С использованием трансмиссионной электронной микроскопии проведена оценка эффективности ассоциированных противовирусных вакцин.

Иммунизация, инактивированная эмульсин-вакцина, инфекционная бурсальная болезнь, инфекционный бронхит, инфекционный ларинготрахеит, молодняк кур, ньюкаслская болезнь, ультраструктурные изменения, электронная микроскопия.

Значительное увеличение количества вакцинных препаратов, а также полиморфизм развивающихся поствакцинальных реакций обуславливают необходимость всестороннего изучения действия вакцин на организм животных и разработки на этой основе достаточно информативных и простых лабораторных методов оценки их безвредности, реактогенности и иммунобиологической активности [1, 2, 8]. Морфологические тесты являются тем инструментом, с помощью которого можно оценить состояние птицы и прогнозировать возможные поствакцинальные осложнения [3, 5]. Поскольку систематического изучения структурных процессов в поствакцинальный период у птиц не проводилось, данная проблема довольно актуальна и нуждается в дальнейшей разработке. Следует отметить, что имеющиеся литературные данные по морфологии поствакцинальных реакций у птиц по сравнению с другими видами животных немногочисленны.

Ультраструктурная патология клетки лежит в основе всех общепатологических процессов, связанных с нарушением метаболизма, повреждением рецепторов, повышением проницаемости клеточных мембран [4]. Изменения даже в одном из циклов метаболизма всегда отражаются на состоянии всех взаимосвязанных структур клетки, вызывая определенные срывы в деятельности ткани, органа и организма в целом. В связи с этим особый интерес представляет изучение ультраструктурных изменений в клетках при вакцинации и иммунокоррекции.

Цель работы - явилось изучение ультраструктурных изменений в организме молодняка кур при использовании ассоциированных противовирусных вакцин и иммуностимулятора натрия тиосульфата.

Материал и методы.

Исследования были проведены в серии из 3 опытов. Для иммунизации птиц использовали следующие биопрепараты: жидкую инактивированную ассоциированную эмульсин-вакцину ФГУ ВНИИЗЖ против ИББ, ИБК и БН (1 опыт); жидкую инактивированную ассоциированную эмульсин-вакцину против ИБК, ИББ, ИЛТ и БН, разработанную в ИЭВ им. С.Н. Вы- шелесского НАН Беларуси (2 опыт); жидкую инактивированную ассоциированную эмульсин-вакцину НПП «АВИВАК» против ИББ, ИБК и БН (3 опыт). В каждом опыте было использовано 600 птиц 130-158-дневного возраста, подобранных по принципу аналогов и разделенных на 3 группы (две группы - опытные и одна - контрольная). Молодняк кур 1 группы (200 птиц) иммунизирова-ли одной из ассоциированных вакцин совместно с натрия тиосульфатом (в 7%-й концентрации в вакцине). Предварительно 450 мл вакцины (флакон - 900 доз) смешивали с 112,5 мл свежеприготовленного стерильного водного раствора, содержащего натрия тиосульфат (в количестве 35 %). Полученную смесь вводили однократно, внутримышечно, в дозе 0,6 мл, в область грудной мышцы. Птице 2 группы (200 птиц) ассоциированную вакцину вводили согласно Наставлению по ее применению, однократно, внутримышечно, в область бедра, в дозе 0,5 мл, без иммуностимулятора. Интактная птица 3 группы (200 птиц) служила контролем. При проведении исследований в 1-3 опытах вакцинацию птиц опытных групп проводили в 130-дневном возрасте. На 3, 7, 14, 21 и 28 дни после вакцинации по 4-5 птиц из каждой группы убивали. Для исследования в трансмиссионном электронном микроскопе вырезали кусочки органов размером не более 1-2 мм3. Фиксацию материала проводили в 2 %-м растворе глютарового альдегида на фосфатном буфере (рН=7,3), дофиксацию - в 1 %-м растворе тетраокиси осмия (0s04) [6, 7]. После обезвоживания в спиртах кусочки заключали в смесь смол (аралдит М и аралдит Н). Для полимеризации смол использовали уплотнитель DDSA и катализатор DMP 30. Ультратонкие срезы готовили на ультрамикротоме «LKB-4». Для контрастирования срезов использовали уранилацетат и цитрат свинца [6]. Изучение срезов проводили на трансмиссионном электронном микроскопе «JEM-ЮОСХ». Для ультрамикрофотографирования использовали тонкослойные стеклянные диапозитивные фотопластины типа «МР». После проявления фотопластин проводили оцифровку негативного изображения фотосканером «EPSON 4990 PHOTO». Позитивное изображение оцифрованных снимков получали с помощью программы «Adobe Photoshop CS3».

Результаты исследований показали, что на месте инъецирования жидкой инактивированной эмульгированной вакцины ИББ, ИБК, ИЛТ и БН совместно с натрия тиосульфатом и без него (2 опыт) на 3 и 7 дни опыта преобладали явления серозного отека, что проявлялось в расширении перимизия. В отдельных участках поперечно-полосатой мышечной ткани обнаруживалась очаговая фрагментация волокон с образованием компактных конусовидных структур. Среди фрагментированных волокон регистрировались макрофаги, в ядрах которых преобладал эухроматин. Заметен был активный фагоцитоз поврежденных участков волокон. В отдаленные сроки исследований (на 14 и 21 дни эксперимента) на месте разрушенных и лизированных структур в большом количестве появлялись фибробласты, активно продуцирующие коллагеновые волокна. При этом ядра клеток содержали диспергированный хроматин.

Гораздо более выраженные и продолжительные по времени (на 3-14 дни) изменения деструктивного характера отмечались в месте введения вакцины ФГУ ВНИИЗЖ против ИБК, ИЛТ и БН (1 опыт). При этом повсеместно обнаруживались фрагменты ядер, органелл, волокон. Компоненты некротического детрита активно утилизировались макрофагами. Применение натрия тиосульфата совместно с ассоциированными вакцинами способствовало развитию менее выраженных ультраструктурных нарушений в региональных месту введения биопрепаратов тканевых образованиях. На 21 и 28 дни эксперимента на месте введения указанной вакцины продолжали выявляться макрофаги и фибробласты, замещающие поврежденные участки.

Использование эмульсин-вакцины НПП «АВИВАК» против ИББ, ИБК и БН (3 опыт) вызывало слабо выраженную ультраструктурную перестройку. Так, на 3-14 дни эксперимента в ткани с места инъекции этой вакцины выявлялись процессы деструкции элементов дермы. Отмечено появление макро
фагов с большим количеством фагосом, а на 21-й день - единичных фибробластов с секреторными пузырьками и развитым пластинчатым комплексом.

В селезенке кур контрольных групп во все сроки исследований ведущие структурные компоненты паренхимы и стромы выделялись достаточно четко. Больший объем красной пульпы занимали синусоидные капилляры. Эндотелиальные клетки имели множество лизосом и ядро с конденсированным хроматином. Просветы капилляров были заполнены, в основном, эритроцитами. Каркас пульпы формировался ретикулярными клетками. В селезенке животных, иммунизированных против ИББ, ИБК, ИЛТ и БН (2 опыт) на 3-й день опыта отмечалось увеличение количества макрофагов, в крупных ядрах которых преобладал диспергированный хроматин. Такие клетки содержали множество лизосом. Их плазмолемма образовывала контакты с плазмолеммой лимфобластов. Применение указанной вакцины приводило также к увеличению количества плазмобластов и ретикулярных клеток. Плазмобласты отличались более темным ядром, содержащим несколько ядрышек. Цитоплазма этих клеток обладала осмиофильностью, содержала развитую гранулярную цитоплазматическую сеть. Цитоплазма ретикулоцитов выглядела более рыхлой, имела светлую окраску. Ядро содержало преимущественно диспергированный хроматин. Наиболее яркие ультраструктуриые изменения обнаруживались в селезенке птиц при использовании отечественной ассоциированной вакцины и натрия тиосульфата. При иммунизации птиц с использованием вакцин против ИБК, ИББ и БН, разработанных в ФГУ ВНИИЗЖ и НПП «АВИВАК» (1 и 3 опыты) в красной пульпе отмечалась умеренная макрофагальная реакция на 3 день эксперимента.

В образцах печени интактных животных гепатоциты имели четкие контуры. Их плазмолемма прилегала достаточно тесно друг к другу. Ядра гепатоцитов имели 1-2 ядрышка и диспергированный хроматин. В цитоплазме клеток четко просматривались гранулярная цитоплазматическая сеть, аппарат Гольджи, митохондрии. У молодняка кур, иммунизированного ассоциированной вакциной ФГУ ВНИИЗЖ против ИББ, ИБК и БН (1 опыт), на 3-й и 7-й дни эксперимента наблюдалось почти полное разрушение митохондрий. Митохондрии являются высокочувствительными органеллами, подверженными набуханию, конденсации или деструкции в условиях физиологического напряжения, стресса, гипоксии [4]. Цитоплазма клеток выглядела набухшей, ядрышки в ядре отсутствовали. Сходные, но менее выраженные изменения наблюдались у птиц после ассоциированной иммунизации совместно с натрия тиосульфатом, а также после применения вакцины НПП «АВИВАК» (3 опыт). Митохондрии выглядели нечеткими, кристы - неразличимыми. Параллельно регистрировалась фрагментация гранулярной цитоплазматической сети, деформация пластинчатого комплекса. При этом паренхима органа на 7-14-й дни эксперимента была инфильтрирована единичными лимфоцитами и лимфобластами. У молодняка кур, получавшего ассоциированную вакцину против ИББ, ИБК, ИЛТ и БН и натрия тиосульфат (1 опыт), во все сроки исследований существенных ультраструктурных изменений в печени не наблюдалось.

При электронной микроскопии почек птиц наиболее четко выделялись эпителиоциты мочеобразующих канальцев. В цитоплазме нефроцитов выявлялись в большом количестве митохондрии, рибосомы и пиносомы. На апикальном полюсе эпителиальных клеток отчетливо просматривались микроворсинки. В почках молодняка всех подопытных групп на 3- и 7-й дни после введения вакцин отмечено набухание подоцитов, расширение перинуклеарных пространств. Указанные изменения свидетельствует о развитии застойных явлений в почках вакцинированных животных. Контуры крист митохондрий выглядели размытыми. Повреждение митохондриального аппарата связано, по- видимому, с нарушением обмена энергии, сопровождающего развитие вакцинного стресса. При этом наиболее выраженные ультраструктурные изменения наблюдались в почках животных, получавших ассоциированные биопрепараты против ИББ, ИБК и БН, разработанные в ФГУ ВНИИЗЖ и НПП «АВИВАК». При этом ассоциированная иммунизация совместно с иммуностимулятором натрия тиосульфатом профилактировала развитие ультраструктурных нарушений в почках подопытного молодняка кур. На 7- и 14-й дни опыта в пространствах между эпителиальными клетками появлялись дифференцированные формы лимфоидных клеток с узким ободком цитоплазмы.

В поджелудочной железе интактного и подопытного молодняка кур во все сроки исследований хорошо визуализировались эпителиоциты экзокрин- ных отделов. Отмечалось достаточно тесное прилегание плазмолемммы соседних эпителиальных клеток. В ядрах эпителиоцитов присутствовали как диспергированный, так и конденсированный хроматин. У иммунизированных животных клетки обладали достаточно высокой секреторной активностью, о чем свидетельствует высокий уровень развития гранулярного эндоплазматического ретикулума и пластинчатого комплекса. В цитоплазме клеток секреторных отделов четко выявлялись гранулы зимогена. Применение ассоциированных противовирусных вакцин не вызывало ультраструктурных изменений в поджелудочной железе молодняка кур.

Выводы

Ультраструктурные изменения в организме птиц, иммунизированных ассоциированной вакциной ФГУ ВНИИЗЖ против ИББ, ИБК и БН характеризи- руются деструкцией мышечных волокон и дермы с появлением некротического детрита, макрофагальной реакцией с последующей фибротизацией в тканях на месте введения вакцины, разрушением митохондрий в гепатоцитах и эпителии мочеобразующих канальцев, набуханием подоцитов в сосудистых клубочках почек. При использовании вакцины против ИББ, ИБК, ИЛТ и БН (ИЭВ им. С.Н. Вышелесского) развиваются нарушения меньшей тяжести: се-розный отек, частичная фрагментация поперечно-полосатых волокон в ткани на месте введения указанных биопрепаратов, набухание митохондрий с нечетким рисунком крист в эпителиоцитах печени и почек. Кроме того, применение вышеуказанных вакцин способствовало накоплению плазмобластов в селезенке и лимфатизации почек. Использование вакцины НПП «АВИВАК» против ИББ, ИБК и БН вызывало слабо выраженную ультраструктурную перестройку в ткани на месте ее введения, селезенке, печени, но в то же время приводило к серьезным повреждениям митохондриального аппарата в эпителиоцитах. Натрия тиосульфат, используемый совместно с ассоциированными противовирусными вакцинами, снижает их остаточные реактогенные свойства и предупреждает развитие ультраструктурных повреждений в тканях на месте введения вакцин, в клетках печени и почек. Иммунизация птиц совместно с натрия тиосульфатом способствует также увеличению числа плазмобластов в селезенке.

Список литературы
1.    Бакулин В.А. Иммунодепрессивный эффект вируса инфекционной бурсальной болезни при специфической профилактике гриппа птиц / В .А. Бакулин // Материалы 6-го Междунар. ветер, конгресса по птицеводству, Москва, 26-29 апреля 2010 г. / МСХ РФ; Федер. служба по вет. и фитосан. надзору РФ; Росптицесоюз. - М., 2010.
-    С. 38-39.
2.    Вакцинация - основа эпизоотического благополучия птицехозяйств / О.Ф.Хохлачев, А.Н.Калинин, С.Н.Гаврилов // Био. - 2008. - №5. - С. 23-24.
3.    Гистологические исследования Фабрициевой бурсы при болезни Гамборо / Г.А.Красников, В.В.Герман, И.Берхане, Л.А.Ольховик// Ветеринария. - 1996. - №2. - С. 21-25.
4.    Жаров А.В. Ультраструктурная патология клетки / Жаров А.В. // Патологическая анатомия сельскохозяйственных животных; под ред. В.П.Шишкова, А.В.Жарова.
-    [4 изд., перераб. и доп.]. - М.: Колос. - Гл. 23. - С. 529-538.
5.    Красников Г.А. Патогистология органов иммунитета у кур при действии иммуносупрессивных вирусов / Г.А.Красников // Ветеринарна медицина: міжвідом. те- мат. наук. зб. - Харків, 2000. - № 78, Т. 1. - С. 173 - 180.
6.    Микроскопическая техника: Руководство / под ред. Д.С. Саркисова, Ю.Л. Петрова. - М.: Медицина, 1996. - С. 207-221, 237-238.
7.    Уикли Б.С. Электронная микроскопия для начинающих / Уикли Б.С.; под ред. В.Ю. Полякова; пер. с англ. И.В. Викторова. - М.: Мир, 1975. - С. 36-60.
8.    Эффективность ассоциированной вакцины против НБ, ИБК, ССЯ-76, ИББ и РВТ инактивированной эмульсионной серии «ПЕНТАВИС» / Д.Л.Долгов, В.В.Борисов, С.В.Фролов, А.В.Борисов // Материалы 5-го Междунар. ветер, конгресса по птицеводству, Москва, 21-24 апреля 2009 г. / МСХ РФ; Федер. служба по вет. и фитосан. надзору РФ; Росптицесоюз. - Москва, 2009. - С. 95-99.

Автор: И.Н. ГРОМОВ, С. ГЕРМАН, кандидати ветеринарных наук Витебская ордена "Знак Почета" государственная академия ветеринарной медицины

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2016