 мкм.

В одном эритроците до 4 бабезий. Заражённость эритроцитов 7-15 %, но может достигать 40 %.

В. ovis (Babesiella ovis) - паразитирует у овец и коз. Расположение в эритроцитах периферийное. Угол расхождения парных грушевидных стадий тупой, размер их меньше радиуса эритроцита; размеры других стадий 1,0-2,5 мкм.

В одном эритроците 3-4 паразита. Заражённость эритроцитов от 1 до 5 %.

В. motasi (Piroplasma ovis) - паразитирует у овец и коз. Расположение в эритроцитах центральное. Угол расхождения пар-ных грушевидных стадий острый, размер их равен или превышает радиус эритроцита; размеры других стадий 2,5-4,0 мкм.

В одном эритроците от 1 до 4 паразитов. Заражённость эритроцитов достигает 15-45 %.

В. caballi (Piroplasma caballi) - паразитирует у лошадей. Расположение в эритроцитах центральное. Угол расхождения парных грушевидных стадий острый, размер больше радиуса эритроцита

(2,5-4,0 мкм).

В одном эритроците от 1 до 3 бабезий. Заражённость эритроцитов от 0,5 до 10 %.

В. canis (Piroplasma canis) - паразитирует у собак. Расположение парных грушевидных стадий центральное, угол расхождения острый, размер больше радиуса эритроцита.

В одном эритроците от 1 до 16 бабезий. Заражённость эритроцитов достигает 6-10 % (прил., рис. 13).

В. trautmanni (Piroplasma suis) - паразитирует у свиней. Расположение парных грушевидных форм центральное, угол расхождения острый, размер больше радиуса эритроцита (до 6 мкм). На пике паразитемии преобладают грушевидные формы (до 90 %).

В одном эритроците от 1 до 8 бабезий. Заражённость эритроцитов высокая - до 65 %.

Развитие в организме позвоночных. Клещи со слюной инокулируют животным инвазионные формы бабезий - «спорозоиты». («Спорозоиты» - не верный, но устоявшийся термин, поскольку истинные спорозоиты образуются у споровиков в результате полового размножения, которого, по мнению большинства протозоологов, нет у пироплазмид). «Спорозоиты» (мерозоиты) проникают в эритроциты, превращаются в трофозоиты (подвижные вегетативные стадии амебовидной формы с псевдоподиями), которые питаются, развиваются и размножаются бинарным делением или почкованием. Образовавшиеся особи - мерозоиты после разрушения эритроцита внедряются в новые эритроциты, превращаются в трофозоиты и вновь делятся, образуя новые ме-розоиты и обусловливая развитие паразитемии и болезненного процесса у животных.

Развитие в клещах. Бабезииды, попав в организм клеща вместе с эритроцитами позвоночного хозяина, первоначально проходят бинарное и множественное деление в просвете кишечника и его эпителиальных клетках. Образовавшиеся сигаровидные и булавовидные стадии мигрируют в различные органы, где продолжается их деление. В слюнных железах формируются мелкие одноядерные инвазионные формы - «спорозоиты». Бабезии в яйцевых клетках при дальнейшем метаморфозе клеща обеспечивают трансовариальную их передачу клещам следующего поколения.

Д и а г н о с т и к а. Для обнаружения бабезиид исследуют мазки крови. Кровь берут из периферических сосудов (кончика уха или хвоста). На месте взятия крови выстригают волосы, очищают кожу ватным тампоном, смоченным водой, затем спиртовым тампоном, обезжиривают кожу эфиром, дают высохнуть и только после этого делают прокол поверхностной вены стерильной иглой или надрез кожи ножницами или лезвием бритвы. Для исследования обязательно берут первую каплю крови, так как в ней содержится значительно больше кровепаразитов, нежели в последующих каплях. Кроме того, делают дополнительно 2-3 мазка.

От погибших животных делают мазки из крови при разрезе селезенки, печени, почек, из капилляров головного и костного мозга, но не позже 4-6 часов после смерти, так как после этого срока в жаркие дни возможен полный лизис паразитов. В этих случаях рекомендуется делать мазки из крови периферических сосудов венчика копыт или конца культи хвоста, где кровепаразиты сохраняются дольше.

Для приготовления тонких мазков обезжиренным предметным стеклом прикасаются к выступившей капле крови, располагая ее ближе к концу стекла. Суженным концом шлифованного стекла прикасаются к капле (кровь должна равномерно распределиться между стеклами) и под углом 45° продвигают его по предметному стеклу, пока капля не иссякнет. Равномерность нажима и продвижения шлифованного стекла обеспечивает приготовление качественного мазка, постепенно истончающегося и оканчивающегося в виде бахромы (прил., рис. 1).

Приготовленные мазки высушивают (не менее 10 мин при комнатной температуре), этикетируют (простым карандашом, иглой, скальпелем) и фиксируют (метиловым спиртом 3-5 мин или спирт-эфиром 10 мин), погружая мазки в фиксирующие жидкости или наслаивая их на мазок высоким слоем.

Фиксированные мазки окрашивают, используя различные краски. Наиболее распространенный метод окрашивания - по Романовскому - Гимза. Используется готовый раствор краски одноименного названия. Перед употреблением краску разбавляют из расчета 1 капля на 1 мл дистиллированной воды. Различные серии краски по своим красящим свойствам не одинаковы. Поэтому иногда приходится брать ее 2-3 капли на тот же объем воды, но не более, так как в концентрированных растворах краска выпадает в осадок. Рабочий раствор краски готовят непосредственно перед употреблением. На окраску одного мазка необходимо 4-5 мл красящего раствора.

Окрашивание проводят в кюветах (чашках Петри), покрывая мазки высоким слоем краски или подслаивая краску под перевернутые мазки, размещенные на спичках (без головок) или отрезках предметных стекол; второй способ окраски предпочтителен - он предохраняет мазок от загрязнения выпадающим осадком краски. Экспозиция окрашивания в пределах 15-60 мин, что зависит от качества краски, поэтому время окрашивания устанавливается экспериментальным путем для каждой партии (флакона) краски. После окраски мазки споласкивают дистиллированной водой, ставят почти вертикально на фильтровальную бумагу и выдерживают до полного высыхания; в случаях появления на бумаге следов краски мазки вновь ополаскивают и ставят для высушивания.

Исследование мазка начинают под малым увеличением микроскопа. В наиболее тонкой части мазка (в концевой части или в его бахромке) находят хорошо окрашенный участок, который затем исследуют под иммерсионным объективом с окуляром х 7 или х 10. Просматривают несколько полей зрения - до обнаружения типичных форм кровепаразитов.

Правильная окраска узнается по внешнему виду. Макроскопически мазок должен быть окрашен в розовый цвет с незначительным фиолетовым оттенком. Пироплазмиды отчетливо выделяются на розовом фоне эритроцитов в виде контурирующих образований, состоящих из протоплазмы сине-фиолетового цвета, иногда с вакуолью в центре, и ядра в виде разнообразных по форме включений хроматина красно-рубинового или красно-фиолетового цвета.

В перекрашенных мазках эритроциты синего цвета, и в них трудно различить паразитов. Для обесцвечивания мазки погружают на 1-2 секунды в 80°-ный спирт или воду, подкисленные уксусной кислотой (на 100 мл спирта или воды - 2 капли кислоты). Вынутые мазки немедленно обмывают водой, высушивают и исследуют. При недостаточном обесцвечивании мазка эту процедуру повторяют.

За пироплазмид (здесь мы интерпретируем не только бабезиид, а представителей всего отряда Piroplasmida) принимаются лишь те объекты, которые имеют соответствующую форму, типично окрашены и располагаются внутри эритроцита; последнее устанавливают при подъёме тубуса микроскопа - объект признаётся внутриэритроцитарным при одновременном исчезновении его и эритроцита из поля зрения.

Пироплазмиды, как и другие кровепаразиты, окраску воспринимают дифференцированно, то есть восприятие окраски у ядер и протоплазмы не одинаково. Инородные образования окрашиваются, как правило, однородно и часто дают металлический отблеск.

Каждую обнаруженную форму квалифицируют как эндоглобу-лярное простейшее. К числу дифференциально-диагностических признаков пироплазмид относятся:

1)    определённый состав форм, присущих паразиту;

2)    наличие характерных конечных форм деления (двойные грушевидные у бабезиид, мальтийский крест у нутталлий, гранатные тела у тейлерий);

3)    доминирующий угол расхождения у двойных (парных) грушевидных форм (острый или тупой);

4)  преобладающее местоположение паразита в эритроците (центральное или периферическое);

5)    длина парных грушевидных форм по сравнению с радиусом эритроцита (больше или меньше радиуса);

6)    количество хроматиновых скоплений в паразите (одно, два и более);

7)    степень поражённости эритроцитов паразитами (путём подсчёта их числа в ста полях зрения микроскопа), выраженная в процентах.

При микроскопии мазков крови необходимо дифференцировать анаплазмоидные формы некоторых пироплазмид от имитирующих непротозойных образований, от посторонних включений и всевозможных артефактов. Среди них:

1)    тельца Жолли - круглые или овальные образования, окрашивающиеся в интенсивный сине- или темно-фиолетовый цвет, реже в ярко-красный; располагаются в протоплазме эритроцитов большей частью одиночно, иногда с двумя-тремя тельцами или в виде мелкой зернистости;

2)    базофильная зернистость (пунктуация) - представлена в виде мелких, различной величины и формы включений тёмно-синего цвета, в беспорядке разбросанных по всей площади эритроцита и хорошо заметных на розовом его фоне;

3)    кровяные пластинки (тромбоциты) выглядят как кусочки протоплазмы без ядра, овальной или круглой формы, окрашенные в розовый цвет, содержат небольшое количество зёрнышек; находятся не в эритроцитах, а в плазме крови.

При микроскопии мазков обращается внимание на изменения качественного состава крови: анизацитоз, полихромазия, пойкилоцитоз, в лейкоцитарной формуле сдвиг влево.

Кроме микроскопии мазков крови в лабораторной практике используются и серологические методы диагностики РСК, РДСК, РНГА, РИФ, ИФА.

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2018