Микроскопия, исследования невидимых невооружённым глазом объектов при помощи микроскопа. Различают световую М., основанную на использовании световых лучей, и электронную М., где вместо световых лучей применяют поток электронов. Световая М. подразделяется на обычную, фазово-контрастную, аноптральную, интерференционную, поляризационную, люминесцентную, ультрафиолетовую. Непосредственной М. в световом микроскопе предшествует установление освещения.

В биологических исследованиях производят М. как живых, так и убитых микрообъектов. Исследование живых бактерий, простейших, клеток макроорганизма проводят в проходящем и отражённом свете. В первом случае изучают прозрачные объекты, приготовляя так называемые «влажные» препараты или выращивая микроколонии бактерий на тонком слое питательного агара. Примерами «влажного» препарата служат раздавленная капля и висячая капля. Более чёткие результаты прижизненного наблюдения получают при выращивании микробов в Ш образной камере Пешкова или масляной камере Фонбрюна. За микрокультурой можно вести непрерывное наблюдение, используя вместо обычного столика нагревательный или специальные инвертированные микроскопы (типа МБИ 12 и МБИ 13) с термостатом и кинокамерами. В отражённом свете исследуют непрозрачные объекты. Для повышения контрастности микрообъектов используют косое освещение, аноптральные объективы, темнопольные и фазово-контрастные устройства. Для получения дополнительных сведений о толщине, показателях преломления и двойного лучепреломления, содержании сухой массы в клетках, светопропускаемости и других физических величинах объекта используют интерференционно-поляризационную М.. Прижизненное флюорохромирование микроорганизмов сильно разбавленными растворами красителей акридинового ряда позволяет производить наблюдения за физиологией клеток с помощью люминесцентного микроскопа, а заключение бактерий в специальную камеру с инертным газом - исследовать живые клетки при помощи электронной М.. Чаще микрообъекты микроскопируют в неживом состоянии, изготовляя препараты или срезы. При использовании светлопольной М. препараты в виде тонкого мазка или среза окрашивают растворами специальных красителей. Для иммунофлюоресцентного исследования препараты обрабатывают сыворотками, мечеными флюорохромами.

Для электронной М. биологические материалы предварительно контрастируют веществами, интенсивно рассеивающими электроны. Для контрастирования в процессе фиксации липидов и белков используют четырёхокись осмия, для фосфолипидов - перманганат калия, для соединений, содержащих углеводы, - рутений красный. В момент фиксации и обезвоживания препараты окрашивают также уранилацетатом и фосфорновольфрамовой кислотой. Эффективнее контрастировать материал после изготовления Ультратонких срезов. Для изучения тонкой структуры частиц (но не тонких срезов материала) используют также негативное окрашивание (водным раствором фосфорновольфрамового натрия или урановой соли муравьиной кислоты), создающее вокруг объекта тёмный фон. Для контрастирования объектов их напыляют тяжёлым металлом или готовят из него реплики (отпечатки). В случае иммунохимического исследования на уровне электронной М. объект предварительно обрабатывают антителами, конъюгированными с ферритином, диазофенилмеркуриацетатом, пероксидазой или йодом.

Микроскопия вирусов (вирусоскопия). Морфологию вирусов изучают следующими методами электронной микроскопии: ультратонких срезов, негативного контрастирования и оттенения металлами. Метод ультратонких срезов позволяет установить строение вируса на срезе, тип его нуклеиновой кислоты, способ проникновения в клетку и выхода из неё, а также место размножения в клетке; Метод негативного контрастирования даёт высокое разрешение и позволяет изучить форму и размеры вирионов, структурную организацию их оболочек. Используя антитела, определяют локализацию антигенных детерминант в структуре вируса. Для негативного контрастирования используют очищенные и концентрированные препараты вирусов. Из контрастирующих веществ чаще применяют соли фосфорновольфрамовой и кремнийвольфрамовой кислот. Метод оттенения металлами (золотом, платиной и др.), испарением их в вакууме позволяет установить размеры и форму вирусов, используя длину полученной тени и угол, под которым велось оттенение. Существенный недостаток метода оттенения - значительно меньшее разрешение деталей структуры вируса, чем при методе негативного контрастирования.

Под термином «вирусоскопия» всё чаще стали понимать совокупность методов, с помощью которых выявляют вирусов в биологическом материале и изучают их морфологию.

Выберите букву

Статистика

Вверх

© Ветеринария 2018